赤雹根化學(xué)成分研究*

毛曉霞，王 萍，趙春穎，佟繼銘，于海龍，劉永平△

（1.河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗室/承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000；2.國藥一心制藥有限公司）

中醫(yī)中藥

赤雹根化學(xué)成分研究*

毛曉霞1，王 萍2，趙春穎1，佟繼銘1，于海龍1，劉永平1△

（1.河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗室/承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000；2.國藥一心制藥有限公司）

赤雹根；三萜皂苷；Dubioside C；ubioside D；thladiosude-H1

赤雹根為葫蘆科植物赤雹（Thladiantha dubia，TDB）的干燥塊根，因其具有鎮(zhèn)痛抗炎的作用，民間主要用于治療腰腿痛、軟組織扭傷、痛經(jīng)等多種疼痛，也可用于乳汁不下、乳房脹痛等癥，亦有文獻(xiàn)報道赤雹根總皂苷具有鎮(zhèn)痛作用［1］。赤雹的藥用部位為果實(shí)和塊根，對赤雹果化學(xué)成分的研究有一些報道，而研究赤雹根化學(xué)成分的報道較少，只有Nagao等［2-3］從中分離到dubioside A-F；而王隸書等［4］從赤雹根的乙酸乙酯部位分離得到3個三萜皂苷類成分。本研究針對赤雹根鎮(zhèn)痛活性部位（即赤雹根總皂苷）進(jìn)行了化學(xué)成分的分離和鑒定，從中分離得到3個三萜皂苷類化合物，其中化合物3為首次從赤雹中分離得到。

1 儀器與材料

島津半制備液相色譜儀，Agilent 1200高效液相色譜儀，Bruker AV400 MHz核磁共振儀，Thermo Scientific Q Exactive LCMS；乙腈（mreda，色譜純），娃哈哈純凈水，正丁醇、甲醇、甲酸（分析純，科密歐化學(xué)試劑有限公司），薄層制備板和柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）。

赤雹根，2012年10月采集于吉林省四平市，經(jīng)承德醫(yī)學(xué)院趙春穎教授鑒定為葫蘆科植物TDB的干燥塊根。標(biāo)本（CB20121001）存放于承德醫(yī)學(xué)院中藥所。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取與分離 赤雹根藥材5kg，用70%乙醇提取，回收乙醇，得水溶液，依次用石油醚、氯仿、水飽和正丁醇萃取。其中正丁醇萃取物過AB-8大孔樹脂柱，并依次用10%、30%、70%乙醇洗脫，得70%乙醇洗脫物37g。將70%乙醇洗脫物加入甲醇500ml，超聲15min，過濾，得不溶物28g，甲醇溶解物9g。甲醇溶解物進(jìn)行硅膠柱色譜，以CHCl3-MeOH-H2O （14：7：1）洗脫，結(jié)合制備液相，以26%乙腈為流動相，制得化合物1（30mg）；甲醇不溶物進(jìn)行硅膠柱色譜，以nBuOH- MeOH-H2O（6：1.2：5）上層洗脫，結(jié)合制備液相，以32%乙腈-甲酸水（含甲酸0.1%）為流動相，制得化合物2（65mg）、化合物3（23mg）。薄層酸水解：取化合物少量，以甲醇溶解，點(diǎn)于高效薄層板上，置濃鹽酸蒸汽中12h，揮干濃鹽酸，點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)糖，用氯仿：甲醇：水（體積比7：3：0.5）展開，用鄰苯二甲酸苯胺顯色。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定 見附圖。

2.2.1 化合物1：為白色粉末，易溶于吡啶、DMSO、甲醇水，可溶于甲醇。10%濃硫酸-乙醇溶液顯紫紅色。ESIMS m/z 正分子離子峰，1273［M+Na］+，分子式C59H94O28，1H-NMR（DMSO-d6，400MHZ）和13C-NMR（DMSO-d6，400MHZ）顯示6個角甲基信號：δH1.33（3H，s），1.09（3H，s），0.92（3H，s）， 0.90（3H，s），0.84（3H，s），0.65（3H，s）和δC26.4、10.3、24.2、15.4、32.8、16.6；雙鍵的信號：δH5.26 （1H，br，s）和δC121.2、143.4；以及醛基信號：δH9.48 （1H，s）和δC210.2。采用1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、HMQC、HMBC等譜的綜合分析將化合物Ⅰ的苷元的質(zhì)子和碳信號逐一加以歸屬?；衔铫竦?13C-NMR譜苷元部分的化學(xué)位移數(shù)據(jù)（表1）與文獻(xiàn)［5］中苷元皂樹酸的基本一致，因此可以確定化合物Ⅰ的苷元為皂樹酸。δC83.4 和δC173.5提示苷元的3和28成苷。

NMR顯示五個糖的端基信號δH5.57（1H，s），4.74（1 H，s），4.61（1H，d，J=6Hz），4.42（1H，d，J=7.6Hz），4.20（1H，d，J=7.6Hz） 和δC91.7，99.2，102.3，102.9，102.0，δH1.09 （3H，brs）和δC17.7提示有1個6-去氧糖存在。酸水解結(jié)果表明化合物1含有葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳四種糖。采用1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、HMQC、HMBC等譜的綜合分析將化合物1糖的質(zhì)子和碳信號逐一加以歸屬（見表1、2）。綜合上述確定化合物1的結(jié)構(gòu)為Dubioside D。

2.2.2 化合物2：為無色晶絲（甲醇），易溶于吡啶、DMSO、甲醇水，可溶于甲醇。10%濃硫酸-乙醇溶液顯紫紅色。FT-ESI-MS：m/z 1367.6107（計算值：1367.6120［M+H］+），分子式為C63H98O32，1H-NMR（DMSO-d6，400MHZ）和13C-NMR（DMSO-d6，400MHZ）顯示6個角甲基信號δH1.32， 1.06，0.91， 0.89，0.84，0.64和26.4、10.2、24.2、15.4、32.8、16.6。雙鍵的信號：δH5.26（1H，br，s）和δC121.4、143.5；以及醛基信號：δH9.46（1H，s）和δC209.3。NMR顯示6個糖的端基信號δH5.57（1H，s，），4.74（1H，s），4.49（1H，d，J=8Hz），4.42（1H，d，J=8Hz），4.27 （1H，d，J=6.4Hz），4.27（1H，d，J=6.4Hz）和δC91.7，99.2，104.4，104.2，104.4，101.6。將化合物2的13C-NMR化學(xué)位移數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［1］報道的Dubioside C比較，兩者的碳信號數(shù)據(jù)基本一致，證明兩者為同一化合物，因此，鑒定化合物2為Dubioside C。

2.2.3 化合物3：為白色粉末易溶于吡啶、DMSO、甲醇水，可溶于甲醇。10%濃硫酸-乙醇溶液顯紫紅色。FTESI-MS：m/z 1351.6196（計算值：1351.6170［M+H］+），分子 式 為C63H98O31。1H-NMR（DMSO-d6，400MHZ）和13C-NMR（DMSO-d6，400MHZ）顯示6個角甲基信號δ：1.06，0.89，0.66，1.10，0.88，0.86和25.4、10.1、23.3、15.3、32.7、16.6。雙鍵的信號：δH5.20（1H，br，s）和δC121.5、143.3；以及醛基信號：δH9.45（1H，s）和δC209.2。NMR顯示6個糖的端基信號δH：5.38（1H，d，J=4Hz），5.08（1 H，s），4.44（1H，d，J=8Hz），4.42（1H，d，J=8Hz），4.28（1H，d，J=8Hz），4.28（1H，d，J=8Hz）和δC：93.6，99.4，104.8，1 04.2，104.4，101.5。酸水解結(jié)果表明化合物3含有葡萄糖醛酸、鼠李糖、半乳糖、木糖四種糖。綜合分析1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、HMQC、HMBC等譜確定化合物3含有1個葡萄糖醛酸、1個鼠李糖、1個半乳糖、3個木糖。將化合物3的13C-NMR化學(xué)位移數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6-7］報道的thladiosude-H1比較，兩者的碳信號數(shù)據(jù)基本一致，證明兩者為同一化合物，因此，鑒定化合物3為thladiosude-H1。

表1 化合物1-3苷元13C-NMR數(shù)據(jù)（DMSO-d6，400MHZ）

表2 化合物1-3糖的13C-NMR數(shù)據(jù)（DMSO-d6，400MHZ）

化合物1

化合物2

化合物3

3 結(jié)論

本文采用硅膠柱層析、ODS、制備液相色譜，等方法，對赤雹根總皂苷（此部位為赤雹根的鎮(zhèn)痛活性部位）的化學(xué)成分進(jìn)行了分離和鑒定。從中分離得到3個三萜皂苷類化合物，其中化合物3為首次從赤雹中分離得到。這三個化合物是否是赤雹根鎮(zhèn)痛抗炎活性成分，尚需進(jìn)一步的研究。

［1］劉永平，陳建雙，張玉玲，等.赤雹根總皂苷鎮(zhèn)痛作用研究［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2012，23（5）：1085-1087.

［2］Nagao T， Okabe H， Mihashi K， et al. Studies on theconstituents of Thladiantha dubia BungeⅠ （The structures of dubiosides A，B， and C， the quillaic acidglucuronide saponins isolated from the tuber） ［J］. Chem Pharm Bull， 1989， 37（4）： 925-929.

［3］Nagao T， Tanaka R， Okabe H， et al. Studies on theconstituents of Thladiantha dubia BungeⅡ（Structures of dubiosides D， E and F，neutral saponins of quillaic acidisolated from the tuber） ［J］. Chem Pharm Bull， 1990， 38（2）： 378-381.

［4］王隸書，陳顯強(qiáng)，劉大有，等.滿藥赤雹Thladiantha dubia Bunge化學(xué)成分的研究［C］.南寧：全國第三屆藥用植物化學(xué)與中藥新藥研究技術(shù)創(chuàng)新研討會會務(wù)組，2010，125-126.

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R931.6

B

1004-6879（2015）02-0130-03

2015-01-08）

* 河北省高等學(xué)校自然科學(xué)研究青年基金項目（2010101）；河北省科技計劃項目（14272502D）