中藥藤莓湯對Ⅱ型膠原誘導(dǎo)性大鼠關(guān)節(jié)炎性病理損傷的影響

陸 妍，王亞南，劉 慧，馬衛(wèi)國，張繼勝，譚 玲，李慧慧，林子超，沈志明，王 潔，孟鳳仙

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院風(fēng)濕科，北京 100078；2.昌平區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院腦病科，北京 102208；3.密云縣中醫(yī)院風(fēng)濕科，北京 101500）

中藥藤莓湯對Ⅱ型膠原誘導(dǎo)性大鼠關(guān)節(jié)炎性病理損傷的影響

陸 妍1，王亞南1，劉 慧1，馬衛(wèi)國1，張繼勝1，譚 玲2，李慧慧3，林子超1，沈志明1，王 潔1，孟鳳仙1

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院風(fēng)濕科，北京 100078；2.昌平區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院腦病科，北京 102208；3.密云縣中醫(yī)院風(fēng)濕科，北京 101500）

目的探討中藥藤莓湯對Ⅱ型膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎（collagen-induced arthritis，CIA）大鼠關(guān)節(jié)滑膜炎癥指數(shù)、四肢腫脹程度、關(guān)節(jié)組織炎性浸潤的改善情況，以及免疫炎性相關(guān)因子影響。方法 建立CIA模型，將造模成功的SD大鼠隨機(jī)分為模型組、陽性藥組、中藥大、小劑量組，設(shè)正常對照組，每組6只，干預(yù)治療12周。每周使用游標(biāo)卡尺測量四肢踝腕部前后徑、左右徑，爪掌足墊厚度，以及雙后肢的跖關(guān)節(jié)腫脹最高點(diǎn)寬度，評價(jià)其關(guān)節(jié)積分和四肢腫脹程度。結(jié)果 ①與正常組比較，模型組大鼠關(guān)節(jié)炎總AI評分及雙后肢AI評分顯著增加（P＜0.05或P＜0.01）；左前肢AI評分在10-12周時(shí)升高（P＜0.05）；左后肢前后徑、左右徑、足墊厚度及左后肢跖骨最高點(diǎn)測量值在1-12 w不同時(shí)間段增加（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，中藥大、小劑量組總AI評分及左后肢關(guān)節(jié)AI評分在6 w后降低（P＜0.05）；陽性藥組10-12 w時(shí)左前肢AI評分下降（P＜0.05）。②與正常組比較，模型組IL-6、TNF-α mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)（P＜0.01）。與模型組比較，陽性藥組、中藥大、小劑量組IL-6、TNF-α mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)（P＜0.01）。③光鏡檢測結(jié)果顯示：中藥小劑量組明顯改善了CIA模型大鼠關(guān)節(jié)滑膜增生、炎性細(xì)胞浸潤情況。結(jié)論 中藥藤莓湯改善CIA模型大鼠關(guān)節(jié)病理損傷的分子機(jī)制可能與其抑制滑膜組織免疫炎性因子高表達(dá)相關(guān)。

中藥藤莓湯；CIA模型；AI積分；病理改變；免疫炎性機(jī)制

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是以關(guān)節(jié)滑膜慢性炎癥為主要表現(xiàn)的高致殘性、炎癥性自身免疫性疾病，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失。因此，尋找靶向治療對策，是目前國際醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用牛Ⅱ型膠原和完全弗氏佐劑聯(lián)合應(yīng)用建立CIA大鼠模型，通過對大鼠一般情況觀察、體重分析、四肢關(guān)節(jié)AI積分評價(jià)、四肢腫脹程度的分析、關(guān)節(jié)組織病理學(xué)檢測，以及相關(guān)炎性因子的檢測，討論有良好臨床療效基礎(chǔ)的中藥藤莓湯對CIA模型大鼠的關(guān)節(jié)滑膜免疫炎性病理損傷的改善及分子機(jī)制，探討中醫(yī)藥治療RA的作用環(huán)節(jié)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)環(huán)境

SPF級(jí)雄性SD大鼠90只，體重（200～220）g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2012-0001）。北京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（京）2011-0024。

1.2 儀器與試劑

試劑：牛源性Ⅱ型膠原蛋白（bovine type II collagen，CII），購自Chondre公司（Lot130087）；完全弗氏佐劑（Freund’s complete adjuvant，F(xiàn)CA），購自Sigma公司（CAS 9007-81-2）；大鼠 IL-6、TNF-α ELISA試劑盒購自eBioscience公司；Trizol提取總RNA試劑為Invitrogen公司產(chǎn)品，批號(hào)：66007；One Step SYBR RT-PCR Kit為Takara公司產(chǎn)品，批號(hào)：BK1401；GAPDH、目標(biāo)基因上下游引物均為美國invitrogen（上海）英駿生物技術(shù)有限公司合成。儀器：Applied Biosystems 7500型定量PCR儀，美國應(yīng)用生物系統(tǒng)（ABI）公司；TC-96/G/H（b）梯度PCR儀，博日科技有限公司；HC-3018R高速冷凍離心機(jī)，中科中佳公司；RT-6000型酶標(biāo)儀，深圳雷杜公司產(chǎn)品；超凈工作臺(tái)（SW-CJ-IFD）。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物

中藥藤莓湯（忍冬藤30 g，蛇莓15 g，烏蛇10 g，白芥子10 g，乳香10 g，沒藥10 g，桑枝30 g，穿山龍30 g等），由北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院藥劑科制劑室提供。來氟米特片（蘇州長征-欣凱制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20000550）。

1.4 造模及分組

1.4.1 牛Ⅱ型膠原與完全弗氏佐劑混合乳劑的配制（濃度為1 mg/mL）：取114 μL冰醋酸放置于50 mL離心管，加20 mL滅菌注射用水，配成0.1 mol/L冰醋酸溶液，4℃冰箱降溫。將15 mL醋酸加入30 mg C II凍粉中使膠原完全溶解，4℃避光過夜。次日取已配制好的牛C II冰醋酸溶液及FCA各15 mL，用自制乳化器（輸液器膠管連接2個(gè)注射器）在冰浴條件下將其完全乳化。4℃避光儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 造模方法：初次免疫時(shí)（0 d），于造模組大鼠尾根部皮內(nèi)注射200 μL C和FCA的混合乳劑（含C II 200 μg）。加強(qiáng)免疫時(shí)（初次免疫后第9天），于大鼠尾根部皮內(nèi)注射100 μL C II和FCA的混合乳劑（含C II 100 μg），正常對照組注射等體積的生理鹽水。16 d（初次免疫后1周）時(shí)對CIA大鼠模型進(jìn)行評價(jià)，用游標(biāo)卡尺測量腫脹部位具體數(shù)值以平價(jià)四肢腫脹程度，進(jìn)行關(guān)節(jié)AI評分。

1.4.3 模型評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)［1，2］及成模數(shù)量 ：關(guān)節(jié)炎模型評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：0分，正常。1分，明顯可見的腕/踝關(guān)節(jié)輕度腫脹或局限于單個(gè)關(guān)節(jié)腫脹或少數(shù)幾個(gè)關(guān)節(jié)受累。2分，中度的腕/踝關(guān)節(jié)腫脹，僅局限于單個(gè)腕/踝關(guān)節(jié)，不累及其他指間關(guān)節(jié)。3分，嚴(yán)重的腕/踝關(guān)節(jié)腫脹，累及足爪（足背及掌指/跖趾關(guān)節(jié)）。4分，整個(gè)肢體腫脹累及多個(gè)關(guān)節(jié)。AI評分≥4分者視為模型成功。本實(shí)驗(yàn)84只造模組大鼠中70只模型成功，成模率為83.3％。

1.4.4 實(shí)驗(yàn)分組：隨機(jī)抽取造模成功大鼠30只，分為模型組，陽性藥物組，中藥大劑量組，中藥小劑量組，每組各6只，另設(shè)正常對照組6只。

1.5 干預(yù)方法

正常組與模型組予蒸餾水10 mL/kg﹒d灌胃。陽性藥組予來氟米特灌胃，劑量為1.87 mL/kg﹒d。中藥大劑量組按照生藥量31.8 mL/kg﹒d灌胃給藥。中藥小劑量組按照生藥量15.9 mL/kg﹒d灌胃給藥。各藥物組中藥量相當(dāng)于臨床常人等公斤體重用量的5.6倍。干預(yù)治療12周。

1.6 觀察指標(biāo)

1.6.1 CIA模型大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)（Arthritis index，AI）變化：干預(yù)治療后每周進(jìn)行AI評分，觀察關(guān)節(jié)炎指數(shù)變化情況。

1.6.2 CIA模型大鼠四肢腫脹程度的改善情況：使用游標(biāo)卡尺測量大鼠雙前肢足墊厚度，腕橫紋部與掌面垂直的厚度（前后徑），腕橫紋部尺橈外點(diǎn)的厚度（左右徑），雙后肢的足墊厚度，踝的背部橫紋到足跟處的厚度（前后徑），踝部內(nèi)外側(cè)高點(diǎn)的厚度（左右徑）。為了更好地評估關(guān)節(jié)腫脹程度，加設(shè)了跖骨腫脹最高的部分垂直足墊的厚度（跖骨高點(diǎn)）。

1.6.3 CIA模型大鼠滑膜組織相關(guān)炎性因子的檢測：1.6.3.1 RT-PCR技術(shù)檢測CIA模型大鼠滑膜組織IL-6、TNF-αmRNA轉(zhuǎn)錄水平：取CIA模型大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織，使用Trizol試劑提取RNA后，進(jìn)行一步法RT-PCR反應(yīng)，檢測TNF-α、IL-6水平。反應(yīng)體積為25 μL，反應(yīng)體系含樣本RNA 2 μL，10 pmol引物各0.8 μL。TNF-α、IL-6基因序列：針對TNF-α基因序列的上下游引物分別是：5-GGATCTCAAAGA CAACCAAC-3和5-ACAGAGCAATGACTCCAAAG-3；針對 IL-6基因序列的上下游引物分別是：5-CCCTGACTGGCTAAAGGACA-3和5-CAGTACAGCC GCCTTCT AGG-3；針對看家基因GAPDH基因序列的引物分別是：5-CCCATCTATGAGGGTTACGC-3和5-TTTA ATGTCACGCACGATTTC-3。擴(kuò)增條件為：42℃滅活5 min，95℃變性10 s，95℃ 退火5 s，60℃延伸34 s，共40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行熔解曲線分析，以鑒定PCR產(chǎn)物的特異性。使用SDS軟件分析 RT-PCR過程各檢測樣本的 Ct（threshold of cycle）值。

1.6.3.2 ELISA技術(shù)檢測CIA模型大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織IL-6、TNF-α蛋白表達(dá)水平：取出試劑盒，按按試劑盒說明操作。用酶標(biāo)儀測定450 nm處各孔的吸光值，陽性反應(yīng)的最大稀釋度為待測樣品的效價(jià)。1.6.4 CIA模型大鼠右踝關(guān)節(jié)組織病理學(xué)變化：干預(yù)治療12周后，觀察各組大鼠右踝關(guān)節(jié)的病理學(xué)變化。將固定好的右踝關(guān)節(jié)取材、脫鈣后，流水沖洗數(shù)小時(shí)，經(jīng)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋后，4 μm切片，進(jìn)行HE染色，光鏡觀察關(guān)節(jié)滑膜被覆上皮有無變性、增生，間質(zhì)有無炎細(xì)胞浸潤及肉芽組織形成；關(guān)節(jié)周圍軟組織有無炎細(xì)胞浸潤或纖維化。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 中藥藤莓湯對CIA模型大鼠關(guān)節(jié)AI積分的影響

2.1.1 大鼠關(guān)節(jié)總AI積分變化：與正常組比較，模型組大鼠關(guān)節(jié)總AI積分在0～12周顯著增加（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，陽性藥組在10周時(shí)關(guān)節(jié)總AI積分明顯降低，具有顯著差異（P＜0.01）；中藥大劑量組在6周～11周時(shí)AI分值明顯下降（P＜0.05或P＜0.01）；中藥小劑量組在6周、8周、9周、10周時(shí)關(guān)節(jié)總AI積分降低（P＜0.05或P＜0.01）（表1）。

2.1.2 大鼠左前肢及左后肢AI積分變化：與正常組比較，模型組左前肢AI積分10周-12周時(shí)明顯升高（P＜0.05）。左后肢AI積分在1周～11周時(shí)升高，有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，陽性藥組左前肢AI積分10周-12周顯著降低（P＜0.05）；左后肢AI積分在10周時(shí)明顯下降（P＜0.01）。中藥大劑量組左前肢AI積分在10周～12周顯著降低（P＜0.05）；左后肢AI積分6周～11周時(shí)下降（P＜0.05或P＜0.01）；中藥小劑量組左后肢AI積分6周、8周～11周時(shí)降低（P＜0.01）（表2，3）。

表1 各組大鼠關(guān)節(jié)總AI變化（±s，n=6）Tab.1 Changes of arthritis indexes in the rats of all groups（±s n=6）

表1 各組大鼠關(guān)節(jié)總AI變化（±s，n=6）Tab.1 Changes of arthritis indexes in the rats of all groups（±s n=6）

注：與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01Note.Compared with the normal group，#P＜0.05，##P＜0.01；Compared with the model group，*P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別0周 1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周 8周 9周 10周 11周 12周Groups正常組0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00± Normal group0.000.000.000.000.000.000.000.000.000.000.000.000.00模型組7.17±8.33±8.50±8.67±8.50±5.17±8.50±9.33±9.17±9.17±9.33±9.83±7.17± Model group1.33##0.82##0.84##1.21##0.84##4.31#1.76##2.07##2.04##2.40##2.07##3.49#3.37#陽性藥組7.67±7.50±7.50±7.50±8.00±3.00±6.33±4.67±6.50±5.67±3.67±4.50±3.67± Positive group1.972.172.671.761.793.352.072.731.982.341.51＊＊3.021.51中藥大劑量組7.50±8.33±8.33±7.17±7.00±5.00±3.00±2.67±1.00±1.50±2.33±1.67±1.83± High-dose group2.351.511.972.231.673.291.10＊＊2.07＊＊1.67＊＊△△1.98＊＊0.82＊＊0.82*2.23中藥中劑量組7.00±9.00±8.00±5.67±6.00±3.33±2.67±3.00±1.67±1.83±2.67±3.17±2.00± Low-dose group1.673.524.204.083.105.321.63＊＊3.522.25＊＊△2.23＊＊2.73*2.563.03

表2 各組大鼠左前肢AI變化（±s，n=6）Tab.1 Changes of arthritis indexes of the left forelimb of rats in all groups（±s，n=6）

表2 各組大鼠左前肢AI變化（±s，n=6）Tab.1 Changes of arthritis indexes of the left forelimb of rats in all groups（±s，n=6）

注：與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01Note.Compared with the normal group，#P＜0.05，##P＜0.01；Compared with the model group，*P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別0周 1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周 8周 9周 10周 11周 12周Groups正常組0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00± Normal group0.000.000.000.000.000.000.000.000.000.000.000.000.00模型組0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.67±0.67±0.67±0.50±0.50±1.00±1.33±1.00± Model group0.000.000.000.000.001.631.631.630.840.841.67#2.07#1.67#陽性藥組0.00±0.00±0.17±0.17±0.33±0.00±0.17±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00± Positive group0.000.000.410.410.520.000.410.000.000.000.00*0.00*0.00*中藥大劑量組0.50±0.67±0.83±0.67±0.33±0.17±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00± High-dose group1.231.031.331.030.820.410.000.000.000.000.00*0.00*0.00*中藥小劑量組0.00±0.67±0.67±0.50±0.33±0.83±0.00±0.00±0.33±0.33±0.33±0.33±0.33± Low-dose group0.001.631.631.230.821.330.000.000.820.820.820.820.82

表3 各組大鼠左后肢AI變化（±s，n=6）Tab.3 Changes of arthritis indexes of the left hind limb in rats of all groups（±s，n=6）

表3 各組大鼠左后肢AI變化（±s，n=6）Tab.3 Changes of arthritis indexes of the left hind limb in rats of all groups（±s，n=6）

注：與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01Note：Compared with the normal group，#P＜0.05，##P＜0.01；Compared with the model group，*P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別0周 1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周 8周 9周 10周 11周 12周Groups正常組0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00±0.00± Normal group0.000.000.000.000.000.000.000.000.000.000.000.000.00模型組3.17±4.00±4.00±4.00±4.00±2.17±3.83±4.00±4.00±4.00±4.00±3.83±2.83± Model group1.330.00##0.00##0.00##0.00##1.72#0.41##0.00##0.00##0.00##0.00##0.41##0.75陽性藥組4.00±3.83±3.67±3.50±3.83±1.33±3.33±2.33±3.33±3.00±2.00±2.17±2.00± Positive group0.000.410.520.550.411.750.521.370.820.890.63＊＊1.470.63中藥大劑量組3.17±3.83±3.83±3.33±3.33±2.33±1.50±1.33±0.50±0.83±1.17±0.83±0.83± High-dose group1.600.410.410.820.521.510.55＊＊△△1.03*0.84＊＊△△0.98＊＊△0.41＊＊0.41＊＊0.75中藥小劑量組3.50±3.83±3.33±2.33±2.67±1.00±1.33±1.50±0.33±0.50±1.00±1.17±0.67± Low-dose group0.840.410.820.820.821.550.82＊＊△1.760.52＊＊△△0.55＊＊△△0.63＊＊0.75＊＊0.82

2.1.3 大鼠右前肢及右后肢AI積分變化：與正常組比較，模型組大鼠右前肢AI積分在0～12周時(shí)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）右后肢AI積分在0～12周顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，陽性藥組右后肢AI評分在10周時(shí)明顯下降（P＜0.05）；中藥大劑量組在6～12周時(shí)右后肢AI積分下降（P＜0.05或P＜0.01）；中藥小劑量組6周、8～12周右后肢AI積分降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）（表4，5）。

2.2 中藥藤莓湯對CIA模型大鼠雙后肢腫脹程度的改善

2.2.1 左后肢前后徑、左右徑變化情況：與正常組比較，模型組大鼠左后肢前后徑測量值在2周、3周、6周、8周、10～12周時(shí)明顯增加（P＜0.05）；左后肢左右徑測量值在1～4周，6～12周時(shí)顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，中藥大劑量組12周時(shí)左后肢前后徑測量值下降（P＜0.05）；中藥小組12周時(shí)左后肢前后徑、左右徑測量值降低（P＜0.05）。見表6，7。

表4 各組大鼠右前肢AI變化（±s，n=6）Tab.4 Changes of arthritis indexes of the right forelimb in rats of all groups（±s，n=6）

表4 各組大鼠右前肢AI變化（±s，n=6）Tab.4 Changes of arthritis indexes of the right forelimb in rats of all groups（±s，n=6）

注：與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01Note.Compared with the normal group，#P＜0.05，##P＜0.01；Compared with the model group，*P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別Groups 0周 1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周 8周 9周 10周 11周 12周正常組Normal group（6）0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00模型組Model group（6）0.00± 0.00 0.33± 0.82 0.50± 0.84 0.67± 1.21 0.50± 0.84 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.67± 1.63 0.67± 1.63 0.67± 1.63 0.33± 0.82 0.67± 1.63 0.33± 0.82陽性藥組Positive groupgroup（6）0.33± 0.82 0.50± 0.84 0.50± 0.84 0.83± 0.98 0.50± 0.84 0.17± 0.41 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00中藥大劑量組High-dose group（6）0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.17± 0.41 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.33± 0.82中藥小劑量組Low-dose group（6）0.00± 0.00 0.67± 1.63 0.67± 1.63 0.50± 1.23 0.33± 0.82 0.50± 1.23 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.33± 0.82 0.33± 0.82 0.33± 0.82 0.33± 0.82 0.33± 0.82

表5 各組大鼠右后肢AI變化（±s，n=6）Tab.5 Changes of arthritis indexes of the right hind limb in rats of all groups（±s，n=6）

表5 各組大鼠右后肢AI變化（±s，n=6）Tab.5 Changes of arthritis indexes of the right hind limb in rats of all groups（±s，n=6）

注：與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01Note.Compared with the normal group，#P＜0.05，##P＜0.01；Compared with the model group，*P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別Groups 0周 1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周 8周 9周 10周 11周 12周正常組Normal group 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00 0.00± 0.00模型組Model group 4.00± 0.00## 4.00± 0.00## 4.00± 0.00## 4.00± 0.00## 4.00± 0.00## 2.33± 1.51# 4.00± 0.00## 4.00± 0.00## 4.00± 0.00## 4.00± 0.00## 4.00± 0.00## 4.00± 0.00## 3.00± 0.63##陽性藥組Positive group 3.33± 1.63 3.17± 1.60 3.17± 1.60 3.00± 1.55 3.33± 1.21 1.50± 1.64 2.83± 1.47 2.33± 1.37 3.00± 1.55 2.67± 1.51 1.67± 1.03* 2.33± 1.63 1.67± 1.03中藥大劑量組High-dose group（6）3.83± 0.41 3.83± 0.41 3.50± 0.55 3.17± 0.98 3.33± 0.52 2.50± 1.64 1.50± 0.55＊＊1.33± 1.03* 0.50± 0.84＊＊0.67± 1.03＊＊1.17± 0.41＊＊0.83± 0.41＊＊0.67± 0.82＊＊中藥小劑量組Low-dose group（6）3.50± 0.84 3.83± 0.41 3.33± 0.82 2.33± 0.82 2.67± 0.82 1.00± 1.55＊＊1.33± 0.82＊＊1.50± 1.76 0.67± 0.52＊＊0.67± 0.82＊＊1.00± 0.63＊＊1.33± 0.52＊＊0.67± 0.82＊＊

2.2.2 左后肢足墊厚及跖骨最高點(diǎn)改善情況：與正常組比較，模型組大鼠足墊厚測量值在3周、5周、11周時(shí)升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；左后肢跖骨最高點(diǎn)測量值在1～6周、8～12周時(shí)顯著增加（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，各治療組間左后肢足墊厚及左后肢跖關(guān)節(jié)腫脹程度的改善無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表8，9。

表6 各組大鼠左后肢前后徑（mm）變化（±s，n=6）Tab.6 Changes of the anteroposterior diameters of the left hind limbs of rats in all groups（±s，n=6）

表6 各組大鼠左后肢前后徑（mm）變化（±s，n=6）Tab.6 Changes of the anteroposterior diameters of the left hind limbs of rats in all groups（±s，n=6）

注：與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01Note.Compared with the normal group，#P＜0.05，##P＜0.01；Compared with the model group，*P＜0.05，＊＊P＜0.01.

組別Groups 0周 1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周 8周 9周 10周 11周 12周正常組Normal group 7.61± 0.63 7.23± 0.48 8.00± 0.73 8.21± 0.45 8.38± 0.64 7.47± 1.87 8.05± 0.65 8.44± 0.87 8.55± 0.29 7.68± 2.36 7.78± 0.74 7.94± 0.68 7.78± 0.78模型組Model group 10.87± 2.53 11.96± 1.23## 11.77± 1.12## 11.75± 0.67## 9.87± 3.72 10.86± 1.11 10.63± 1.01## 9.87± 1.11 10.33± 0.50## 10.60± 1.06 10.27± 1.00# 10.24± 0.88## 10.48± 0.66##陽性藥組Positive group 12.23± 1.22 12.21± 0.78 11.51± 0.78 11.16± 0.73 10.67± 0.61 10.76± 0.76 10.27± 0.90 9.72± 0.93 10.28± 0.58 9.98± 0.58 10.26± 0.67 10.31± 0.51 10.27± 0.68中藥大劑量組High-dose group 11.91± 1.16 12.45± 0.70 11.57± 0.93 10.74± 0.87 10.25± 1.21 11.17± 0.73 10.22± 0.79 10.14± 0.67 10.64± 0.83 10.35± 0.72 10.11± 0.44 10.18± 0.70 9.71± 1.02*中藥小劑量組Low-dose group 12.50± 0.98 11.93± 1.00 11.21± 1.08 10.56± 1.00 9.80± 0.90 10.69± 0.71 9.73± 0.66 9.25± 1.48 9.92± 0.93 9.72± 0.98 9.51± 0.99 9.51± 0.80 9.02± 0.63*

表7 各組大鼠左后肢左右徑（mm）變化（±s，n=6）Tab.7 Changes of the transverse diameters of the left hind limbs of rats in all groups（±s，n=6）

表7 各組大鼠左后肢左右徑（mm）變化（±s，n=6）Tab.7 Changes of the transverse diameters of the left hind limbs of rats in all groups（±s，n=6）

注：與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01Note.Compared with the normal group，#P＜0.05，##P＜0.01；Compared with the model group，*P＜0.05，＊＊P＜0.01.

組別Groups 0周 1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周 8周 9周 10周 11周 12周正常組Normal group 5.98± 0.33 6.60± 0.52 6.12± 0.44 6.69± 0.45 6.51± 0.30 6.89± 1.02 6.53± 0.59 6.51± 0.50 6.59± 0.46 6.64± 0.44 6.49± 0.48 6.33± 0.35 5.92± 1.40模型組Model group 8.98± 1.89 10.19± 1.13## 9.70± 0.62## 9.77± 0.68## 9.30± 0.69## 7.95± 1.18 8.91± 0.58## 8.66± 0.54## 9.34± 0.49## 8.75± 0.58## 8.66± 0.49## 8.95± 0.64## 8.61± 0.70##陽性藥組Positive group 9.51± 0.60 9.77± 0.61 9.61± 0.94 9.14± 0.58 9.28± 0.49 8.24± 1.01 8.28± 0.27 8.91± 0.46 8.32± 0.45 8.28± 0.58 8.09± 0.48 8.20± 0.49 8.10± 0.44中藥大劑量組High-dose group 9.34± 1.05 10.05± 1.05 9.28± 0.52 8.85± 0.54 8.32± 0.62 8.50± 0.33 8.27± 0.64 8.66± 0.82 8.65± 0.55 8.36± 0.61 8.38± 0.70 8.27± 0.66 7.85± 0.97中藥小劑量組Low-dose group 9.75± 0.86 10.21± 0.64 9.27± 0.89 8.59± 0.63 8.20± 0.77 8.42± 1.11 8.21± 0.49 8.58± 0.92 8.43± 0.81 7.62± 1.05 7.46± 1.03 7.98± 0.56 7.87± 0.90*

表8 各組大鼠左后肢足墊厚（mm）變化（±s，n=6）Tab.8 Changes of the Left hind limb foot pad thicknessin of the rats in all groups（±s，n=6）

表8 各組大鼠左后肢足墊厚（mm）變化（±s，n=6）Tab.8 Changes of the Left hind limb foot pad thicknessin of the rats in all groups（±s，n=6）

注：與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01Note.Compared with the normal group，#P＜0.05，##P＜0.01；Compared with the model group，*P＜0.05，＊＊P＜0.01.

組別Groups 0周 1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周 8周 9周 10周 11周 12周正常組Normal group 3.74± 0.39 4.19± 0.54 4.28± 0.58 3.87± 0.29 3.97± 0.24 4.23± 0.75 3.85± 0.41 3.70± 0.37 3.63± 0.28 3.51± 0.30 3.33± 0.41 3.43± 0.42 3.67± 0.99模型組Model group 6.33± 1.57 5.81± 0.85 5.05± 0.97 5.64± 0.54## 6.72± 1.59 6.23± 1.57## 5.64± 1.51 5.31± 1.17 5.27± 1.01 5.37± 1.06 5.19± 1.19 5.02± 1.05## 4.56± 0.90陽性藥組Positive group 6.27± 0.56 6.42± 1.86 5.82± 1.69 5.60± 1.68 5.56± 1.30 5.35± 1.60 5.22± 0.77 4.72± 0.35 5.05± 0.90 4.89± 0.77 4.66± 0.75 4.33± 1.23 4.66± 0.58中藥大劑量組High-dose group 6.15± 0.49 6.10± 0.93 5.92± 1.20 5.84± 1.15 5.68± 1.23 5.54± 0.98 5.03± 0.36 5.33± 0.82 4.87± 0.54 4.45± 0.65 4.97± 0.99 4.66± 0.37 4.57± 0.80中藥小劑量組Low-dose group 6.80± 0.78 5.98± 1.45 6.10± 1.67 4.91± 0.60 5.25± 1.23 5.11± 0.87 4.88± 0.41 4.70± 0.42 5.21± 0.33 4.49± 0.86 4.58± 0.89 4.37± 0.80 4.62± 0.54

2.2.3 右后肢前后徑及左右徑變化情況：與正常組比較，模型組大鼠右后肢前后徑在0～4周、6周、8～12周時(shí)測量值顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）；右后肢左右徑測量值在1～4周、6～12周時(shí)增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；與模型組比較，各治療組右后肢腫脹程度改善情況無明顯差異（P＞0.05）。見表10，11。

表9 各組大鼠左后肢跖骨最高點(diǎn)（mm）變化（±s，n=6）Tab.9 Changes of the highest points of left hind limb metatarsal of the rats in all groups（±s，n=6）

表9 各組大鼠左后肢跖骨最高點(diǎn)（mm）變化（±s，n=6）Tab.9 Changes of the highest points of left hind limb metatarsal of the rats in all groups（±s，n=6）

注：與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01Note.Compared with the normal group，#P＜0.05，##P＜0.01；Compared with the model group，*P＜0.05，＊＊P＜0.01.

組別0周 1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周 8周 9周 10周 11周 12周Groups正常組5.36±5.92±4.94±5.36±5.56±5.64±5.81±5.54±5.67±5.26±5.58±5.46±5.41± Normal group0.380.380.730.510.480.280.520.340.360.550.360.320.47模型組8.76±9.68±9.39±8.61±8.51±9.78±8.42±7.02±8.05±8.81±8.37±8.58±8.50± Model group1.520.88##0.69##0.20##0.56##1.15##0.13##1.350.93#0.41##0.52##0.58##0.31##陽性藥組9.30±9.91±9.05±8.51±8.63±9.19±8.22±7.77±8.00±8.68±7.77±8.09±7.95± Positive group0.510.670.640.440.420.810.420.500.530.950.430.530.41中藥大劑量組8.94±9.03±8.83±7.87±8.51±8.90±8.43±8.28±8.29±8.20±8.10±8.35±8.10± High-dose group0.870.820.760.630.510.590.450.770.360.340.460.310.59中藥小劑量組9.35±9.23±8.47±8.23±8.45±8.89±8.22±8.63±8.00±8.13±8.37±7.78±7.95± Low-dose group0.580.550.700.880.310.880.330.580.260.350.370.560.61

表10 各組大鼠右后肢前后徑（mm）變化（±s，n=6）Tab.10 Changes of the anteroposterior diameters of the right hind limbs of the rats in all groups（±s，n=6）

表10 各組大鼠右后肢前后徑（mm）變化（±s，n=6）Tab.10 Changes of the anteroposterior diameters of the right hind limbs of the rats in all groups（±s，n=6）

注：與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01Note.Compared with the normal group，#P＜0.05，##P＜0.01；Compared with the model group，*P＜0.05，＊＊P＜0.01.

組別Groups 0周 1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周 8周 9周 10周 11周 12周正常組7.64±6.86±7.55±7.81±7.77±8.41±8.35±7.78±8.39±7.80±7.83±8.24±8.04± Normal group1.060.340.420.350.451.100.370.550.560.680.700.860.44模型組12.16±12.45±11.19±11.20±10.89±10.53±10.19±9.42±10.38±10.19±10.21±10.22±10.29± Model group1.33##1.08##1.17##0.77##0.59##1.270.65##0.990.58##1.16#0.94#0.92#0.55##陽性藥組11.71±11.58±10.40±10.73±10.57±10.38±10.00±8.71±10.12±10.21±10.24±10.05±10.15± Positive group2.012.051.651.521.501.261.160.560.710.960.761.450.61中藥大劑量組11.73±11.39±11.34±10.74±10.15±10.92±9.93±9.21±9.62±9.72±9.37±9.77±9.53± High-dose group1.391.550.330.860.600.960.770.450.830.860.630.680.76中藥小劑量組12.44±11.67±10.66±10.57±10.05±10.94±9.92±9.08±9.48±9.16±9.55±9.79±9.27± Low-dose group1.140.971.201.150.740.590.720.781.080.830.870.600.68

表11 各組大鼠右后肢左右徑（mm）變化（±s，n=6）Tab.11 Changes of the transverse diameters of the right hind limbs of the rats in all groups（±s，n=6）

表11 各組大鼠右后肢左右徑（mm）變化（±s，n=6）Tab.11 Changes of the transverse diameters of the right hind limbs of the rats in all groups（±s，n=6）

注：與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01Note.Compared with the normal group，#P＜0.05，##P＜0.01；Compared with the model group，*P＜0.05，＊＊P＜0.01.

組別0周 1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周 8周 9周 10周 11周 12周Groups正常組6.22±6.26±6.07±6.45±6.80±6.99±6.65±6.55±6.61±6.89±6.80±6.73±6.91± Normal group0.550.340.360.760.490.710.550.640.520.580.450.310.36模型組9.10±10.11±9.44±9.48±9.34±8.83±9.07±8.70±8.94±8.92±8.98±9.10±9.04± Model group1.900.72##0.50##0.75##0.80##0.970.49##0.73##0.55##0.72##0.55##0.93#0.82#陽性藥組9.22±9.31±8.90±8.94±8.77±8.20±8.24±8.58±8.07±8.40±8.26±8.12±8.31± Positive group1.701.841.571.091.201.400.800.801.071.130.970.920.91中藥大劑量組9.70±10.08±9.46±9.08±8.72±8.78±8.35±9.26±8.50±8.58±8.26±8.58±8.31± High-dose group0.950.950.380.450.580.950.481.300.540.440.370.390.36中藥小劑量組9.97±10.31±9.44±8.64±8.76±8.79±8.66±8.38±8.52±8.32±8.47±8.16±8.04± Low-dose group1.460.540.650.990.831.050.670.780.750.980.570.580.86

2.2.4 右后肢足墊厚及跖骨最高點(diǎn)改善情況：與正常組比較，模型組大鼠右后肢足墊厚測量值在0周～5周、8周、10周、11周時(shí)明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）；右后肢跖骨最高點(diǎn)測量值在0周～6周、8周～12周時(shí)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，各治療組右后肢腫脹程度改善情況無明顯差異（P＞0.05）。見表12，13。

2.3 中藥藤莓湯對CIA模型大鼠關(guān)節(jié)滑膜IL-6、TNF-αmRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平的影響

與正常組比較，模型組大鼠關(guān)節(jié)滑膜IL-6、TNF-α mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)（P＜0.01）。與模型組比較，陽性藥組、中藥大、小劑量組IL-6、TNF-α mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）（表14）。

表12 各組大鼠右后肢足墊厚（mm）變化（±s，n=6）Tab.12 Changes of the right hind limb foot pad thickness of the rats in all groups（±s，n=6）

表12 各組大鼠右后肢足墊厚（mm）變化（±s，n=6）Tab.12 Changes of the right hind limb foot pad thickness of the rats in all groups（±s，n=6）

注：與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01Note.Compared with the normal group，#P＜0.05，##P＜0.01；Compared with the model group，*P＜0.05，＊＊P＜0.01.

組別Groups 0周 1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周 8周 9周 10周 11周 1 2周正常組Normal group 4.05± 0.26 4.44± 0.28 3.96± 0.23 3.89± 0.22 4.01± 0.47 4.31± 0.73 3.68± 0.33 3.56± 0.28 3.47± 0.41 3.42± 0.26 3.33± 0.54 3.33± 0.47 3.46± 0.25模型組Model group 6.51± 0.81# 5.91± 0.71# 5.50± 0.72# 5.28± 0.89# 6.83± 1.16# 6.36± 1.42## 5.30± 1.17 4.50± 0.95 4.94± 0.55## 4.98± 1.08 5.04± 0.80# 4.72± 0.68## 4.49± 0.59陽性藥組Positive group 6.21± 0.83 6.22± 1.82 5.61± 1.72 5.07± 1.31 5.40± 1.24 6.18± 2.14 5.07± 1.33 4.67± 0.75 4.39± 0.86 5.23± 1.14 4.99± 0.93 4.52± 1.31 4.55± 1.10中藥大劑量組High-dose group 6.23± 0.68 6.39± 1.17 5.27± 0.68 5.11± 0.97 5.29± 0.82 6.08± 0.95 4.66± 0.48 5.13± 0.73 4.73± 0.73 4.36± 0.44 4.74± 0.54 4.45± 0.77 4.41± 0.63中藥小劑量組Low-dose group 6.82± 1.36 5.91± 1.20 5.55± 1.36 5.28± 1.48 5.33± 0.79 5.75± 0.95 4.52± 0.50 4.86± 1.16 4.49± 0.95 4.45± 0.58 4.43± 1.21 4.33± 0.65 4.84± 0.77

表13 各組大鼠右后肢跖骨最高點(diǎn)（mm）變化（±s，n=6）Tab.13 Changes of the right hind limb metatarsal highest point of the rats in all groups（±s，n=6）

表13 各組大鼠右后肢跖骨最高點(diǎn)（mm）變化（±s，n=6）Tab.13 Changes of the right hind limb metatarsal highest point of the rats in all groups（±s，n=6）

注：與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01Note.Compared with the normal group，#P＜0.05，##P＜0.01；Compared with the model group，*P＜0.05，＊＊P＜0.01.

組別Groups 0周 1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周 8周 9周 10周 11周 1 2周正常組Normal group 5.72± 0.15 5.71± 0.24 5.24± 0.73 5.22± 0.77 5.83± 0.22 5.66± 0.37 5.72± 0.38 5.67± 0.43 5.50± 0.39 5.62± 0.42 5.67± 0.44 5.52± 0.36 5.62± 0.37模型組Model group 9.76± 0.76## 9.76± 0.84## 9.30± 0.82## 8.79± 0.22## 9.07± 0.80## 8.97± 0.59## 8.85± 0.56## 7.43± 1.63 8.23± 0.57## 8.66± 0.76## 8.25± 0.38## 9.06± 0.90## 8.46± 0.45##陽性藥組Positive group 9.09± 1.35 9.21± 1.78 8.70± 1.46 8.09± 1.45 8.59± 1.44 8.42± 1.27 7.99± 1.19 7.69± 0.87 7.39± 1.28 7.93± 1.15 7.79± 0.98 7.84± 1.18 7.95± 1.21中藥大劑量組High-dose group 9.08± 0.61 9.01± 0.53 8.76± 0.92 8.48± 0.32 8.31± 0.61 8.68± 0.60 8.11± 0.74 7.91± 1.02 8.14± 0.81 8.26± 0.59 8.04± 0.54 7.92± 0.57 8.08± 0.27中藥小劑量組Low-dose group 9.40± 0.83 9.53± 0.67 9.05± 0.35 8.64± 0.57 8.61± 0.32 8.42± 0.79 7.89± 0.51 8.53± 0.52 7.99± 0.65 8.10± 0.51 8.70± 0.54 8.25± 0.53 8.11± 0.69

表14 各組大鼠滑膜組織IL-6、TNF-αmRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平（n=6）Tab.14 Levels of mRNA transcription and protein expression of IL-6 and TNF-α in the synovial tissue of the rats in all groups（n=6）

2.4 中藥藤莓湯對CIA模型大鼠右踝關(guān)節(jié)組織病理的影響

正常組大鼠右踝關(guān)節(jié)面光滑，軟骨細(xì)胞排列整齊，關(guān)節(jié)周圍組織未見炎性細(xì)胞浸潤。模型組大鼠右踝關(guān)節(jié)軟骨滑膜被覆上皮細(xì)胞輕度增生，關(guān)節(jié)腔縮小，周圍軟組織見輕度纖維增生，輕度炎性細(xì)胞浸潤，以淋巴細(xì)胞為主。藤莓湯大劑量組右踝關(guān)節(jié)滑膜增生，有少量淋巴細(xì)胞浸潤，關(guān)節(jié)軟骨纖維化，周圍軟組織有輕度纖維組織增生，較模型組無明顯差異；藤莓湯小劑量組關(guān)節(jié)周圍軟組織見少量炎性細(xì)胞浸潤，關(guān)節(jié)腔略縮小，軟骨、滑膜未見明顯病變，關(guān)節(jié)病變較模型組有所減輕（圖1，見文后彩插4）。

3 討論

RA是一種以慢性、對稱性、多滑膜關(guān)節(jié)炎及關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)的自身免疫性疾病。急性活動(dòng)期以關(guān)節(jié)紅腫熱痛為主，中晚期可見關(guān)節(jié)腫痛，變形，功能障礙。病理特征為血管翳形成，滑膜組織肥厚，骨及軟骨破壞［3］。隨著人類對RA發(fā)病機(jī)制深入研究，治療對策及靶向性藥物不斷問世。然而，由于本病病因不明，病機(jī)復(fù)雜，病程漫長，后果嚴(yán)重，而且部分病人因肝腎功能損害或藥物過敏，嚴(yán)重影響療效［4-6］。因此，針對不同病理環(huán)節(jié)的治療方法及手段乃是國際風(fēng)濕免疫學(xué)界迫切需要解決的難點(diǎn)。RA屬中醫(yī)學(xué)“痹證”范疇，中醫(yī)認(rèn)為本病發(fā)生發(fā)展與外因風(fēng)寒濕熱不同致病因素的影響，內(nèi)因機(jī)體先天稟賦或后天失調(diào)有關(guān)，邪正相搏，濁毒瘀閉肢體經(jīng)絡(luò)、骨節(jié)而致。RA急性活動(dòng)期多以濕熱瘀毒痹阻，關(guān)節(jié)紅腫熱痛為特點(diǎn)［7］，當(dāng)濁毒不化，交阻骨節(jié)，病深入絡(luò)，漸見關(guān)節(jié)活動(dòng)不利，腫大變形的中晚期病理特征，而且瘀濁蘊(yùn)久化熱成毒，作為伏邪，誘發(fā)急性發(fā)作過程，其惡性循環(huán)的病理機(jī)制導(dǎo)致了本病最終結(jié)局。藤莓湯為治療RA經(jīng)驗(yàn)方，可明顯改善RA急性期關(guān)節(jié)晨僵、灼熱腫脹、疼痛劇烈等癥狀，而且對相關(guān)炎性指標(biāo)ESR、CRP及免疫指標(biāo)RF、CCP有良好的糾正作用。方中忍冬藤味甘，性寒，為君，蛇莓甘苦，性寒，穿山龍、桑枝性平，味苦，為臣，四藥配伍清熱解毒，除濕通絡(luò)。乳香、沒藥、烏蛇祛瘀止痛，白芥子化痰降濁散結(jié)，諸藥共用，解熱毒、化瘀濁、通經(jīng)絡(luò)、止痹痛，切中活動(dòng)期RA的病理機(jī)制。為了進(jìn)一步驗(yàn)證該方的療效，本實(shí)驗(yàn)制備了RA動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)的經(jīng)典模型-CIA模型，通過上述研究，證明中藥藤莓湯能有效改善CIA模型大鼠關(guān)節(jié)滑膜病理損傷，其作用機(jī)制可能與其下調(diào)介導(dǎo)免疫炎性反應(yīng)的核心細(xì)胞因子高表達(dá)相關(guān)。關(guān)于RA發(fā)病機(jī)制的探索，國際醫(yī)學(xué)領(lǐng)域經(jīng)過幾代人的不懈努力，取得了突破性進(jìn)展，多項(xiàng)研究圍繞在自身抗體和免疫復(fù)合物、T細(xì)胞介導(dǎo)的抗原特異性反應(yīng)，T細(xì)胞獨(dú)立的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，RA滑膜的腫瘤樣侵蝕性生長行為等方面展開［8］。其共識(shí)為入侵或變異的抗原激活體內(nèi)免疫活性細(xì)胞，產(chǎn)生包括RF在內(nèi)的多種多克隆抗體，激活滑膜細(xì)胞，釋放相關(guān)炎性介質(zhì)，同時(shí)激活免疫復(fù)合物，激活補(bǔ)體系統(tǒng)而造成關(guān)節(jié)局部炎癥損傷。隨著認(rèn)識(shí)的進(jìn)一步深入，特別是T輔助細(xì)胞亞群Th17的發(fā)現(xiàn)，免疫-炎性反應(yīng)-凋亡異常作為RA發(fā)病的核心環(huán)節(jié)被揭示。研究證明，炎性因子在RA病理改變中發(fā)揮重要作用。其中，NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-17等為介導(dǎo)關(guān)節(jié)滑膜免疫炎性損傷的核心因素。IL-17A是IL-17家族的原型，也是Th-17細(xì)胞主要的效應(yīng)分子，在抗胞外細(xì)菌、真菌感染的宿主防御中發(fā)揮重要作用。然而，過量的Th-17細(xì)胞反應(yīng)或IL-17表達(dá)則容易導(dǎo)致慢性炎癥和自身免疫疾病。IL-17不僅是T細(xì)胞源性促炎因子，也是炎癥反應(yīng)的微調(diào)因子。已證明［9］RA患者血清、滑膜、關(guān)節(jié)滑液中IL-17高表達(dá)。IL-17單獨(dú)或與IL-1β、TNF-α聯(lián)合刺激滑膜細(xì)胞、軟骨細(xì)胞/成骨細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞分泌多種促炎因子，并與其發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)，放大靶器官免疫反應(yīng)及炎癥性破壞［10］。而且能誘導(dǎo)滑膜細(xì)胞、多形細(xì)胞產(chǎn)生金屬蛋白酶，抑制軟骨基質(zhì)形成，刺激破骨細(xì)胞增生，介導(dǎo)骨質(zhì)破壞。IL-6是由T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和成纖維細(xì)胞產(chǎn)生，在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，促進(jìn)骨髓造血等方面均有重要作用。IL-6作為炎性介質(zhì)對 RA致病作用主要在于增加 IL-1、TNF-α效應(yīng)，是TNF-α的某些生物學(xué)效應(yīng)的放大因子。IL-6具有前炎癥功能，促進(jìn)RA產(chǎn)生自身抗體及促進(jìn)骨吸收的作用，參與RA的骨破壞及局部骨侵蝕。IL-6是第一個(gè)被認(rèn)識(shí)的IL-17的靶基因，同時(shí)作為Th-17細(xì)胞分化過程中的必須因子正反饋調(diào)節(jié)IL-17的產(chǎn)生及功能［11，12］，同時(shí)，IL-17又通過誘導(dǎo)IL-6維持Th-17細(xì)胞數(shù)量，以正反饋形式維持一種慢性炎癥狀態(tài)［13］。TNF-α參與RA多種致病機(jī)制，TNF-α誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)粘附分子，促進(jìn)白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行粘附滲透引起局部炎癥。通過NF-κB途徑誘導(dǎo)纖溶酶原激活物、血管內(nèi)皮生長因子等，促進(jìn)滑膜的炎癥和血管翳生成及發(fā)展，以及浸入滑膜下組織，促進(jìn)軟骨細(xì)胞及成纖維細(xì)胞分泌地諾前列酮，促進(jìn)膠原降解及軟骨損害［14］。由此可知，炎性因子參與RA的發(fā)病及病理損傷過程。炎性因子相互作用，相互促進(jìn)，級(jí)聯(lián)反應(yīng)形成一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)鏈，持續(xù)性、進(jìn)行性損傷關(guān)節(jié)滑膜，乃至殘損性骨破壞。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)檢測了NF-κB、P53等相關(guān)信號(hào)分子（相關(guān)文章在發(fā)表中），結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道相符［8，15］，證明CIA模型成模12周內(nèi)，能更確切的反映出活動(dòng)期RA的病理特征及其機(jī)制?？赡転樨S富RA靶向治療提供有價(jià)值的參考。

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Effects of the Chinese herbal compound，Tengmei decoction，on inflammatory injury in joints of rat models of typeⅡcollagen-induced arthritis

LU Yan1，WANG Ya-nan1，LIU Hui1，MA Wei-guo1，ZHANG Ji-sheng1，TAN Ling2，LI Hui-hui3，LIN Zi-chao1，SHEN Zhi-ming1，WANG Jie1，MENG Feng-xian1
（1.Department of Rheumatology，Dongfang Hospital，the Second Clinical Medical College of Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100078，China；2.Department of Encephalopathy，Integrative Medicine Hospital in Changping District，Beijing 102208；3.Department of Rheumatology，Traditional Chinese Medicine Hospital in Miyun County，Beijing 101500）

Objective To explore the effects of Chinese herbal compound，Tengmei decoction，on type IIcollagen-induced arthritis（CIA）in rats，and to examine the changes of arthritis index（AI），limb swelling，joint tissue inflammatory infiltration，and the effects on immune-inflammatory factors.Methods Sprague-Dawley rat models of arthritis were successfully established by intradermal injection of type II collagen and Freund’s complete adjuvant.The model rats were randomly divided into model group，positive drug group，and high-and low-dose Chinese medicine groups，6 rats in each group.The intervention and treatment period was 12 weeks.To measure weekly the anteroposterior and transverse diameters of the rear ankles and wrists，the transverse diameter of the claw foot palm pad，the thickness and the highest point width of hind limb plantar joint swelling，and to evaluate the integrated scores of joints and limbs swelling using a vernier caliper.Results ①Compared with the normal group，the total arthritis scores and hind limbs AI scores of the model group were significantly increased（P＜0.05 or P＜0.01）.The left forelimb AI scores were significantly increased during 10-12 weeks（P＜0.05）.The anteroposterior and transverse diameters of the left hind limb，the thickness of the highest point measurement of the left hind foot pad metatarsal were significantly increased（P＜0.05 or P＜0.01）in different time periods between 1-12 weeks.Compared with the model group，the total scores and the left hind limb joints AI scores of the high-and low-dose drug groups were decreased after 6 weeks（P＜0.05）.② Compared with the normal control group，levels of mRNA transcription and protein expression of IL-6 and TNF-α were significantly upregulated（P＜0.01）in the model group.Compared with the model group，the levels of mRNA transcription and the expression of IL-6 and TNF-α proteins were significantly down-regulated in the positive group and Chinese medicine groups（P＜0.01）.③ Histological examination showed that the low-dose TCM significantly improved the CIA synovial hyperplasia and inflammatory cell infiltration.Conclusions The molecular mechanism of Chinese herbal compound Tengmei decotion in improving joint pathological injury of CIA rat models may be related to its inhibitory effect on the high expression of immune-inflammatory factors in the synovial tissue of CIA rats.

Chinese herbal compound，Tengmei decoction；Rat models；Arthritis，collagen II-induced；Arthritis index，AI；Pathological changes；Immune-inflammatory mechanism

R33

A

1671-7856（2015）04-0048-10

10.3969.j.issn.1671.7856.2015.004.010

陸妍（1986-），女，研究方向：風(fēng)濕免疫及代謝性疾病的臨床治療及機(jī)制研究。E-mail：tracyloo@163.com。

孟鳳仙（1955-），女，研究方向：風(fēng)濕免疫及代謝性疾病的臨床治療及機(jī)制研究。Emai：mfx0823@163.com。

2015-02-03