規(guī)?；咛ヒ浦踩庋蚬w羊處理研究

霍 飛，羅永明，阿依努爾·亞森，張國庭，董 紅，鄭新寶，陳靜波（新疆畜牧科學(xué)院畜牧研究所，烏魯木齊 830000）

規(guī)?；咛ヒ浦踩庋蚬w羊處理研究

霍 飛，羅永明，阿依努爾·亞森，張國庭，董 紅，鄭新寶，陳靜波
（新疆畜牧科學(xué)院畜牧研究所，烏魯木齊 830000）

以優(yōu)良的肉羊品種薩福克羊、無角陶賽特羊、特克塞爾羊為對象，研究繁殖季節(jié)大規(guī)模綿羊胚胎移植中，供體羊生產(chǎn)情況、同期發(fā)情處理方法、配種方式、手術(shù)采胚次數(shù)對受精率及可用胚胎數(shù)的影響。結(jié)果表明：①青年羊、初配母羊、經(jīng)產(chǎn)母羊可獲得可用胚胎數(shù)分別為6.70枚±2.97枚、10.90枚±5.36枚和11.69枚±5.40枚；②3種常用同期處理方式孕酮海綿栓+PG、PG+PG、CIDR+PG可獲得可用胚數(shù)分別為4.20枚±3.84枚、10.10枚±6.28枚和11.20枚±6.96枚；③0.1mL鮮精2次人工授精、0.3mL鮮精2次人工授精、2次自然交配和1次腹腔鏡輸精可以獲得受精率分別為62.74％、80.50％、97.43％和96.96％；④供體羊手術(shù)采胚0次、1次、2次和2次以上可以獲得可用胚數(shù)分別為12.75枚±7.01枚、8.63枚±4.27枚、5.26枚±3.86枚和4.34枚±4.13枚。

供體；可用胚；受精率；綿羊；胚胎移植

供體羊的超排處理及配種是羊胚胎移植生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)，關(guān)系到供體羊出胚情況及胚胎移植生產(chǎn)成效。供體羊年齡、同期處理方法、配種方式及手術(shù)采胚次數(shù)對供體羊胚胎受精率及可用率有較大影響。

1 材料與方法

1.1 材料

PG（上海計生所），孕酮海綿栓（國產(chǎn)），CIDR（新西蘭），F(xiàn)SH（寧波三生）。

1.2 方法

（1）供體羊在第1次同期處理發(fā)情后9～12d開始超排，采用遞減法注射FSH 4d，在注射FSH第3天進行第2次同期處理。供體羊發(fā)情后12～36h配種，配種后5～6d手術(shù)采胚。

（2）分別對10～12月齡青年羊、1.5周歲初配羊、2.5～5.5周歲經(jīng)產(chǎn)母羊進行超排處理，同期采用注射2次PG方式，發(fā)情后進行2次自然交配，分析不同年齡段供體羊超排出胚情況。

（3）采用3種方法即孕酮海綿栓+PG、PG+PG、CIDR+PG對3組供體羊同期化處理，并超排，配種采用自然交配方式，對比分析同期處理方法對供體出胚情況的影響。

（4）采用3種配種方式即人工授精、自然交配、腹腔鏡子宮角深部輸精對超排后的供體羊進行配種，對比分析供體羊不同配種方式的受精率。

（5）依據(jù)供體羊手術(shù)采胚次數(shù)將供體羊分為4組，進行超排、配種、手術(shù)采胚，對比分析手術(shù)采胚次數(shù)對供體羊出胚的影響。

（6）受精率采用卡方分析，平均可用胚數(shù)采用一維方差分析。

2 結(jié)果

2.1 不同年齡階段供體羊超排處理結(jié)果

不同生產(chǎn)階段供體羊超排結(jié)果見表1，以經(jīng)產(chǎn)母羊獲得受精率及可用胚數(shù)最高，初配母羊與青年羊、經(jīng)產(chǎn)母羊受精率間差異不顯著（P＞0.05），青年羊與經(jīng)產(chǎn)母羊受精率差異顯著（P＜0.05）。初配母羊、經(jīng)產(chǎn)母羊與青年羊平均可用胚數(shù)差異極顯著（P＜0.01）。

表1 繁殖季節(jié)不同年齡階段供體羊超排處理結(jié)果

2.2 不同同期發(fā)情方法處理供體羊的超排手術(shù)采胚結(jié)果

由表2可見，以CIDR+PG處理方法獲得受精率、平均可用胚數(shù)最高。PG+PG、CIDR+PG處理方式與孕酮海綿栓+PG處理方式受精率、平均可用胚數(shù)均差異極顯著（P＜0.01）。

表2 繁殖季節(jié)3種同期發(fā)情方法供體超排手術(shù)采胚結(jié)果

2.3 供體羊不同配種方式的受精結(jié)果

4組供體羊超排后采用3種配種方式進行配種，結(jié)果見表3。以自然交配、腹腔鏡輸精獲得受精率最高。自然交配、腹腔鏡子宮角輸精受精率與大精液量人工授精受精率差異顯著（P＜0.05），與小精液量人工授精受精率差異極顯著（P＜0.01）。大精液量人工授精受精率與小精液量人工授精受精率差異顯著（P＜0.05）。

表3 供體羊不同配種方式受精結(jié)果

2.4 供體羊不同手術(shù)次數(shù)的采胚結(jié)果

對供體羊根據(jù)采胚次數(shù)分組處理，結(jié)果由表4可見，以采胚0次及采胚1次供體羊可獲得較理想的出胚結(jié)果。手術(shù)采胚0次、1次與手術(shù)采胚2次及2次以上受精率差異均極顯著（P＜0.01），手術(shù)采胚1次平均可用胚數(shù)與0次、2次、2次以上差異顯著（P＜0.05），手術(shù)采胚0次與采胚2次、2次以上差異極顯著（P＜0.01）。

表4 不同手術(shù)次數(shù)供體羊采胚結(jié)果

3 討論

3.1 發(fā)育階段對供體羊超排的影響

供體羊發(fā)育階段對超排結(jié)果影響較大［1］。10～12月齡的部分純種肉羊已達到性成熟，可通過激素超排處理獲得數(shù)量可觀的可用胚胎，急需擴繁純種肉羊的生產(chǎn)單位可以將不滿周歲的母羊作為胚胎移植供體羊。相同處理方式下，初配母羊與經(jīng)產(chǎn)母羊在受精率與可用胚數(shù)方面差異不顯著（P＞0.05），初配母羊在手術(shù)采胚后，恢復(fù)一段時間后即可參加配種，進一步縮短了擴繁周期［2］。

3.2 同期處理方法對供體羊超排的影響

用3種不同同期處理方式對比了國產(chǎn)海綿栓與進口CIDR對供體羊的處理效果，結(jié)果表明，國產(chǎn)海綿栓與進口CIDR在供體羊受精率及可用胚胎數(shù)方面存在一定差距?？赡苁怯捎趪a(chǎn)海綿栓孕酮純度不夠或隨著國產(chǎn)海綿栓在母羊陰道停留時間增加，抑菌能力減弱及陰道分泌物增多對陰道及子宮頸口造成污染，撤栓時產(chǎn)生惡臭氣味，并且有一定比率的栓上帶血。進口CIDR與母羊陰道接觸面積小，尿液及陰道分泌物能及時排出，污染較國產(chǎn)海綿栓大幅度降低。用國產(chǎn)海綿栓撤栓時對母羊陰道用抗生素和生理鹽水進行清洗，有助于減少污染，但依然沒有獲得理想的受精率。因此，在供體羊的處理過程中盡量使用進口CIDR［3］。

3.3 不同配種方式對供體羊出胚的影響

配種是胚胎移植供體羊處理過程中非常重要的一個技術(shù)環(huán)節(jié)，直接影響整個胚胎移植的效果，采用合理的配種方式能夠獲得更多的可用胚胎［5］。2次自然交配和腹腔鏡子宮角輸精能夠獲得較為理想的受精率［6］。腹腔鏡輸精，種公羊采精一次可以輸3～5只供體羊，大大減少了種公羊的飼養(yǎng)量，進一步擴大了優(yōu)秀種公羊的利用率，但對技術(shù)及硬件條件要求較高。種公羊數(shù)量不多的生產(chǎn)單位可以采用人工授精和自然交配結(jié)合的方式進行配種，即供體母羊發(fā)情12h后人工授精1次，24h后自然交配1次。若全部采用人工授精，也應(yīng)當(dāng)增加輸精的精液量［7］。

3.4 手術(shù)沖胚次數(shù)對供體羊出胚的影響

研究結(jié)果表明，隨著手術(shù)采胚次數(shù)的增加，供體羊的受精率與可用胚數(shù)降低［8］。這與手術(shù)采胚對子宮的損傷有很大關(guān)系。多次采胚供體羊，子宮、輸卵管、卵巢成不同程度的粘連，在手術(shù)過程中向子宮噴撒生理鹽水，保持子宮及輸卵管的濕潤度或在采胚結(jié)束后向供體羊腹腔內(nèi)灌注生理鹽水可減輕粘連程度。在開刀過程中要盡量避免大量出血，采胚后要盡量將子宮及輸卵管表面的血沖洗干凈。在挑選供體羊時，盡量挑選采胚次數(shù)少的供體羊。

［1］王芝紅，李延春，馬占峰.夏洛萊羊超數(shù)排卵及鮮胚移植技術(shù)應(yīng)用的試驗［J］.現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2006（8）：7-9.

［2］權(quán)富生.山羊和綿羊超數(shù)排卵及規(guī)?；咛ヒ浦布夹g(shù)研究［D］.陜西楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2010.

［3］雷趙民，吳建平，Martin Wenkoff.綿羊胚胎移植生殖內(nèi)分泌調(diào)控及其效果研究［J］.草業(yè)科學(xué)，2009（6）：126-131.

［4］李銘，黃恒，張立，等.綿羊規(guī)?；咛ヒ浦苍囼炐Чc分析［J］.中國農(nóng)學(xué)通報，2010，26（17）：17-19.

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［6］烏達巴拉，達來，邵凱，等.羊子宮頸輸精和腹腔鏡輸精技術(shù)對受胎率的影響［J］.中國草食動物科學(xué)，2012，22（增刊）：101.

［7］張航.山羊體內(nèi)原核胚生產(chǎn)、移植技術(shù)優(yōu)化［D］.長春：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，2014.

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S826.2

A

2095-3887（2015）05-0077-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2015.05.022

2015-07-01

“十二五”國家科技支撐計劃（2011BAD19B02-2）

霍飛（1980-），男，助理研究員，主要從事家畜繁殖研究。

陳靜波（1956-），Email：chenjb126@126.com