HPLC法測(cè)定尼美舒利顆粒的含量

高 武

(國(guó)藥集團(tuán)精方(安徽)藥業(yè)股份有限公司，安徽宣城 242000)

尼美舒利是磺酰苯胺的衍生物，屬于非甾體類(lèi)解熱鎮(zhèn)痛藥(NSAIDs)，是環(huán)氧化酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)選擇性抑制劑，其作用機(jī)制為抑制合成前列腺素所需的環(huán)氧化酶(COX)，從而發(fā)揮強(qiáng)大的解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎作用。其化學(xué)名為4-硝基-2-苯氧基甲烷磺酰苯胺，由美國(guó) Piker公司開(kāi)發(fā)研制［1-2］，并于1985年首次在意大利上市，目前已在50多個(gè)國(guó)家使用廣泛使用，2005年名列世界抗炎藥銷(xiāo)售量的前5名，尼美舒利雖然銷(xiāo)售量大，但相關(guān)不良反應(yīng)報(bào)告也時(shí)有報(bào)道［3-6］。尼美舒利劑型較多，相關(guān)研究也見(jiàn)報(bào)道［7-10］。尼美舒利原料藥收載于2010年中國(guó)藥典二部，含量測(cè)定為電位滴定［11］，而尼美舒利顆粒標(biāo)準(zhǔn)收載于衛(wèi)生部新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第三十冊(cè)，含量測(cè)定為紫外分光光度法［12］。但因制劑中相關(guān)輔料對(duì)其測(cè)定有一定的影響，故本試驗(yàn)采用高效液相色譜儀測(cè)定尼美舒利的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent-1200型高效液相色譜儀;自動(dòng)進(jìn)樣器;紫外檢測(cè)器;Agilent HC-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5μm);Mettler AG 163電子天平;JL-120DT超聲儀等。

1.2 試藥 乙腈、磷酸二氫銨均為色譜純;水為重蒸餾水;尼美舒利顆粒(安徽精方藥業(yè)股份有限公司，批號(hào):120801、120802、120904、121006);尼美舒利標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院(100555-201202)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱Agilent HC-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm);乙腈—1.15 g·L-1磷酸二氫銨溶液(氨水調(diào) pH至7.0)(40∶60);檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm;流速 1.0 mL·min-1;柱溫為 30℃;進(jìn)樣量20 μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取105℃干燥2 h的尼美舒利對(duì)照品12.52 mg，置50 mL量瓶中，加60%乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取尼美舒利顆粒，研細(xì)，精密稱(chēng)取本品細(xì)粉適量(約相當(dāng)于尼美舒利12.5 mg)，置于50 mL的容量瓶中，加60%乙腈振搖使溶解，稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液5 mL置25 mL量瓶，用60%乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4 測(cè)定法 分別取對(duì)照品溶液與供試品溶液于色譜用的測(cè)試瓶中，精密量取20μL注入液相色譜儀，用上述色譜條件測(cè)定，即得，色譜圖見(jiàn)圖1。

2.5 線(xiàn)性關(guān)系考察 分別取尼美舒利對(duì)照品溶液1、2、3、5、10 mL，置 25 mL 量瓶中，加60%乙腈稀釋至刻度，搖勻。濃度分別為:10.04、20.08、30.12、50.2、100.4 mg·L-1，在上述色譜條件下，分別進(jìn)樣20μL分析，記錄色譜圖。樣品峰面積分別為:160 393.740 4、320 772.618 8、481 183.722 5、801 951.985 5 、1 603 894.871 7 以樣品峰面積(A)對(duì)濃度(C，mg·L-1)進(jìn)行線(xiàn)性回歸分析，得回歸方程為:Y=15 975X+4.7241(r=0.999 9)，結(jié)果表明尼美舒利在10.04 ～100.4 mg·L-1濃度范圍內(nèi)，呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一種尼美舒利對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定尼美舒利的峰面積積分值，峰面積分別為 481 107.2088、481 106.6025、481 105.6754、481 106.4883、481 106.7432 其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD=0.56%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明精密度較好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液5份，精密進(jìn)樣20μL進(jìn)行測(cè)定，峰面積分別為:27 165.5355、27 166.5066、27 167.7498、27 165.0724、27 167.5482，RSD 為 1.2%，表明樣品溶液的重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液(批號(hào)121006)，分別于0、2、4、8、12、24 h 進(jìn)樣，測(cè)定尼美舒利的峰面積積分值，峰面積分別為27 165.5355、27 166.3222、27 167.7498、27 165.4788、27 167.5482，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.1%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明供試品溶液在24 h穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗(yàn) 取已知含量的尼美舒利顆粒，研細(xì)，分別精密稱(chēng)取本品細(xì)粉適量(約相當(dāng)于尼美舒利6.25 mg)6份，置于50 mL的容量瓶中，分別加入125.2 mg·L-1尼美舒利對(duì)照品溶液1 mL，按上述供試品溶液制備，按樣品含量測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1，平均回收率為98.22%，RSD 為0.83%。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.10 樣品含量測(cè)定 取尼美舒利顆粒四批樣，按上述供試品溶液的制備方法制備，精密取20μL供試品溶液，注入液相色譜儀中，同法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 波長(zhǎng)的選擇 取尼美舒利對(duì)照品溶液，在200～400nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，測(cè)得在230nm處有最大吸收，與藥典中尼美舒利有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定波長(zhǎng)一致，故選本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定波長(zhǎng)為230 nm。

3.2 流動(dòng)相的選擇 在先前的預(yù)試驗(yàn)中，分別采用不同比例甲醇—水，乙腈-水及離子對(duì)試劑等作為流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)乙腈—1.15 g·L-1磷酸二氫銨溶液(氨水調(diào)pH至7.0)(40∶60)為流動(dòng)相，分離效果良好，保留時(shí)間、對(duì)稱(chēng)因子及理論塔板數(shù)均能達(dá)到理想效果。

本試驗(yàn)采用HPLC法對(duì)尼美舒利顆粒中的含量，該方法操作簡(jiǎn)單、專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性好，因此，該方法可作為尼美舒利質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供作參考。

表2 尼美舒利顆粒含量測(cè)定結(jié)果

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