羊水親子鑒定中STR基因座D5S818二步突變1例

楊璐瑜 張核子 張付瑤 葉宗博 張茵 胡利平

(1.廣東華曦法醫(yī)物證司法鑒定所 廣東深圳 518000;2.昆明醫(yī)科大學(xué) 云南昆明 650500)

短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeats,STR)是人類的一類重要遺傳標(biāo)記,因其多態(tài)性豐富,擴(kuò)增片斷長度短,廣泛地應(yīng)用于親子鑒定中。但是,STR 基因座在遺傳的過程中發(fā)生突變的概率較高,因此在鑒定過程中是個(gè)不容忽視的問題,要值得注意。筆者在工作中遇一例較罕見的母親發(fā)生二步突變的羊水檢材鑒定,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 案例資料

1.1 案情簡介

李某(孕17周+),自然受孕,未確定腹中胎兒父親是否為其老公,特委托本鑒定所鑒定是否存在親子關(guān)系。

1.2 檢驗(yàn)方法

胎兒羊水5ml、男方帶毛囊毛發(fā)2根、女方血樣備用。采用Chelex-100 法分別提取DNA。經(jīng)PowerPlexR21 (普洛麥格生物技術(shù)有限公司)、AGCU EX22(無錫中德美聯(lián)生物技術(shù)有限公司)復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)以及Investigator ArgusRX-12(德國QIAGEN公司)擴(kuò)增系統(tǒng)進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物在ABI3500型DNA測(cè)序儀上電泳,由GeneMapper ID X1.3軟件進(jìn)行結(jié)果分析。

2 結(jié)果

2.1 22個(gè)常染色體STR基因座分型結(jié)果

同時(shí)應(yīng)用PowerPlexR21和AGCU EX22復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng),胎兒與孕婦在D5S818位點(diǎn)的分型結(jié)果一致,不符合遺傳規(guī)律。結(jié)果見表1。

表1 22個(gè)常染色體STR基因座分型結(jié)果

2.2 12個(gè)位點(diǎn)X-STR基因座分型結(jié)果

分析12位點(diǎn)X-STR基因座檢測(cè)結(jié)果,胎兒的X-STR分型均能從孕婦及可疑父的分型中找到來源,符合X染色體遺傳規(guī)律,結(jié)果見表2。

2.3 STR親權(quán)指數(shù),累計(jì)親權(quán)指數(shù)及親權(quán)概率的計(jì)算

親權(quán)指數(shù)(paternity index,PI)、累積親權(quán)指數(shù)(cumulative paternity index,CPI)及相對(duì)父權(quán)概率(relative chance of paternity,RCP)的計(jì)算按文獻(xiàn)報(bào)道的方法計(jì)算,計(jì)算所使用的相關(guān)等位基因分布頻率數(shù)據(jù)來自文獻(xiàn)［1-2］和司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所2014年親權(quán)鑒定能力驗(yàn)證資料中的相關(guān)數(shù)據(jù),以及無錫中德美聯(lián)生物技術(shù)有限公司所提供的頻率表。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析,本例22個(gè)STR總CPI值為3.32×1012,累積親子關(guān)系概率(RCP)為99.9999999999%,超過了認(rèn)定父權(quán)的標(biāo)準(zhǔn),因此可以確定可疑父是胎兒的生物學(xué)父親。

3 討論

羊水中含有豐富的胎兒細(xì)胞成分,是很好的生物學(xué)檢材,在本案例中,用兩個(gè)不同廠家的擴(kuò)增試劑對(duì)相同樣本進(jìn)行檢驗(yàn),結(jié)果一樣,而且孕婦為自然妊娠,因此胎兒與孕婦的親子關(guān)系是確定的,因此可以確定胎兒在D5S818位點(diǎn)發(fā)生母源性突變,父權(quán)指數(shù)應(yīng)按照符合遺傳規(guī)律的方法計(jì)算。增加的12位點(diǎn)X-STR的基因座未發(fā)現(xiàn)不符合遺傳規(guī)律地情況,進(jìn)一步驗(yàn)證了孕婦與胎兒之間的親子關(guān)系。X染色體特異性的STR作為特殊的遺傳標(biāo)記具有重要的應(yīng)用價(jià)值,是常染色體STR分型的重要補(bǔ)充方?，F(xiàn)有的資料表明,STR突變是DNA 復(fù)制滑動(dòng)的結(jié)果或DNA復(fù)制的錯(cuò)誤修復(fù)而造成的,STR突變是符合逐步突變模式(Stepwise Mutation Model,SMM)的,即每次突變只改變一個(gè)重復(fù)單位,兩個(gè)或更多個(gè)重復(fù)單位的變化是在前一次突變基礎(chǔ)上發(fā)生的,也就是多步突變是逐步形成的。STR基因座90%的突變?yōu)橐徊酵蛔兗?個(gè)重復(fù)單位的加或減,大于10個(gè)重復(fù)單位的基因座突變相比重復(fù)單位小于10的較多;一般的規(guī)律是突變來自父方是來自母方的0.7-14倍,多數(shù)基因座為3-6倍。本案例中的突變是由11到13,發(fā)生了兩步突變,并且是母系來源的,國內(nèi)尚未見報(bào)道。因此,在今后的鑒定工作中,在出現(xiàn)可能是突變的情況時(shí),要注意以下幾點(diǎn):①應(yīng)該用不同批次相同的試劑盒以及不同廠家的試劑盒進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證,保證分型的正確;②如果是二聯(lián)體,在補(bǔ)充親生母親的樣本的同時(shí)增加STR位點(diǎn)。③必要時(shí)可進(jìn)行測(cè)序來驗(yàn)證是否為真的突變。

表2 12個(gè)位點(diǎn)X-STR基因座分型結(jié)果

[1]周娟娟,洪素云.中國漢族人群15個(gè)因座遺傳多態(tài)性研究及法醫(yī)學(xué)應(yīng)用[J].中國免疫學(xué)雜志,2004,(12):841-842．

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