常見食用植物油中亞油酸的檢測(cè)方法研究

紀(jì)曉娜，崔振峰，張學(xué)偉，陳國軍，張時(shí)嘉，李冬媛

（1.長春工程學(xué)院理學(xué)院；2.吉林省城市污水處理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，長春130012；3.北京同仁堂吉林參茸科技開發(fā)有限公司，吉林 白山135200）

0 前言

亞油酸是人體不能合成，但又必需的ω－6系列不飽和脂肪酸，具有降低血液中的過量膽固醇、增強(qiáng)細(xì)胞膜的透性、阻止心肌組織和動(dòng)脈硬化的功能［1］。亞油酸要從膳食中補(bǔ)充，最好的途徑就是食用植物油。食用植物油相對(duì)于動(dòng)物油脂具有更少飽和脂肪酸而更多不飽和脂肪酸的優(yōu)點(diǎn)，更利于健康［2］。食用油中不飽和脂肪酸的定量對(duì)于指導(dǎo)人們健康飲食具有重要意義［3］。采用氣相色譜法（GC）可以對(duì)不飽和脂肪酸中的亞油酸高效分離、準(zhǔn)確定量［4］，盡管質(zhì)譜（MS）是目前先進(jìn)的檢測(cè)器［5］，但氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）以其33%的市場(chǎng)占有率更具有推廣價(jià)值，因此本文選擇了GC－FID的檢測(cè)方法。

目前多以籠統(tǒng)的 n－6／n－3 表征食用油的品質(zhì)［6］，本論文以亞油酸為例尋找一種適合推廣使用的檢測(cè)植物油中不飽和脂肪酸的方法，將針對(duì)確定的不飽和脂肪酸直接定量。同時(shí)，不飽和脂肪酸含量也可以作為比較不同種類和產(chǎn)地食用油品質(zhì)的一個(gè)指標(biāo)，通過測(cè)試幾種常見植物油中亞油酸的含量，為食用油中營養(yǎng)成分的比較提供數(shù)據(jù)參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

Agilent 6820氣相色譜儀（FID檢測(cè)器）：美國安捷倫公司；Agilent DB－FFAP聚乙二醇毛細(xì)管柱（30m×0.25mm×0.25μm）：使用溫度為40～250℃，美國安捷倫公司；甲醇（色譜純）：山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司；正己烷（色譜純）：天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；0.4mol／mL氫氧化鉀—甲醇溶液：稱取1.122g氫氧化鉀，用甲醇溶解至50mL容量瓶中；亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000mg）：P.O.Box 295 109West Main St.，Elysian，MN 56028U.S.A.；十一酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液（100mg）：P.O.Box 295 109West Main St.，Elysian，MN 56028U.S.A.。

1.2 色譜條件

采用程序升溫：柱溫為100℃，保持1min，再以15℃／min升到200℃ ，保持19min；載氣（氮?dú)猓?.04mL／min；輔助氣（氮?dú)猓?3.92mL／min；FID的空氣：260mL／min，氫氣：26.08mL／min；不分流進(jìn)樣。亞油酸甲酯的保留時(shí)間19.0min，十一酸甲酯（內(nèi)標(biāo)）的保留時(shí)間7.0min。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定

分別取亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL，20μL，30 μL，40μL，50μL于10mL容量瓶中，并分別加入100μL十一酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，正己烷定容至刻度。根據(jù)峰面積比值（標(biāo)準(zhǔn)／內(nèi)標(biāo)）與質(zhì)量濃度的線性關(guān)系，對(duì)質(zhì)量濃度 100 μg／mL，200 μg／mL，300 μg／mL，400μg／mL，500μg／mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，采用內(nèi)標(biāo)法定量，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（C），亞油酸甲酯／十一酸甲酯的峰面積比為縱坐標(biāo)（Y）（見表1）。

表1 亞油酸甲酯標(biāo)樣的回歸方程，相關(guān)系數(shù)和檢出限

1.4 甲酯化條件

準(zhǔn)確稱取樣品若干克于10mL具塞比色管中，加入氫氧化鉀—甲醇溶液（濃度為0.4mol／mL）使之甲酯化，40℃，超聲波震蕩，甲酯化反應(yīng)時(shí)間為40 min，。再加入甲苯—正己烷（1︰1）混合溶液4 mL，在一定溫度下超聲振蕩，移入分液漏斗中，比色管用正己烷洗三次，加入2mL二次水，搖勻，靜置分層，重復(fù)三次萃取，取上清液于3 000r／min下離心6min，移取上清，并洗滌沉淀3次，一并轉(zhuǎn)移，用正己烷定容到10mL，24h內(nèi)檢測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 甲酯化條件的選擇

由于亞油酸具有熱不穩(wěn)定性，所以在測(cè)定前要進(jìn)行甲酯化。

甲酯化方法：準(zhǔn)確稱取樣品于10mL具塞比色管中，加入催化劑和甲醇使之甲酯化，再加入甲苯—正己烷（1︰1）混合溶液4mL，在一定溫度下超聲振蕩，移入分液漏斗中，比色管用正己烷洗3次，加入2mL2次水，搖勻，靜置分層，重復(fù)3次萃取，取上清液于3 000r／min下離心6min，移取上清，并洗滌沉淀3次，一并轉(zhuǎn)移，用正己烷定容到10mL，經(jīng)微孔過濾（0.45μm）后待測(cè)。

2.1.1 甲酯化試劑的選擇

分別使用氫氧化鉀—甲醇溶液和硫酸—甲醇溶液作為亞油酸的甲酯化試劑（見表2和表3）。

表2 硫酸—甲醇的條件選擇

表3 氫氧化鉀—甲醇的條件選擇

表2和表3表明，響應(yīng)值越高說明甲酯化越完全，用0.4mol／mL氫氧化鉀—甲醇溶液的甲酯化效果更好。因此本實(shí)驗(yàn)采用0.4mol／mL氫氧化鉀—甲醇溶液作甲酯化試劑。

2.1.2 甲酯化時(shí)間的選擇

甲酯化時(shí)間太短，亞油酸甲酯化不完全；時(shí)間太長，使酯化產(chǎn)物發(fā)生水解，則影響甲酯化效率。因此本實(shí)驗(yàn)對(duì)不同反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行了比較（見表4）。

表4 甲酯化時(shí)間對(duì)甲酯化效率的影響

表4表明，40min的響應(yīng)值最大，說明亞油酸甲酯化效率最高，因此本實(shí)驗(yàn)甲酯化時(shí)間用40min。

2.1.3 甲酯化后穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取甲酯化后的溶液，分別在0、2、6、24h測(cè)試（見表5）。

表5 亞油酸甲酯的穩(wěn)定性試驗(yàn)

表5表明，甲酯化后的溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

綜上所述：本實(shí)驗(yàn)采用0.4mol／L氫氧化鉀—甲醇溶液為甲酯化試劑，甲酯化時(shí)間為40min，甲酯化后盡快完成測(cè)試（24h內(nèi)）。

2.2 植物油中亞油酸含量的測(cè)定

在超市內(nèi)購得四種植物油：大豆油、花生油、玉米油和葵花仁油，經(jīng)甲酯化前處理后進(jìn)行測(cè)定，色譜圖以花生油為例（見圖1）。

圖1 花生油樣品譜圖

4種樣品中亞油酸含量見表6。

表6 植物油中亞油酸的含量

結(jié)果顯示，大豆油中亞油酸的含量最高，達(dá)到了267.54mg／g。

2.3 精密度的測(cè)定

連續(xù)5次檢測(cè)樣品得到亞油酸甲酯／十一酸甲酯的峰面積比值，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（見表7）。

2.4 回收率的測(cè)定

通過對(duì)各植物油樣品中加入相當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)考察方法的準(zhǔn)確度（樣品回收率見表8）。

表7 測(cè)得油樣品的亞油酸甲酯峰面積／十一酸甲酯峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

表8 植物油中亞油酸加標(biāo)回收率

2.5 檢出限

取100μg·mL－1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行多次稀釋，至信噪比（S／N）為3，對(duì)應(yīng)亞油酸甲酯的進(jìn)樣含量為0.001pg，因此該方法的最低檢出限為0.001 pg（S／N＝3）（見表1）。

3 結(jié)語

本論文確定了食用植物油中亞油酸甲酯化條件，并測(cè)定了目前市場(chǎng)出售的花生油﹑玉米油﹑葵花仁油和大豆油4種食用植物油中亞油酸的含量，其中以大豆油中亞油酸含量為最高，而葵花仁油含量最低，花生油和玉米油居中。該方法的檢測(cè)范圍寬、線性良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD＜1%）和回收率（96%～110%）均能滿足檢測(cè)要求。綜上，該方法對(duì)儀器和實(shí)驗(yàn)條件要求不高，定量準(zhǔn)確、精密度高，操作方便快捷，適合推廣用于大批量樣品的快速監(jiān)督檢測(cè)。

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