中草藥對壩上長尾雞公雞睪丸微觀結構及生殖激素分泌的影響

劉海斌， 劉海珍， 陳 亮， 李亞琪， 張立永， 趙月平

（1.河北北方學院牧業(yè)研究所，河北張家口 075000；2.陽原縣農(nóng)牧局，河北陽原 075800）

壩上長尾雞作為地方蛋肉兼用型品種目前群體數(shù)量較少，大多集中在張家口和承德地區(qū)，為農(nóng)村放牧零星飼養(yǎng)，未形成規(guī)模，數(shù)量逐漸減少，其主要品種特征是尾羽較長，公雞有2～3根大翹尾，大約長45 cm，最長的有時可達60多 厘米，一般6～7月齡達到性成熟（李枝隆等，1965）。性成熟晚導致公雞的利用率較低，是造成種質(zhì)流失的重要原因之一。研究表明，中草藥含有多種有效成分，可顯著影響下丘腦—垂體—性腺軸功能，通過受體功能調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌，促進性腺發(fā)育和性激素分泌，從而促進性成熟（馬紅霞等，2009）。本試驗研究適宜中草藥組方對壩上長尾公雞性成熟的影響，以期為中草藥添加劑的開發(fā)利用，解決壩上長尾公雞性成熟期長、繁殖率低的難題，促進壩上長尾雞養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展提供參考。

1 材料與方法

1.1 中草藥組方及用法 將黃芪、當歸、淫羊藿、枸杞子、熟地、杜仲、赤芍等中草藥按一定比例磨碎混勻，按1%的比例添加在日糧中。

1.2 分組與飼養(yǎng) 選取體重基本一致、健康的110日齡壩上長尾公雞30只，隨機分為2組，每組設3個重復，每個重復5只雞。三階梯籠養(yǎng)，自由采食和飲水，光照13 h，室內(nèi)溫度保持18～25℃。

1.3 睪丸切片的制作和觀察 分別于110、120、130日齡每組取公雞2只空腹宰殺，快速取出睪丸，固定于10%甲醛溶液中，制作睪丸組織切片，HE染色，觀察睪丸組織學變化 。

1.4 激素水平的測定 分別于120、130日齡采血，制備血漿，采用放射免疫法測定睪酮（T）、促卵泡素（FSH）和促黃體素（LH）激素水平。

1.5 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結果

2.1 睪丸曲細精管組織變化 由表1可知，對照組壩上長尾公雞110日齡曲細精管直徑為（103.32±3.64）μm，管腔空洞，管腔液較少，精原細胞單層排列，靠近基膜，出現(xiàn)較多的初級精母細胞和次級精母細胞，精子細胞較少，無精子產(chǎn)生；120日齡曲細精管直徑為（111.80±2.92）μm，精原細胞增多，產(chǎn)生大量的次級精母細胞和精子細胞，且聚集在管腔中央，無精子產(chǎn)生；130日齡曲細精管直徑達到（126.80±4.60）μm，可見有大量的初級精母細胞和次級精母細胞，精子細胞大量增殖，集中于管腔，可見有少量精子產(chǎn)生，且游離于管腔。試驗組壩上長尾公雞110日齡睪丸曲細精管直徑比對照組長1.22%，但差異不顯著（P＞0.05），管腔中有管腔液，精原細胞排列整齊，靠近基膜，出現(xiàn)較多的初級精母細胞和次級精母細胞，精子細胞較少，無精子產(chǎn)生；120日齡曲細精管管徑變粗，管腔直徑比試驗組長18.78%（P＜0.01），初級精母細胞增多，且移向管腔中央，產(chǎn)生大量的次級精母細胞和精子細胞，可見少量精子產(chǎn)生；130日齡曲細精管迅速增粗，管腔直徑比對照組長16.25%（P＜0.01），產(chǎn)生大量的初級精母細胞和次級精母細胞，精子細胞隨處可見，精子存滿管腔中央，基膜上除了有精原細胞和支持細胞外，還附有少量的初級精母細胞和精細胞。

表1 中草藥添加劑對公雞睪丸曲細精管直徑的影響 μm

2.2 中草藥對壩上長尾雞公雞外周血生殖激素分泌的影響 由表2可知，外周血漿LH和T含量隨著青年公雞日齡的增加而提高，F(xiàn)SH隨日齡的增加而降低。120日齡和130日齡FSH濃度試驗組比對照組分別提高79.69%（P＜0.05）和24.59%（P＞0.05）；120日齡和130日齡T濃度試驗組比對照組分別提高203.70%和178.95%（P＜0.01）。

表2 中草藥添加劑對壩上長尾雞公雞生殖激素分泌的影響

3 討論

本試驗表明，試驗組公雞睪丸曲精細管管徑、生殖上皮細胞等組織發(fā)育明顯優(yōu)于對照組。公雞睪丸曲細精管的發(fā)育過程是育成雞達到性成熟的主要特征。伴隨著曲細精管的發(fā)育，處于不同發(fā)育階段的精細胞出現(xiàn)。曲細精管的管壁由復層上皮組成，其中有支持細胞和不同發(fā)育時期的生精細胞，由外向里依次是精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞、精子細胞和精子。精原細胞緊靠曲細精管基膜，細胞呈圓球形，或橢圓形，著色深；初級精母細胞體積大于精原細胞，細胞呈圓球形，位于精原細胞的內(nèi)側；次級精母細胞體積較小，胞核圓形，著色較深，但較少見。精子細胞靠近腔面，體積小，圓形，核著色深。精子呈桿狀，著色深，位于管腔面或靠近基膜外的生精細胞之間。睪丸的發(fā)育和促性腺激素的分泌活動具有一定的相關性，性成熟期，精原細胞在家禽睪丸內(nèi)曲細精管中分裂增殖，最終形成精子（Decuypere 和 Scanes，1983）。

精子的發(fā)生受下丘腦—垂體—睪丸軸的調(diào)控。丘腦下部分泌促性腺激素釋放激素（GnRH）作用于垂體，刺激FSH及LH的分泌，F(xiàn)SH作用于睪丸組織的生精細胞和支持細胞，啟動精原細胞分裂增殖，并刺激精母細胞的發(fā)育。LH與睪丸間質(zhì)細胞上的LH受體結合，促進睪丸間質(zhì)細胞合成及分泌T（張慶茹，2007）。T的增加促進精子發(fā)育成熟，并促進公雞第二性征的出現(xiàn)。本研究結果表明，試驗組壩上長尾公雞外周血漿FSH、LH和T濃度均高于對照組，說明中草藥作用于公雞的腺垂體和睪丸組織，促進腺垂體分泌LH和FSH，提高睪丸支持細胞分泌T的能力。熟地、杜仲等中草藥含有鋅、銅、鐵、鉀、鈣等微量元素，這些營養(yǎng)成分在一定程度上能促進性腺的發(fā)育 （李炳如和佘運初，1984）。林春驛（2005）在公雞日糧中添加2%用黃芪、黨參、淫羊藿、菟絲子、蛇床子、甘草等中草藥組成的飼料添加劑，結果試驗組體重、睪丸重量、精液生成時間、精液品質(zhì)與對照組相比差異顯著。秦緒光等（2006）在后期種公雞日糧中添加由淫羊藿、補骨脂、茯苓、牡丹皮、澤瀉、甘草、肉桂、黃芪等組成的中草藥，能顯著提高種公雞的精液量和精子活力，以及血漿中睪酮、促黃體素、促卵泡素濃度，降低精子畸形率。血漿T濃度與血漿LH、FSH濃度呈顯著正相關。

公雞一般12周齡就具有精細胞，具有成熟的精子，但是，壩上長尾雞生長在寒冷的壩上地區(qū)，經(jīng)過多年對環(huán)境的適應，生長速度較慢，性成熟較晚，因此，精子的形成也相對較晚，表現(xiàn)在110日齡精子還沒有發(fā)育成熟。因此，添加該中草藥能夠改變下丘腦—垂體—性腺軸功能，從而促進性腺發(fā)育，有利于壩上長尾雞性成熟。

4 結論

本試驗結果表明，黃芪、淫羊藿、杜仲等組成的中草藥組方能夠促進壩上長尾公雞睪丸發(fā)育和生殖激素分泌，從而促進其性成熟。

[1]李炳如，佘運初.補腎藥對下丘腦-垂體-性腺軸功能影響[J].中醫(yī)雜志，1984，25（7）：63～64.

[2]李枝隆，朱元照，胡一化.壩上長尾雞調(diào)查報告[J].河北農(nóng)學報，1965，4（3）：23～26.

[3]林春驛.中草藥飼料添加劑對種公雞性成熟的影響[J].中獸醫(yī)學雜志，2005，46（6）：2～3.

[4]馬紅霞，賴毛華，黃婉怡，等.中醫(yī)藥促卵泡發(fā)育成熟的研究思路[J].湖南中醫(yī)藥大學學報，2009，29（4）：8～10.

[5]秦緒光，劉福柱，牛竹葉.中草藥復方添加劑對繁殖后期種公雞精液品質(zhì)及血漿生殖激素濃度的影響[J].西北農(nóng)林科技大學學報（自然科學版），2006，34（6）：36～40.

[6]張慶茹.動物生理學[M].北京：中國農(nóng)業(yè)科學技術出版社，2007.300～318.

[7]Decuypere E，Scanes C G.Variation in the release of thyroxine，triiodothyronine and growth hormone in response to thyrotrophin releasing hormone during development of the domestic fowl[J].Acta Endocrinol，1983，102：220～223.