食管鱗癌組織中磷酸化表皮生長因子受體和Akt蛋白的表達*

盧 紅，王建軍，周 芳

河南大學(xué)淮河醫(yī)院腫瘤科開封475000

△女，1973年12月生，博士，副教授，副主任醫(yī)師，研究方向:惡性腫瘤的綜合治療，E-mail:hhyyluhong@126．com

表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)是細胞表面的受體酪氨酸激酶，能夠與大量的生長因子如表皮生長因子和雙調(diào)蛋白相互作用。磷酸化的EGFR(p－EGFR)能夠激活不同的胞內(nèi)信號途徑，從而導(dǎo)致細胞增殖和存活［1］，因而EGFR 可能成為治療這些腫瘤的分子靶點［2］。蛋白激酶(Akt)信號途徑作為EGFR 調(diào)控的下游信號途徑之一［3］，其激活主要體現(xiàn)在以下幾個方面:Akt 的磷酸化、前凋亡蛋白BAD 的失活以及雄性激素受體轉(zhuǎn)錄活性的變化等［4－5］。目前，越來越多的研究［6－7］顯示，p－EGFR 和磷酸化Akt(p－Akt)的過表達與腫瘤的增殖、存活及預(yù)后關(guān)系密切。作者采用免疫組化方法檢測食管鱗癌組織和正常食管黏膜組織中p－EGFR 和p－Akt 蛋白的表達，分析其與食管鱗癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系，探討二者在食管鱗癌中表達的相關(guān)性，為食管鱗癌惡性程度的預(yù)測提供新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 組織標(biāo)本 選取河南大學(xué)淮河醫(yī)院2011年7月至2012年2月食管癌標(biāo)本50例，均經(jīng)病理學(xué)證實為食管鱗癌。每例標(biāo)本于手術(shù)切除后40 min 內(nèi)取癌組織及癌旁正常食管黏膜組織(距腫瘤邊緣5～8 cm)，立即置于液氮中?；颊咧心?1例，女19例。腫瘤直徑＜3 cm 者15例，3～5 cm 者14例，＞5 cm 者21例。TNM 分期:Ⅱ期11例，Ⅲa 期13例，Ⅲb 期15例，Ⅳ期11例。分化程度:低分化27例，中分化13例，高分化10例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例。

1．2 p-EGFR 和p-Akt 蛋白表達的免疫組化檢測將食管鱗癌及癌旁正常食管黏膜組織標(biāo)本5 μm 厚連續(xù)切片，微波修復(fù)抗原，分別與一抗［兔抗人p－Akt(Ser 473)多克隆抗體為Abcam 公司產(chǎn)品，兔抗人p－EGFR(1173)多克隆抗體為Santa Cruz 公司產(chǎn)品］、二抗反應(yīng)。DAB 顯色，蘇木素復(fù)染。結(jié)果判定:以胞質(zhì)、胞膜或胞核出現(xiàn)黃色顆粒為陽性細胞。每張切片選5個高倍視野，計算每個視野陽性細胞百分率。陽性細胞百分率＜10% 為1 分，10%～50%為2 分，＞50%為3 分;按染色強弱評分:無黃色顆粒為0 分，淡黃色染色為1 分，中度黃色染色為2 分，棕黃色染色為3 分。然后按照2種評分的乘積計算總分，總分＜3 分為陰性，≥3 分為陽性。

1．3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13．0 進行分析。應(yīng)用配對資料的χ2檢驗比較食管鱗癌及癌旁正常食管組織中p－EGFR 和p－Akt 蛋白表達的差異，應(yīng)用χ2檢驗分析p－EGFR 和p－Akt 蛋白的表達與食管鱗癌患者臨床病理特征的關(guān)系，應(yīng)用Pearson 相關(guān)分析食管鱗癌組織中兩種蛋白表達的關(guān)系，檢驗水準(zhǔn)α=0．05。

2 結(jié)果

2．1 食管鱗癌及癌旁正常食管組織中p-EGFR 和p-Akt 蛋白的表達 見圖1 和表1、2。p－EGFR 蛋白陽性表達產(chǎn)物主要定位于細胞質(zhì)或細胞膜。食管鱗癌組織中p－EGFR 蛋白陽性表達率為78% (39/50)，高于癌旁正常食管黏膜組織［40%(20/50)］。p－Akt 陽性表達產(chǎn)物主要定位于細胞質(zhì)或細胞核，其在食管鱗癌組織中的陽性表達率為80% (40/50)，高于癌旁正常食管黏膜組織［6%(3/50)］。

圖1 食管鱗癌及癌旁正常食管組織中p-EGFR(A)和p-Akt(B)蛋白的表達(SP，×400)

表1 食管鱗癌及癌旁正常食管組織中p-EGFR 蛋白表達的比較(n=50)例

表2 食管鱗癌及癌旁正常食管組織中p-Akt 蛋白表達的比較(n=50)例

2．2 p-EGFR 和p-Akt 蛋白的表達與食管鱗癌患者臨床病理特征的關(guān)系 見表3。

表3 p-EGFR 和p-Akt 蛋白表達與食管鱗癌患者臨床病理特征的關(guān)系

2．3 食管鱗癌組織中p-EGFR 和p-Akt 蛋白表達的關(guān)系 見表4。

表4 食管鱗癌組織中p-EGFR 和p-Akt 蛋白表達的關(guān)系例

3 討論

當(dāng)前分子靶向治療作為一種新的腫瘤治療的替代手段已經(jīng)顯示出極大的應(yīng)用前景。采用EGFR 作為分子靶點開發(fā)出很多靶向藥物，如吉非替尼［8］、埃羅替尼［9］、西妥昔單抗［10］等。Hiraishi 等［11］研究發(fā)現(xiàn)，口腔鱗癌組織中p－EGFR 和EGFR 蛋白表達的陽性率分別為98%(51/52)和92．3%(48/52)，并發(fā)現(xiàn)二者均與腫瘤分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，提示其高表達可能成為預(yù)測口腔鱗癌極好的分子標(biāo)志之一。此外，胃腸道類癌和胰腺內(nèi)分泌腫瘤中均檢測出高水平的p－EGFR 和EGFR 蛋白的表達，且發(fā)現(xiàn)高表達p－EGFR 的胰腺內(nèi)分泌腫瘤患者與低表達或不表達p－EGFR 的患者相比，其預(yù)后更差［12］，提示p－EGFR 在腫瘤的發(fā)生和預(yù)后中發(fā)揮重要的作用。為了進一步了解食管鱗癌組織中p－EGFR 蛋白的表達情況，作者采用免疫組化法分析食管鱗癌組織和癌旁正常食管黏膜組織中p－EGFR 蛋白的表達，發(fā)現(xiàn)食管癌組織中p－EGFR 表達的陽性率高于癌旁正常食管組織;進一步分析發(fā)現(xiàn)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度低的食管鱗癌組織中p－EGFR 蛋白陽性表達率明顯增高，提示EGFR 的磷酸化狀態(tài)水平的高低可能與食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，表明其可能成為判定食管鱗癌惡性程度的分子標(biāo)志，但其確切的分子機制尚需要進一步探討。

眾所周知，大多數(shù)腫瘤并非由單一信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路所支配，因此，多靶點治療可能為腫瘤患者帶來新的福音。EGFR 調(diào)控腫瘤細胞的增殖、存活和凋亡的過程主要依賴以下3 條信號途徑:①Ras/Raf/MAPK 信號途徑。②PI3K/Akt 信號途徑。③STAT信號途徑。其中PI3K/Akt 信號途徑占有重要的地位。Akt 的磷酸化狀態(tài)水平的高低與腫瘤(急性淋巴細胞性白血?。?3］、腎癌［14］和前列腺癌［15］)的惡性程度密切相關(guān)。因此，作者也分析了食管鱗癌組織中p－Akt 蛋白的表達情況，結(jié)果顯示，食管鱗癌組織中p－Akt 蛋白表達的陽性率高于癌旁正常食管黏膜組織;進一步分析發(fā)現(xiàn)其與食管鱗癌患者臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系與p－EGFR 蛋白具有一致性。此外，作者還發(fā)現(xiàn)二者在食管鱗癌組織中的表達呈正關(guān)聯(lián)，表明二者有協(xié)同作用，共同調(diào)控食管鱗癌細胞的增殖和存活。

總之，作者的研究結(jié)果表明，食管鱗癌組織中存在p－EGFR 和p－Akt 的高表達，其高表達與食管鱗癌的分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，并且在食管鱗癌中其表達呈正相關(guān)，因而聯(lián)合檢測食管鱗癌中p－EGFR 和p－Akt 的水平對食管鱗癌惡性程度的預(yù)測具有一定價值。

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