載脂蛋白A5（ApoA5）基因多態(tài)性與動脈粥樣硬化性腦梗死關(guān)系的研究

洪 雁 周碧燕 李 潔 梁 智 張 千

廣西南寧市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 南寧 530022

載脂蛋白A5（ApoA5）基因多態(tài)性與動脈粥樣硬化性腦梗死關(guān)系的研究

洪 雁 周碧燕 李 潔 梁 智 張 千

廣西南寧市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 南寧 530022

目的 研究腦梗死患者的動脈粥樣硬化程度和載脂蛋白A5（ApoA5）-1131T/C和553G/T兩位點的關(guān)系。方法 選取2011-12—2013-12間我院醫(yī)學(xué)影像科計算機體層掃描和磁共振確診的腦梗死患者156例，分析其頸總動脈（CCA）和頸內(nèi)動脈（ICA）內(nèi)膜厚度（IMT）與載脂蛋白A5（ApoA5）-1131T/C和553G/T兩位點關(guān)系。結(jié)果 在-1131T/C位點基因型中，CC患者頸總動脈內(nèi)膜為（1.12±0.27）mm，TT+TC患者為（1.07±0.12）mm，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。CC患者頸內(nèi)動脈內(nèi)膜為（1.04±0.15）mm，TT+TC患者為（0.92±0.17）mm，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；另外，在553G/T位點基因型中，GG患者頸總動脈內(nèi)膜為（1.06±0.19）mm，TT+GT患者為（1.15±0.16）mm，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；GG患者頸內(nèi)動脈內(nèi)膜為（0.94±0.15）mm，TT+GT患者為（0.97±0.21）mm，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。對2組不同基因組的不同基因型患者進行相關(guān)血脂水平鑒定，發(fā)現(xiàn)-1131T/C位點基因型的兩種不同基因型的TG水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其余基因型相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。對載脂蛋白A5（ApoA5）基因的常見單倍體配型不同的患者進行CCA IMT和ICA IMT的測量發(fā)現(xiàn)，4組基因型中ICA IMT差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 載脂蛋白A5（ApoA5）基因?qū)用}粥樣硬化腦梗死關(guān)系相對較大，值得進一步研究。

腦梗死又稱缺血性腦卒中，是指局部腦組織因血液循環(huán)障礙，缺血、缺氧而發(fā)生的軟化壞死［1］。腦梗死的危害極大，由于栓子堵塞腦血管，造成大腦局部壞死，從而導(dǎo)致患者的行動、語言、視力等障礙，甚至日常生活不能自理，造成極大危害。近年來，分子生物學(xué)不斷發(fā)展，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)部分腦梗死患者的頸內(nèi)動脈和頸總動脈內(nèi)膜都發(fā)生不同程度增厚，另外發(fā)現(xiàn)，載脂蛋白A5（ApoA5）與動脈粥樣硬化關(guān)系極大［23］。ApoA5是一種有力的甘油三酯調(diào)節(jié)子，而甘油三酯恰恰是升高動脈粥樣硬化的獨立危險因素，近年來國內(nèi)和國外都已經(jīng)開展此基因和動脈粥樣硬化相關(guān)臨床試驗，我院為了更好的明確腦梗死和ApoA5間的關(guān)系，特開展本試驗，并取得一定成果，現(xiàn)報道如下。

1 資料和方法

1.1 臨床資料 選取2011-12—2013-12我院醫(yī)學(xué)影像科計算機體層掃描和磁共振共確診的腦梗死患者156例，男92例，女64例。

1.2 研究方法

1.2.1 動脈粥樣硬化的評價：我院超聲科對患者的頸內(nèi)動脈和頸總動脈進行內(nèi)膜厚度評價，得到每位患者內(nèi)膜厚度。1.2.2 基因組DNA提?。翰杉疎DTA-K2抗凝靜脈血1 mL，提取基因組NA，并于-20°保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析（PCRRFLP）：按參考文獻設(shè)計下述2對引物，-1131T/C位點P1：5c-GATTGAT-TCAAGATGCATTTAGGA-3c，P2：5c-CCC CAG-GAACTGGAGCGAAATT-3c；553G/T位點P1：5c-CA GCAACTGAAGCCCTACACG-3c，P2：5c-ATGC-CGCTCA CCAGGCTCTCG-3c。PCR反應(yīng)條件，-1131T/C位點：96e2 min，95e30s，56e30s，72e30s，循環(huán)30次，末次循環(huán)后72e延伸5min；553G/T位點：95e5min，95e30s，65e40s，72e50s，循環(huán)35次，末次循環(huán)后72e延伸7min。PCR擴增產(chǎn)物10 LL分別加入限制性內(nèi)切酶MseI5U（-1131T/C位點）和MspI5U（553G/T位點），37e消化4h。酶切產(chǎn)物經(jīng)含溴化乙錠的20g/L瓊脂糖電泳分離，經(jīng)紫外凝膠成像系統(tǒng)分析結(jié)果。并隨機挑選部分PCR產(chǎn)物送上海生物工程公司測序。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 所有資料均用SPSS 13.0軟件包進行分析。計量資料用±s表示，基因型分布經(jīng)Hardy-Weinberg平衡檢驗，不符合正態(tài)分布的指標經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換達到近似正態(tài)分布后進行數(shù)據(jù)分析，組間計量數(shù)據(jù)比較采用t檢驗或單因素方差分析；應(yīng)用基于最大期望值算法的SNP Alyze V6.0軟件構(gòu)建2多態(tài)性位點的個體單倍型。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腦梗死患者不同基因型間的CCA IMT和ICA IMT的比較 由表1可看出，在-1131T/C位點基因型中，CC患者占10.26％，TT+TC患者占89.74％，其中CC患者頸總動脈內(nèi)膜為（1.12±0.27）mm，TT+TC患者頸總動脈內(nèi)膜為（1.07±0.12）mm，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。CC患者頸內(nèi)動脈內(nèi)膜為（1.04±0.15）mm，TT+TC患者為（0.92±0.17）mm，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；另外在553G/T位點基因型中，GG患者頸總動脈內(nèi)膜為（1.06±0.19）mm，TT+GT患者為（1.15±0.16）mm，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；GG患者為（0.94±0.15）mm，TT+GT患者為（0.97 ±0.21）mm，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。以上結(jié)果表明，-1131CC基因型和-1131TT+TC基因型對ICA IMT有一定影響，-1131CC基因型能誘導(dǎo)頸內(nèi)動脈內(nèi)膜變厚，553GG基因型和553TT+GT基因型對人群的CCA IMT有一定影響，553TT+GT基因型能誘導(dǎo)患者頸總動脈內(nèi)膜變厚。

表1 腦梗死患者不同基因型間的CCA IMT和ICA IMT的比較（±s）

表1 腦梗死患者不同基因型間的CCA IMT和ICA IMT的比較（±s）

注：與對照組相比，＊P＜0.05

基因型 -1131T/C 位點基因型 553G/T 位點基因型CC TT+TC t/χ2值 P值 GG TT+GT t/χ2值 P值n 16（10.26） 140（89.74）197.28 0.000 132（84.26） 24（15.74）140.53 0.000 CCA IMT（mm）1.12±0.27 1.07±0.12 1.336 0.183 1.06±0.19 1.15±0.16 2.1825 0.0306 ICA IMT（mm）1.04±0.15 0.92±0.17 2.074 0.007 0.94±0.15 0.97±0.21 0.843 0.4006

2.2 腦梗死不同基因型間血脂水平對比 對2組不同基因組的不同基因型患者進行相關(guān)血脂水平鑒定，發(fā)現(xiàn)-1131T/C位點基因型的兩種不同基因型的TG水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其余基因型相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），說明-1131T/C位點基因型的差異會導(dǎo)致人體內(nèi)TG水平有差異，從而導(dǎo)致患者動脈粥樣硬化幾率的差異。見表2、3。

2.3 常見單倍型配對間CCA IMT和ICA IMT的比較 對載脂蛋白A5（ApoA5）基因的常見單倍體配型不同的患者進行CCA IMT和ICA IMT的測量發(fā)現(xiàn)，4組基因型中ICA IMT差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），說明不同的基因型對頸內(nèi)動脈內(nèi)膜厚度影響較大。見表4。

表2 553G/T位點基因型不同位點患者血脂水平（±s）

表2 553G/T位點基因型不同位點患者血脂水平（±s）

基因型 n TC TG HDL-C LDL-C GG 132 4.18±0.12 1.68±0.26 1.12±0.04 2.46±0.16 TT+GT 24 4.19±0.18 1.57±0.59 1.13±0.11 2.40±0.14 t值-0.3447 1.498 0.801 1.720 P值-0.7308 0.1362 0.425 0.087

表3 -1131T/C位點基因型不同位點患者血脂水平（±s）

表3 -1131T/C位點基因型不同位點患者血脂水平（±s）

注：與對照組相比，＊P＜0.05

基因型 n TC TG HDL-C LDL-C CC 16 4.17±0.14 2.18±0.15 1.04±0.12 2.26±0.13 TT+TC 140 4.18±0.16 1.72±0.27 1.05±0.13 2.27±0.14 t值-0.2395 6.684 0.2936 0.2725 P值-0.811 0.000 0.7695 0.786

表4 常見單倍型配對間CCA IMT和ICA IMT的比較（±s）

表4 常見單倍型配對間CCA IMT和ICA IMT的比較（±s）

注：與對照組相比，＊P＜0.05

基因型 單倍型配對 F值P值TG-TG TG-CG TG-CT CG-CG n 73 59 11 13 - -CCA IMT（mm）1.04±0.19 1.02±0.05 1.05±0.11 1.09±0.09 1.192 0.089 ICA IMT（mm）0.98±0.12 0.99±0.19 1.07±0.11 1.12±0.05 3.147 0.016

3 討論

2001年2個不同的研究小組先后在載脂蛋白A1/C3/A4基因簇鑒定出一個新的載脂蛋白基因apoA5基因，人類ApoA5同小鼠ApoA5基因同源性達71％，而與人類載脂蛋白4基因同源性達27％［4］。在動物實驗和人類的觀察研究中均發(fā)現(xiàn)，其與血脂尤其是TG的代謝密切相關(guān)，因而迅速受到廣泛關(guān)注。有研究表明，人ApoA5是由343個氨基酸殘基組成的單鏈多肽，其相對分子質(zhì)量約為39 000，等電點為5.9，其結(jié)構(gòu)具有多個雙性A-螺旋結(jié)構(gòu)，也有B折疊和B轉(zhuǎn)角。與其他載脂蛋白家庭成員相似，作為ApoA5活性中心的幾個A-螺旋結(jié)構(gòu)由22或11個氨基酸組成的重復(fù)短串連接，他們在疏水性和長度上都存在相當(dāng)大的差異［5］。OcBrien等用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測健康人血漿中ApoA5，其含量為24～406Lg/L［6］。對脂蛋白微粒進行檢測，發(fā)現(xiàn)ApoA5存在于極低密度脂蛋白（VLDL）、高密度脂蛋白（HDL）和乳糜微粒（CM）中。有人認為，ApoA5作為調(diào)節(jié)富含TG脂蛋白代謝過程中的一個關(guān)鍵的激活劑，可能存在一個循環(huán)再利用的機制來彌補其外周循環(huán)含量的不足［7］。

經(jīng)過研究表明，1131CC基因型和-1131TT+TC基因型對ICA IMT有一定影響，-1131CC基因型能誘導(dǎo)頸內(nèi)動脈內(nèi)膜變厚，553GG基因型和553TT+GT基因型對人群的CCA IMT有一定影響，553TT+GT基因型能誘導(dǎo)患者頸總動脈內(nèi)膜變厚，這一結(jié)論也符合曹巖巖等人的報道［8］。這可能與患者基因表達蛋白質(zhì)有所不同，-1131CC基因型表達出的蛋白質(zhì)能促進血脂在頸內(nèi)動脈內(nèi)膜沉積，553TT+GT基因型所表達的蛋白能促進血脂在頸總動脈沉積［9］。如果在彩超的診斷下發(fā)現(xiàn)頸總動脈和頸內(nèi)動脈增厚，可進行基因診斷，從而做到對腦梗死的高度重視和預(yù)防［10］。另外，我們發(fā)現(xiàn)-1131T/C位點基因型的差異會導(dǎo)致人體內(nèi)TG水平有差異，與陳玉蘭等［11］報道一致，在診斷和預(yù)防方面也有重大意義，最后試驗研究了不同單倍體間，頸總動脈內(nèi)膜和頸內(nèi)動脈內(nèi)膜的差異，4組基因型中ICA IMT具有差異［12］，也為分子生物學(xué)的研究和疾病的分子診斷提供了重要意義。

綜上所述，研究載脂蛋白A5（ApoA5）基因多態(tài)性與動脈粥樣硬化性腦梗死的關(guān)系意義重大，值得進一步研究。

［1］肖慧，谷文萍，梁靜，等.白細胞介素6基因多態(tài)性與動脈粥樣硬化性腦梗死的關(guān)系［J］.中國神經(jīng)精神疾病雜志，2011，37（1）：11-14.

［2］金磊，高月求，葛海良.白細胞介素基因多態(tài)性與腦梗死的關(guān)系［J］.診斷學(xué)理論與實踐，2011，10（2）：179-181.

［3］袁山，馬依彤.載脂蛋白A5基因多態(tài)性與甘油三酯及動脈粥樣硬化性疾病的關(guān)系［J］.中華老年多器官疾病雜志，2011，10（5）：465-468.

［4］Tsianos EV，Katsanos KH，Tsianos VE.Role of genetics in the diagnosis and prognosis of Crohn＇s disease［J］.World J Gastroenterol，2012，18（2）：105-118.

［5］王銳，張俊和，陳立杰，等.NF-κB1基因啟動子-94ins/del ATTG的基因多態(tài)性與動脈粥樣硬化性腦梗死的關(guān)系［J］.中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志，2012，19（3）：231-233.

［6］Zhang LX，Sun Y，Liang Y，et al.Relationship between dyslipidemia and gene polymorphism in Tibetan population［J］.Biomed Environ Sci，2012，25（3）：305-310.

［7］Jiang ZG，Robson SC，Yao Z.Lipoprotein metabolism in nonalcoholic fatty liver disease［J］.J Biomed Res，2013，27（1）：1-13.

［8］曹巖巖，崔廣林，王浩然，等.載脂蛋白A5-1131T＞C（rs662799）多態(tài)性與中國漢族非心源性缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)研究［J］.中國分子心臟病學(xué)雜志，2012，12（6）：356-359.

［9］邱壯麗，符家武.廣東漢族人群縫隙連接蛋白37基因多態(tài)性與動脈粥樣硬化性腦梗死的關(guān)系［J］.中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2013，30（6）：524-527.

［10］張晉霞，張志勇，劉斌，等.基質(zhì)金屬蛋白酶-1基因多態(tài)性與動脈粥樣硬化性腦梗死相關(guān)性研究［J］.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10（12）：1 491-1 492.

［11］陳玉蘭，吳俊霞.脂蛋白酯酶基因Ser447Ter多態(tài)性與缺血性腦卒中關(guān)系的Meta分析［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2013，38（17）：3 145-3 149.

［12］秦英楠，李向平.載脂蛋白A5對甘油三酯代謝的影響及其機制［J］.中國動脈硬化雜志，2010，18（6）：495-498.

（2014-07-21）

R743.33

A

1673-5110（2015）10-0044-03

廣西南寧市科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計劃項目（20123131）

【關(guān)鍵詞】腦梗死；動脈粥樣硬化；基因多態(tài)性；載脂蛋白A5