高脂飲食對(duì)長(zhǎng)爪沙鼠生化及主要臟器組織病理學(xué)的影響

俞建順，嚴(yán)茂祥，王德軍，何蓓暉，陳芝蕓

(1．浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，杭州 310006;2．浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心，杭州 310053)

近年來，隨著我國經(jīng)濟(jì)水平的快速發(fā)展和人民生活水平提高，我國居民糧谷類食物攝入量逐年減少，脂肪供能比明顯增加，并有向西方國家膳食結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化的趨勢(shì)［1］，由此帶來一系列健康問題，如高脂血癥、脂肪肝、心腦血管疾病等。因此，研究高脂飲食對(duì)機(jī)體的影響具有極其重要的意義。長(zhǎng)爪沙鼠(以下簡(jiǎn)稱沙鼠)亦稱蒙古沙鼠或黑爪蒙古沙土鼠、黃耗子、砂耗子等，屬哺乳綱，嚙齒目，倉鼠科，沙鼠亞科，沙鼠屬，其肝內(nèi)類脂質(zhì)含量高，能保持高血脂和高膽固醇水平，血清膽固醇含量極易受飼料膽固醇含量影響，且高膽固醇飲食可導(dǎo)致肝臟脂沉積，對(duì)研究高血脂、膽固醇吸收和食源性膽固醇代謝等很具價(jià)值。本次實(shí)驗(yàn)旨在研究高脂飲食對(duì)沙鼠的病理生理學(xué)影響，為脂質(zhì)代謝紊亂相關(guān)疾病的造模提供新思路。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)成年雄性Z:ZCLA長(zhǎng)爪沙鼠48只，體重(50±10)g，浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證:【SCXK(浙)2008－0033】，飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心屏障動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施中【SYXK(浙)2008－0115】。

1.2 主要試劑

膽固醇由上海思吉生物制品有限公司提供，3號(hào)膽鹽由杭州微生物試劑有限公司提供，蛋黃粉由浙江省長(zhǎng)興縣艾格生物制品有限公司提供，血糖(Glu)、甘油三酯(TG)、膽固醇(CHOL)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、尿酸(UA)、肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TBil)、淀粉酶(AMS)等診斷試劑盒均由上海申能-德賽診斷技術(shù)有限公司提供;低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)診斷試劑盒由上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)有限公司提供;蘇木素和伊紅染料為 Sigma進(jìn)口分裝，Masson染色試劑合由中國福州邁新生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 主要儀器設(shè)備

日立7020全自動(dòng)生化分析儀，德國Becrman Allegra X-15R centrifuge離心機(jī)，德國 Microm STR120自動(dòng)組織脫水機(jī)，德國Microm HM335E半自動(dòng)石臘包埋機(jī)，德國LeicaRM 2025病理切片機(jī)，德國Leica DMLB2顯微鏡。

1.4 高脂飼料配制

由80.5%的普通飼料、10%的蛋黃粉、7%的豬油膽、2%的膽固醇及0.5%的3號(hào)膽鹽組成。普通飼料和高脂飼料均經(jīng)浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心加工生產(chǎn)。

1.5 分組及處理

48只沙鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為正常組及模型組，每組24只，每組又分4周、8周及16周3個(gè)時(shí)相點(diǎn)。正常組予普通飼料喂養(yǎng)，模型組予高脂飼料喂養(yǎng)，自由飲水，兩組分別在第4、8、16周末3個(gè)時(shí)相點(diǎn)各隨機(jī)處理沙鼠8只。處理前晚起禁食不禁水18 h，次日上午空腹麻醉下采血，分離血清待用;取部分肝組織立即進(jìn)行冰凍切片，油紅O染色;收集心、肺、肝、胰、腎、脾、小腸(近回盲部)等臟器標(biāo)本，于10%中性甲醛溶液中固定，經(jīng)脫水、透明、浸蠟、包埋制成組織蠟塊待用。

1.6 檢測(cè)指標(biāo)

動(dòng)態(tài)觀察兩組沙鼠3個(gè)時(shí)相點(diǎn)體重，全自動(dòng)生化儀檢測(cè)3個(gè)時(shí)相點(diǎn)血清 Glu、TG、CHOL、HDL-C、LDL-C、UA、Cr、BUN、TBil、TP、ALB、ALT、AST、AMS水平，冰凍切片肝組織油紅O染色觀察肝臟脂質(zhì)沉積情況，各臟器石蠟組織切片后常規(guī)HE染色光學(xué)顯微鏡觀察組織病理學(xué)變化，Mossan染色觀察肝組織纖維化程度。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 高脂飲食對(duì)沙鼠體重的影響

高脂飲食喂養(yǎng)4周后，模型組沙鼠體重增加稍快于正常組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，至8周時(shí)較正常組明顯增加(P＜0.05)，而16周時(shí)正常組體重略有增加，而模型組基本維持與8周同一水平，見表1。

2.2 高脂飲食對(duì)沙鼠血糖及血脂的影響

模型組沙鼠血糖水平隨高脂飼料喂養(yǎng)時(shí)間增加而降低，模型組16周時(shí)相點(diǎn)較4周、8周時(shí)相點(diǎn)顯著降低(P＜0.05)，模型組16周時(shí)也較正常組16周時(shí)明顯降低(P＜0.01)。

血脂方面，除模型組4周時(shí)TG水平與正常組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，模型組8周、16周時(shí)的TG水平及3個(gè)時(shí)相點(diǎn)的CHOL、HDL、LDL水平均較同期正常組顯著增高(P＜0.01);高脂喂養(yǎng)4周時(shí)和8周時(shí)的血脂水平總體持平，而至16周時(shí)則較4周、8周顯著增高(P＜0.01)。見表2。

2.3 高脂飲食對(duì)長(zhǎng)爪沙鼠肝功能的影響

模型組沙鼠血清ALT、AST水平在4周時(shí)即較同一時(shí)相點(diǎn)正常組顯著增高(P＜0.01)，8周時(shí)達(dá)到高峰，16周時(shí)ALT有所降低、AST則維持在高水平，均較同一時(shí)相點(diǎn)正常組明顯增高(P＜0.01)。模型組TP水平8周時(shí)較同一時(shí)相點(diǎn)正常組明顯增高(P＜0.01)，4周、16周時(shí)則與正常組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);隨高脂飲食時(shí)間增加模型組沙鼠血清ALB水平8周時(shí)較4周時(shí)顯著增高，而16周時(shí)則較 4周、8周顯著降低;模型組球蛋白(GLB)、TBil水平則隨造模時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增高，而ALB/GLB則逐漸降低，見表3。

2.4 高脂飲食對(duì)沙鼠腎功能及血清淀粉酶的影響

高脂喂養(yǎng)4周、8周及16周3個(gè)時(shí)相點(diǎn)沙鼠血清BUN、CREA水平均與同一時(shí)相點(diǎn)正常組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)(P＞0.05);模型組沙鼠血清UA水平在4周、8周時(shí)與正常組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)，在16周時(shí)則較同一時(shí)相點(diǎn)正常組及模型組4周、8周時(shí)相點(diǎn)均顯著增高(P＜0.01);模型組沙鼠血清AMS水平在4周、8周時(shí)與正常組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，在16周時(shí)則較同一時(shí)相點(diǎn)正常組明顯增高(P＜0.01)。見表4。

表1高脂飲食對(duì)沙鼠體重的影響(，g)Tab．1Effect of high fat diet on the body weight of gerbils(，g)

表1高脂飲食對(duì)沙鼠體重的影響(，g)Tab．1Effect of high fat diet on the body weight of gerbils(，g)

與同一時(shí)相點(diǎn)正常組比，*P＜0.05。Note．*P ＜0.05compared with the normal group at the same time point．

82.57±8.35 16周(n=8)16 weeks(n=8)正常組Normal 60.53±5.85 69.53±6.56 74.69±5.28 78.62±5.32模型組Model 60.50±6.09 74.95±3.79 83.52±8.96*分組Groups 造模型前(n=24)Before modeling(n=24)4周(n=8)4 weeks(n=8)8周(n=8)8 weeks(n=8)

表2高脂飲食對(duì)沙鼠血糖及血脂的影響(，n=8，mmol/L)Tab．2Effect of high fat diet on the blood glucose and lipid in the gerbils(，n=8，mmol/L)

表2高脂飲食對(duì)沙鼠血糖及血脂的影響(，n=8，mmol/L)Tab．2Effect of high fat diet on the blood glucose and lipid in the gerbils(，n=8，mmol/L)

注:與同一時(shí)相點(diǎn)正常組比*P＜0.05、＊＊P ＜0.01;與8周模型組比#P＜0.05、##P ＜0.01;與16周模型組比ΔP ＜0.05、ΔΔP ＜0.01。Note．*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01compared with the normal group at the same time point;#P ＜0.05、##P ＜0.01compared with the model group at 8 weeks;Δ P ＜0.05，ΔΔP ＜0.01compared with the model group at 16 weeks．

表3高脂飲食對(duì)沙鼠肝功能的影響，n=8)Tab．3Effect of high fat diet on the liver function in the gerbils(，n=8)

表3高脂飲食對(duì)沙鼠肝功能的影響，n=8)Tab．3Effect of high fat diet on the liver function in the gerbils(，n=8)

注:與同一時(shí)相點(diǎn)正常組比*P＜0.05、＊＊P ＜0.01;與8周模型組比#P＜0.05、##P ＜0.01;與16周模型組比ΔP ＜0.05、ΔΔP ＜0.01Note．*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01compared with the normal group at the same time point;#P ＜0.05，##P ＜0.01 compared with the model group at 8 weeks;ΔP ＜0.05、ΔΔP ＜0.01 compared with the model group at 16 weeks．

表4高脂飲食對(duì)沙鼠腎功能及血清淀粉酶的影響，n=8)Tab．4Effect of high fat diet on the renal function and serum AMS in the gerbils(，n=8)

表4高脂飲食對(duì)沙鼠腎功能及血清淀粉酶的影響，n=8)Tab．4Effect of high fat diet on the renal function and serum AMS in the gerbils(，n=8)

注:與同一時(shí)相點(diǎn)正常組比*P＜0.05、＊＊P ＜0.01;與8周模型組比#P＜0.05、##P ＜0.01;與16周模型組比Δ＜0.05、ΔP＜0.01。Note．*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 compared with the normal group at the same time point，#P ＜0.05，##P ＜0.01compared with the model group at 8 weeks;ΔP ＜0.05，ΔΔP ＜0.01compared with the model group at 16 weeks．

分組Groups尿素氮(BUN)(mmol/L)肌酐(CREA)(μmol/L)尿酸(UA)(μmol/L)淀粉酶(AMS)(U/L)4周正常組Normal 11.67±1.78 44.24±4.93 19.87±5.51 455.57±71.96 4weeks 模型組Model 10.15±3.16 40.70±3.11 15.46±13.56ΔΔ 488.25±153.84 8周8weeks正常組Normal 10.69±1.68 42.29±4.29 20.43±11.52 489.62±100.44模型組Model 12.46±2.68 45.09±6.22 28.52±14.59ΔΔ 573.62±175.20 16周16weeks正常組Normal 13.16±2.27 45.86±5.47 22.17±6.38 492.37±61.72模型組(Model) 11.34±3.60 47.77±24.57 108.06±51.03＊＊ 588.00±98.39*

2.5 高脂飲食對(duì)沙鼠心、肺、肝、胰腺、脾、腎、小腸等的組織病理學(xué)影響

HE染色光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)正常組沙鼠心肌纖維排列整齊，高倍鏡下顯示有橫紋，細(xì)胞間質(zhì)較少，內(nèi)見少量血管及結(jié)締組織。模型組4周心肌纖維排列仍整齊，胞漿內(nèi)少量的細(xì)小脂肪空泡;至8周心肌纖維變性，橫紋不清，模糊，胞漿內(nèi)可見數(shù)量不等脂肪小空泡，間質(zhì)水腫、血管擴(kuò)張，少量炎性細(xì)胞滲出;16周間質(zhì)水腫更明顯，炎性細(xì)胞滲出有增加，胞漿內(nèi)脂肪空泡增多，間質(zhì)內(nèi)脂肪細(xì)胞明顯增加;模型組各時(shí)相點(diǎn)間質(zhì)纖維化不明顯(圖1)。

HE染色光鏡下觀察沙鼠正常組肺結(jié)構(gòu)清楚，未見肺泡膈增厚，未見炎細(xì)胞浸潤。模型組4周時(shí)肺結(jié)構(gòu)清楚，肺泡毛細(xì)血管充血，肺胞膈略有增厚，伴少量炎癥細(xì)胞滲出;至8周時(shí)肺胞膈增厚較4周時(shí)明顯;16周時(shí)肺泡結(jié)構(gòu)欠完整，肺泡腔逐漸消失，內(nèi)可見大量泡沫細(xì)胞代替，部分見脂肪肉芽腫(圖2)。

沙鼠正常組肝臟大體觀察顏色鮮紅，邊緣銳利，表面光滑，質(zhì)軟而韌;模型組4周及8周時(shí)肝臟體積增大，邊緣變鈍，顏色呈奶油黃，質(zhì)地較正常組軟且韌性差，觸之似泥塊并有油膩感;至16周時(shí)肝臟色澤晦暗淡黃色，表面粗糙，質(zhì)地較正常組稍硬。油紅O染色發(fā)現(xiàn)正常組各組沙鼠肝細(xì)胞胞漿見少量細(xì)小的紅染物質(zhì)，模型組4、8周肝細(xì)胞內(nèi)沉積大量被染成紅色的脂肪，至16周時(shí)染成紅色脂肪的范圍有所減少。HE染色正常組肝組織結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心，向四周放射狀排列，匯管區(qū)結(jié)締組織略多，其內(nèi)見小葉間靜脈、小葉間動(dòng)脈和小葉間膽管斷面。模型組4周肝細(xì)胞內(nèi)彌漫脂肪空泡，肝小葉內(nèi)見少量點(diǎn)狀壞死，無肝細(xì)胞氣球樣變，Masson染色顯示無明顯的竇周纖維化;至8周時(shí)肝細(xì)胞內(nèi)脂肪空泡增多，肝小葉內(nèi)散在的壞死灶，肝細(xì)胞氣球樣變，竇周纖維化，部分合并門脈周圍纖維化;16周時(shí)肝小葉內(nèi)壞死灶較8周時(shí)略有減少，但肝細(xì)胞氣球樣變?nèi)悦黠@，Masson染色顯示間質(zhì)纖維化明顯，見橋接纖維化，部分可見假小葉形成(圖3～5)(圖1～5見文后彩插1)。

HE染色光鏡下觀察沙鼠胰腺結(jié)構(gòu)正常，外分泌腺腺泡結(jié)構(gòu)清晰，未見炎癥細(xì)胞滲出和纖維組織增生，胰島散在分布，內(nèi)結(jié)構(gòu)清楚。模型組4周、8周時(shí)未見明顯異常，16周時(shí)可見部分胰島增大，胰島內(nèi)內(nèi)分泌細(xì)胞增多(圖6)。

模型組沙鼠大體觀察脾臟體積較正常組明顯腫大，且隨造模時(shí)間的延長(zhǎng)而增大明顯。HE染色光鏡下觀察正常組沙鼠脾臟皮髓分界清楚，脾小體清晰可見。模型組4周、8周皮髓分界清楚，脾小體縮小，紅髓擴(kuò)大，內(nèi)可見散在泡沫樣細(xì)胞;至16周脾小體明顯縮小，紅髓內(nèi)被大量泡沫樣細(xì)胞所代替而擴(kuò)大(圖7)。

正常組及模型組沙鼠雙腎大體觀察大小均勻一致。HE染色顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)皮髓分界清楚，皮質(zhì)內(nèi)腎小球清晰可見，內(nèi)未見毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞增生，未見基質(zhì)增生，未見腎小管基底膜增生，略有毛細(xì)血管充血，腎小管可見少量濁腫變性(由于本實(shí)驗(yàn)未采用灌注固定，故處死取組織過程中可能會(huì)出現(xiàn)輕微的缺血缺氧變化，而腎小管對(duì)缺血缺氧特別敏感)，間質(zhì)內(nèi)未見炎癥細(xì)胞浸潤，未見纖維細(xì)胞增多;模型組各時(shí)相點(diǎn)鏡下未見明顯改變(圖8)。

HE染色光鏡下觀察正常組沙鼠小腸結(jié)構(gòu)正常，粘膜與粘膜下層向管腔內(nèi)凸起形成皺襞，粘膜表面大量突起的腸絨毛，絨毛表面可見單層柱狀上皮，間有杯狀細(xì)胞，絨毛間的上皮向固有層凹陷形成腸腺，肌層由內(nèi)環(huán)行和外縱行二層平滑肌組成，外膜為一層纖維膜。模型組各時(shí)相點(diǎn)小腸粘膜鏡下未見明顯改變(圖9)(圖6～9見文后彩插2)。

3 討論

高脂飲食給機(jī)體帶來的損傷一直是諸多學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)，大量研究證明，高脂飲食可導(dǎo)致血脂紊亂和肥胖，從而誘導(dǎo)機(jī)體免疫功能紊亂、血清炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子失衡以及細(xì)胞表面受體表達(dá)異常，而這些與機(jī)體炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。它產(chǎn)生危害主要通過2條途徑:一是脂質(zhì)在組織內(nèi)蓄積所導(dǎo)致的細(xì)胞毒性;二是高脂飲食引發(fā)血脂紊亂介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和自身免疫反應(yīng)［2］。本次研究發(fā)現(xiàn)高脂飲食可對(duì)沙鼠產(chǎn)生多種病理生理學(xué)影響。

高脂飲食對(duì)沙鼠血脂的影響十分明顯，隨造模時(shí)間的增加，沙鼠高脂血癥逐漸嚴(yán)重，TG、CHOL、HDL、LDL水平均越來越高，尤其是LDL水平在16周時(shí)是4周、8周時(shí)的4～5倍。本研究還觀察到，隨造模時(shí)間延長(zhǎng)，血清TG的水平也逐漸增高，同時(shí)出現(xiàn)高CHOL血癥和高TG血癥，這與我們以往觀察到給大鼠高脂飲食早期(4周)血清TG有增高而長(zhǎng)期喂養(yǎng)(8周、12周)后血清TG往往不高甚至降低［3］的表現(xiàn)不同;提示沙鼠對(duì)膳食脂質(zhì)的血脂變化模式可能與人類的反應(yīng)模式更接近，可能更適用于高脂血癥研究的模型選擇。

高脂飲食可造成沙鼠肝組織大量脂質(zhì)沉積，本研究顯示造模4周時(shí)肝細(xì)胞脂肪變已超過66%達(dá)到重度;8周時(shí)在脂肪變的基礎(chǔ)上，肝組織炎癥、壞死，肝細(xì)胞氣球樣變及間質(zhì)纖維化明顯，16周時(shí)間質(zhì)纖維化加重，出現(xiàn)早期肝硬化表現(xiàn)，部分沙鼠肝組織有假小葉形成;同時(shí)這些變化伴隨著肝功能的改變，高脂喂養(yǎng)使沙鼠ALT、AST及TBil或早或晚較正常組均顯著升高，且16周時(shí)模型組ALB及A/G較前期(4周與8周)出現(xiàn)了明顯下降，ALB全部由肝臟合成，這提示肝臟的合成功能受到了影響，可見高脂飲食沙鼠肝細(xì)胞損傷的發(fā)生，是非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholicfattyliverdisease，NAFLD)的典型表現(xiàn)。NAFLD被認(rèn)為是代謝綜合征在肝臟的一種表現(xiàn)［4］，大多數(shù) NAFLD患者不表現(xiàn)出任何癥狀，隨著疾病的進(jìn)展可出現(xiàn)肝臟脂肪變性、非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis，NASH)、肝硬化、肝細(xì)胞肝癌等［5］。本研究的沙鼠模型涵蓋了NAFLD疾病譜從非酒精性脂肪肝到肝硬化的各個(gè)階段，是NAFLD研究的良好模型。根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝臟病學(xué)分會(huì)的“非酒精性脂肪性肝病診療指南”中病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］，本模型16周時(shí)肝纖維化分期為S4(高度可疑或確診肝硬化)的有5例，S3(橋接纖維化)3例，Masson染色可明顯顯示部分沙鼠肝臟出現(xiàn)了假小葉，且均伴有脾大，為肝硬化的典型表現(xiàn)，而我們?cè)谝酝难芯坎捎脝渭兏咧嬍澄桂B(yǎng)大鼠僅可誘導(dǎo)明顯的肝纖維化表現(xiàn)，且實(shí)驗(yàn)周期達(dá)24周［7］，文獻(xiàn)報(bào)道也尚未見單純高脂飲食誘導(dǎo)的大、小鼠肝硬化模型，這說明沙鼠用于非酒精性脂肪性肝炎肝硬化的研究有著廣泛的前景。另外，本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)16周時(shí)沙鼠血尿酸水平明顯升高，已有研究證明高尿酸血癥和NAFLD之間存在關(guān)系［8］，因此沙鼠可能還是研究高脂飲食誘導(dǎo)的NAFLD與高尿酸血癥的相關(guān)性的良好模型。高尿酸血癥是嘌呤代謝障礙引起的代謝性疾病，和高脂血癥具有相關(guān)性，目前已有酵母膏+乙胺丁醇灌胃建立的小鼠高尿酸血癥模型［9］、高酵母飼料加腺嘌呤灌胃并適時(shí)給予氧嗪酸鉀乳懸液皮下注射所復(fù)制的大鼠慢性高尿酸血癥模型［10］、次黃嘌呤腹腔注射聯(lián)合尿酸氧化酶抑制劑皮下注射復(fù)制的小鼠高尿酸血癥模型［11］等，本研究單用高脂飲食喂養(yǎng)即使沙鼠血尿酸顯著升高，這為高尿酸血癥的動(dòng)物模型復(fù)制提供了新方法，或許能為高尿酸血癥的發(fā)病機(jī)制提供新的思路。

本實(shí)驗(yàn)還觀察到模型組沙鼠在16周時(shí)血糖較正常組且顯著降低，這和大鼠截然不同，長(zhǎng)期高脂飲食喂養(yǎng)的大鼠會(huì)產(chǎn)生胰島素抵抗，進(jìn)一步導(dǎo)致血糖升高［12，13］。但同樣有研究觀察到高脂飲食喂養(yǎng)12周可使沙鼠血糖明顯升高［14］，因此高脂飲食對(duì)沙鼠血糖的影響尚待進(jìn)一步研究。本研究觀察到16周時(shí)模型組沙鼠胰腺組織可見部分胰島增大，胰島內(nèi)內(nèi)分泌細(xì)胞增多，這表明沙鼠可能存在胰腺分泌胰島素的異常，但血糖卻反而降低，同時(shí)體重也未見明顯增加，如果今后進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)?zāi)茯?yàn)證上述這一特點(diǎn)，或許說明沙鼠體內(nèi)存在某一種機(jī)制能夠防止長(zhǎng)期高脂飲食誘導(dǎo)的糖尿病的發(fā)生，進(jìn)一步研究這一現(xiàn)象或許能為以后糖尿病的治療提供新的思路。

本研究通過HE染色光鏡下未觀察到胰腺明顯的充血、水腫、壞死等病理改變，但血清淀粉酶水平在16周時(shí)較正常組顯著增高。高脂血癥是急性胰腺炎的常見病因之一，其機(jī)制目前尚未完全清楚，可能與其激活胰蛋白酶，消化胰腺腺泡引起胰腺的自身消化;或造成胰腺的微循環(huán)障礙，胰液分泌受阻等有關(guān)［15］。進(jìn)一步研究可以通過電鏡觀察胰腺超微結(jié)構(gòu)，探討單純高脂飲食與血清淀粉酶升高及高脂血癥性急性胰腺炎之間的關(guān)系，也可以通過延長(zhǎng)高脂飲食喂養(yǎng)時(shí)間觀察是否可以誘導(dǎo)出高脂血癥性急性胰腺炎模型。

高脂飲食的喂養(yǎng)使模型組沙鼠逐漸出現(xiàn)肺胞膈增厚，炎癥細(xì)胞滲出，肺泡腔消失，代以大量泡沫細(xì)胞及脂肪肉芽腫形成，說明高脂飲食會(huì)導(dǎo)致肺損傷，并介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的發(fā)生。高脂飲食喂養(yǎng)的小鼠肺組織亦可觀察到和本實(shí)驗(yàn)類似的病理學(xué)改變［2］，已有學(xué)者在高脂飲食喂養(yǎng)的大鼠模型中觀察到肺纖維化［16］，但本模型未觀察到明顯的肺纖維化的發(fā)生。高脂飲食喂養(yǎng)的沙鼠在16周還出現(xiàn)了明顯的心肌脂肪變性和心肌損傷，這說明該模型可能可以用于高脂血癥相關(guān)的心肌損傷的研究。但本研究HE染色光鏡下未觀察到腎組織和腸粘膜的病理改變，血清肌酐、尿素氮也未見異常。

本研究提示，高脂飲食可誘導(dǎo)良好高脂血癥、非酒精性脂肪性肝炎肝硬化沙鼠模型，并且高脂飲食喂養(yǎng)的沙鼠可能是高脂血癥相關(guān)的高尿酸血癥、肺損傷及心肌損傷等的良好模型。

［1］ 陳春明，趙文華，楊正雄，等．中國慢性病控制中膳食關(guān)鍵因素的研究［J］．中華流行病學(xué)雜志，2006，27(09):739－743．

［2］ 龔雪，沈煉桔，劉丹，等．細(xì)胞凋亡抑制因子6(Api6)在高脂肺損傷中的作用研究［J］．西南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2011，33(02):40 －45．

［3］ 溫秀梅，陳芝蕓，嚴(yán)茂祥，等．大鼠非酒精性脂肪性肝炎形成中脂質(zhì)代謝的變化［J］．中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2008，26(09):1987－1989．

［4］ Dietrich P，Hellerbrand C．Non-alcoholic fatty liver disease，obesity and the metabolic syndrome［J］．Best Pract Res Clin Gastroenterol，2014，28(4):637 －653．

［5］ Federico A，Zulli C，De Sio I，et al．Focus on emerging drugs for the treatment of patients with non-alcoholic fatty liver disease［J］．World J Gastroenterol，2014，20(45):16841 －16857．

［6］ 中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝臟病學(xué)分會(huì)脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組．非酒精性脂肪性肝病診療指南［J］．中華肝臟病雜志，2006，14(03):161－163．

［7］ 婁國強(qiáng)，萬虎，施軍平，等．高脂飲食誘導(dǎo)的脂肪性肝纖維化大鼠肝組織TGFβ_1和CTGFmRNA表達(dá)及其意義［J］．醫(yī)學(xué)研究雜志，2006，35(12):13－17．

［8］ 郭彩云，聶秀玲，孫麗榮，等．高尿酸血癥/痛風(fēng)與非酒精性脂肪肝嚴(yán)重程度的相關(guān)研究［J］．天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，19(06):499－501．

［9］ 董靜，朱平，程康鵬，等．小鼠高尿酸血癥模型探討［J］．中國心血管雜志，2009，14(03):237－239．

［10］ 張培，苗志敏，李長(zhǎng)貴，等．慢性高尿酸血癥大鼠模型建立方法的探討［J］．青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，46(03):219－221．

［11］ 徐立，時(shí)樂．小鼠代謝性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法初探［J］．中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2006，16(01):1－4．

［12］ Yang SJ，Shoi JM，Park SE，et al．Preventive effects of bitter melon(Momordica charantia)against insulin resistance and diabetes are associated with the inhibition of NF-kappaB and JNK pathways in high-fat-fed OLETF rats［J］．J Nutr Biochem，2015，26(3):234 －240．

［13］ Brahmanaidu P，Nemani H，Meriga B，et al．Mitigating efficacy of piperine in the physiological derangements of high fat diet induced obesity in Sprague Dawley rats［J］．Chem Biol Interact，2014，221:42 －51．

［14］ 徐黎明，石巧娟，徐磊，等．蒙古沙鼠非酒精性脂肪性肝病模型的建立與評(píng)價(jià)［J］．浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，2007，19(11):1－7．

［15］ Wang Y，Sternfeld L，Yang F，et al．Enhanced susceptibility to pancreatitis in severe hypertriglyceridaemic lipoprotein lipasedeficient mice and agonist-like function of pancreatic lipase in pancreatic cells［J］．Gut，2009，58(3):422 － 430．

［16］ 于洪志．高脂飲食對(duì)大鼠肺組織CTGF的影響［J］．西南軍醫(yī)，2013，15(05):487－489．