聚乙二醇干擾素與普通干擾素抗病毒治療的比較研究

劉素芬，馮愛東，李靜，張海叢，鄭歡偉，黃艷，李兵順，董正洪

（河北省石家莊市第五醫(yī)院傳染科，河北 石家莊 050021）

·臨床論著·

聚乙二醇干擾素與普通干擾素抗病毒治療的比較研究

劉素芬，馮愛東，李靜，張海叢，鄭歡偉，黃艷，李兵順，董正洪

（河北省石家莊市第五醫(yī)院傳染科，河北 石家莊 050021）

目的探討聚乙二醇干擾素α-2a對(duì)慢性乙型肝炎患者療效觀察。方法隨機(jī)選取76例慢性乙型肝炎患者，分為聚乙二醇干擾素α-2a組（38例）和普通干擾素組（38例），分別接受96周治療。觀察治療前后肝組織中乙肝病毒共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（HBV cccDNA）檢出率及含量、肝組織和血清HBV DNA水平以及肝功能。結(jié)果治療96周，普通干擾素組和聚乙二醇干擾素α-2a組HBV cccDNA檢出率和含量、肝組織和血清HBV DNA水平、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶以及總膽紅素的含量都明顯降低（P＜0.05），聚乙二醇干擾素α-2a組的降低量更為顯著（P＜0.05）。結(jié)論聚乙二醇干擾素α-2a對(duì)慢性乙型肝炎患者肝組織中cccDNA的清除療效顯著優(yōu)于普通干擾素。

慢性乙型肝炎；聚乙二醇干擾素α-2a；共價(jià)閉合環(huán)狀DNA

慢性乙型肝炎治療的重要目標(biāo)是清除或持續(xù)抑制乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV），減輕肝臟損傷，從而延長(zhǎng)患者的生存期[1]。乙型肝炎病毒共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）是HBV基因組復(fù)制中間體mRNA和前基因組RNA的模板，是HBV持續(xù)感染的關(guān)鍵，也是各種藥物治療慢性乙型肝炎復(fù)發(fā)的關(guān)

鍵所在[2]。干擾素α-2a（IFN-α-2a）是目前臨床應(yīng)用于抗肝炎病毒的重要藥物，但在臨床應(yīng)用中存在半衰期短、易被腎臟清除、需要頻繁給藥以及用藥后出現(xiàn)“峰谷”效應(yīng)等副作用[3]，并不適宜長(zhǎng)期給藥。聚乙二醇干擾素α-2a（長(zhǎng)效干擾素）同時(shí)具有抗病毒效應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)。因此，這種藥物可能比抗病毒藥更有效[4]。

為了更好的評(píng)價(jià)聚乙二醇干擾素α-2a治療慢性乙型肝炎患者的近、遠(yuǎn)期療效及安全性，本研究對(duì)聚乙二醇干擾素α-2a與普通干擾素的臨床療效進(jìn)行了比較。對(duì)慢性乙型肝炎患者肝組織進(jìn)行活檢，同時(shí)采用血清學(xué)方法對(duì)肝組織中HBV cccDNA、肝組織和血清HBV DNA以及肝功能進(jìn)行了臨床療效觀察，以期為臨床應(yīng)用聚乙二醇干擾素α-2a治療慢性乙型肝炎患者提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1病例資料及分組

76例慢性乙型肝炎患者，男59例，女17例，年齡（29～47）歲，平均38.1歲，均為河北省石家莊市第五醫(yī)院住院患者。本研究病例符合以下條件：①血清HBsAg持續(xù)陽性6個(gè)月以上；②血清HBV DNA連續(xù)2次陽性（HBV DNA＞103copies/ml）；③血清ALT超過參考值上限2～9倍；④無HAV、HCV、HDV、HEV和HIV重疊感染；⑤不伴有失代償期肝硬化；⑥無明顯的心、腦、腎病史，無精神病和糖尿病病史，無酗酒和吸毒史；⑦非妊娠或哺乳期婦女；⑧近6個(gè)月內(nèi)未使用過抗病毒藥物及免疫調(diào)節(jié)藥；⑨血常規(guī)正常。

將76例患者隨機(jī)分為兩組，普通干擾素組與聚乙二醇干擾素α-2a組，每組38例。兩組患者年齡、性別、病情變化等臨床資料，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。本研究遵循本院人體試驗(yàn)的委員會(huì)所制定的倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)并得到該委員會(huì)的批準(zhǔn)，且取得受試對(duì)象或其親屬的知情同意。

1.2治療方法

普通干擾素組給予普通干擾素（α-IFN），300萬U，隔日1次肌肉注射。聚乙二醇干擾素α-2a組給予聚乙二醇干擾素α-2a（上海羅氏制藥有限公司產(chǎn)品)，180μg，每周1次皮下注射，療程均為96周。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1肝組織學(xué)檢查普通干擾素組和聚乙二醇干擾素α-2a組所有患者在治療前和治療后經(jīng)局部麻醉，在彩色B超的定位和引導(dǎo)下應(yīng)用活檢槍、18G肝穿針進(jìn)行快速肝活檢，切取的肝組織送本院病理科進(jìn)行病理檢查。

1.3.2血清標(biāo)志物檢測(cè)方法HBV血清標(biāo)志物HBsAg、HBeAg用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)。

1.3.3肝組織中HBV cccDNA含量檢測(cè)所有標(biāo)本收集后采用HBV跨雙缺口的特異引物進(jìn)行熒光PCR定量檢測(cè)進(jìn)行肝內(nèi)病毒DNA分析。引物由上海生工生物技術(shù)有限公司合成。序列為：5'-CGACC ACGGGGCGCACCTCTCTTTAC-3'；5'-CAAGGCACA GCTTGGAGGCTTGAACAG-3'。TaqMan熒光探針5'-TCTCCTCCCCAGCTCCTCCCAG-3'，檢測(cè)值用copies/mg表示，檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.3.4肝組織和血清HBV DNA病毒檢測(cè)指標(biāo)普通干擾素組和聚乙二醇干擾素α-2a組所有患者在治療前和治療后抽取清晨空腹血液10 ml，分離血清，采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR儀（美國ABI公司）進(jìn)行血清HBV DNA檢測(cè)。檢測(cè)值用copies/ml表示，檢測(cè)下限為100 copies/ml，同時(shí)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.3.5肝功能檢測(cè)普通干擾素組和聚乙二醇干擾素α-2a組所有患者在治療前和治療后抽取血液，分離血清，采用美國BeckMan全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT），天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）和總膽紅素（TBIL）含量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩個(gè)樣本均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，兩樣本率比較用χ2檢驗(yàn)或Fisher’s精確檢驗(yàn)，組內(nèi)時(shí)間的顯著性研究用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1肝組織學(xué)檢查

治療前后的肝組織病理標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋切片，常規(guī)HE染色。治療前后的病理檢測(cè)圖如附圖所示，根據(jù)2000年中華醫(yī)學(xué)會(huì)病毒性肝炎防治方案組織病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)，治療前肝組織炎癥活動(dòng)分級(jí)為G2～G3，纖維化分期為S1～S2。治療后炎癥分級(jí)為G1～G2，纖維化分期為S1。聚乙二醇干擾素α-2a組和普通干擾素組治療后較治

療前炎癥、纖維化程度均下降。

附圖 治療前后肝組織病理檢測(cè)圖（HE染色×400）

2.2HBV血清標(biāo)志物及HBV-DNA的變化

聚乙二醇干擾素α-2a組和普通干擾素組治療前基線情況見表1。在治療96周后，聚乙二醇干擾素α-2a組HBe Ag陽轉(zhuǎn)陰22例，陰轉(zhuǎn)率為95.7%，HBV-DNA陰轉(zhuǎn)率為100%；普通干擾素組HBeAg陽轉(zhuǎn)陰15例，陰轉(zhuǎn)率為68.2%，HBV-DNA陰轉(zhuǎn)率92.1%。聚乙二醇干擾素α-2a組的HBeAg陰轉(zhuǎn)率及HBV-DNA陰轉(zhuǎn)率均明顯高于普通干擾素組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。

表1 兩組治療前基線情況比較

2.3兩組患者肝組織中HBV cccDNA含量和檢出率的變化

隨著抗病毒時(shí)間的延長(zhǎng)，聚乙二醇干擾素α-2a組中HBV cccDNA含量以及檢出率均顯著降低。48周后，與治療前比較，普通干擾素組治療后肝組織中HBV cccDNA的檢出率和含量也顯著降低（P＜0.05）；而聚乙二醇干擾素α-2a組肝組織中HBV cccDNA的檢出率和含量與普通干擾素組比較，下降更為明顯（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組治療48、96周后肝組織中HBV cccDNA含量和檢出率的變化

2.4肝組織和血清HBV DNA病毒檢測(cè)結(jié)果

經(jīng)過96周給藥治療后，與治療前比較，普通干擾素組和聚乙二醇干擾素α-2a組的肝組織和血清HBV DNA含量均顯著降低（P＜0.05)；但與普通干擾素組比較，聚乙二醇干擾素α-2a組中肝組織和血清中HBV DNA的含量下降更多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

2.5肝臟活組織檢查

聚乙二醇干擾素α-2a組中治療前肝組織HBe Ag陽性23例，治療48周時(shí)4例陽性，96周時(shí)1例陽性；普通干擾素組中HBeAg陽性22例，治療48周時(shí)，12例陽性，而96周時(shí)7例陽性。經(jīng)過治療后，隨著患者HBV DNA對(duì)數(shù)值的降低，肝組織炎癥活動(dòng)度（G）明顯降低，且患者肝組織纖維的活動(dòng)度也相應(yīng)降低。

表3 兩組治療不同時(shí)間后肝組織和血清HBV DNA結(jié)果

2.6治療前后血清肝功能變化

普通干擾素組患者在抗病毒治療48周后，轉(zhuǎn)氨酶水平較基線水平有明顯好轉(zhuǎn)（P＜0.05），同時(shí)，與治療前基線比較，聚乙二醇干擾素α-2a組經(jīng)12周治療后，血清中ALT、AST和TbiL的含量均顯著降低（P＜0.05)；隨著抗病毒時(shí)間的延長(zhǎng)，兩組的ALT復(fù)常率均有所增加，而聚乙二醇干擾素α-2a組明顯優(yōu)于普通干擾素組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 兩組干擾素治療乙型肝炎患者肝功能情況

3 討論

蛋白質(zhì)聚乙二醇修飾技術(shù)起源于上世紀(jì)70年代，1977年DAVIS等研究人員發(fā)現(xiàn)，蛋白質(zhì)經(jīng)PEG偶聯(lián)之后免疫原性極大降低，體內(nèi)的循環(huán)半衰期增加，藥效學(xué)等性質(zhì)都得到了明顯改善[5-6]。

聚乙二醇干擾素α-2a是40 kD聚乙二醇與普通干擾素α-2a結(jié)合形成的長(zhǎng)效干擾素。2002年FDA批準(zhǔn)瑞士羅氏公司的聚乙二醇干擾素α-2a上市。聚乙二醇分子的大小和支鏈結(jié)構(gòu)決定藥物的吸收、分布和消除特點(diǎn)，在干擾素表面形成分子屏障，使其免受酶的分解，與器官、細(xì)胞的接觸時(shí)間延長(zhǎng)，同時(shí)溶解度和穩(wěn)定性增加，清除率減慢，聚乙二醇干擾素α-2a可使患者體內(nèi)干擾素有效血藥濃度持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)，每周給藥一次即可達(dá)到持續(xù)抑制病毒的目的[7-8]。聚乙二醇干擾素α-2a與肝細(xì)胞表面的Α受體結(jié)合，觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑并激活基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)多種生物信號(hào)，其中包括抑制感染細(xì)胞內(nèi)的病毒復(fù)制和細(xì)胞增殖，有免疫調(diào)節(jié)作用[9-10]。因此，聚乙二醇干擾素α-2a可以持續(xù)有效地抗病毒，長(zhǎng)期應(yīng)用可能起到清除乙肝病毒，改善肝功能，改變肝病預(yù)后的作用。

研究表明，肝細(xì)胞內(nèi)持續(xù)HBV感染是以核內(nèi)HBV cccDNA的存在為特征，HBV cccDNA是HBV mRNA和前基因組RNA的合成模板，也是HBV持續(xù)感染的關(guān)鍵因素，因此抑制或清除HBV cccDNA是治療慢性乙肝的關(guān)鍵[11-12]。有研究顯示，拉米夫定對(duì)外周血HBV DNA清除效果顯著，但對(duì)細(xì)胞內(nèi)的HBV cccDNA的清除幾乎無效[13]?？诜我豢共《舅幬?，如恩替卡韋或阿德福韋酯，對(duì)肝組織內(nèi)和血清中的HBV DNA清除效果顯著，而對(duì)肝組織內(nèi)HBV cccDNA的清除作用微小[14]，因此尋找能夠清除肝組織內(nèi)HBV cccDNA的有效藥物是治療慢性乙型肝炎的關(guān)鍵。

本研究通過肝組織活檢及血清檢測(cè)顯示，聚乙二

醇干擾素α-2a治療后肝組織中HBV cccDNA檢出率和含量均明顯降低，肝組織中和血清中HBV DNA含量同樣顯著降低；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和總膽紅素也顯著降低，提示兩種治療方法對(duì)慢性乙型肝炎的治療均有效，而聚乙二醇干擾素α-2a的治療效果比普通干擾素更加顯著。

本研究觀察到聚乙二醇干擾素α-2a對(duì)慢性乙型肝炎患者肝組織內(nèi)HBV cccDNA的清除及肝功能的改善明顯優(yōu)于普通干擾素，有較持久的療效，同時(shí)以其獨(dú)特的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)，簡(jiǎn)單的每周1次給藥方式，可使患者具有更好的依從性。

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（張蕾 編輯）

Comparison of antiviral effect of Peginterferon with interferon

Su-fen LIU,Ai-dong FENG,Jing LI,Hai-cong ZHANG,Huan-wei ZHENG, Yan HUANG,Bing-shun LI,Zheng-hong DONG
(Department of Infectious Diseases,the Fifth Hospital of Shijiazhuang, Shijiazhuang,Hebei 050021,P.R.China)

【Objective】To explore the effect of Peginterferon alph-2a treatment on intrahepatic hepatitis B virus covalently closed circular DNA(cccDNA).【Methods】A total of 76 patients were randomly divided into control group treated with common interferon(38 patients)and Peginterferon alph-2a treatment group(38 patients).Both groups were treated for 96 weeks.The detection rate and content of intrahepatic hepatitis B virus(HBV)cccDNA were tested,the level of HBV DNA in hepatic tissue and serum was measured and the hepatic functions were observed.【Results】After treatment for 96 weeks,the detection rate and the level of intrahepatic HBV cccDNA,the level of HBV DNA in hepatic tissue and serum,ALT,AST and TBIL in serum were decreased significantly after therapy in both groups(P＜0.05).Importantly,the above parameters had more obvious declines after therapy in the Peginterferon alph-2a treatment group compared to the control group(P＜0.05).【Conclusions】The effect of Peginterferon alph-2a treatment on intrahepatic HBV cccDNA is predominant compared to the effect of common interferon.

chronic hepatitis B;Peginterferon alpha-2a;covalently closed circular DNA

1005-8982（2015）27-0045-05

R575.1；R453

A

2015-06-19