Bmi-1和hTERT在結直癌組織中的表達和相關性

胡占鋒，李淑全，嚴 鵬，徐瑞云，鄭紀寧△（.承德醫(yī)學院，河北承德 067000；.承德市第三醫(yī)院）

Bmi-1和hTERT在結直癌組織中的表達和相關性

胡占鋒1，李淑全2，嚴 鵬1，徐瑞云1，鄭紀寧1△
（1.承德醫(yī)學院，河北承德 067000；2.承德市第三醫(yī)院）

目的：探討B(tài)mi-1和hTERT在結直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法：采用免疫組織化學染色法檢測Bmi-1蛋白和hTERT表達水平。結果：結直腸癌組織Bmi-1和hTERT的陽性表達率明顯高于癌旁正常黏膜（P ＜0.05）。Bmi-1、hTERT陽性表達與病理分期、浸潤深度和有無淋巴結轉移有關（P＜0.05），與性別和分化程度無關（P＞0.05）。結直腸癌組織Bmi-1和hTERT的表達呈正相關關系（P＜0.05）。結論：Bmi-1和hTERT與結直腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關，且二者在結直腸癌發(fā)生發(fā)展中具有協(xié)同作用。

結直腸癌；Bmi-1；hTERT；免疫組織化學染色

B細胞特異性莫洛尼鼠白血病毒插入位點1（Bmi-1）是一個轉錄抑制因子，隸屬PcG蛋白家族，在細胞增殖和多種腫瘤干細胞自我更新、分化調節(jié)中發(fā)揮重要作用［1］。已有研究表明，Bmi-1在多種腫瘤細胞中過表達［2-5］。hTERT是端粒酶活性亞單位，其表達與端粒酶活性一致，且是端粒酶的限速劑［6］。85%-90%的腫瘤細胞可以檢測到端粒酶活性，而與腫瘤相鄰的良性病變或正常組織僅有4%左右或幾乎沒有端粒酶活性。但目前Bmi-1和hTERT在結直腸癌中的作用及相關性尚無報道。本研究采用免疫組化法檢測結直腸癌組織Bmi-1和hTERT的表達，探討二者與結直腸癌生物學行為的關系，并分析二者的相關性。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 承德醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院2013年7月至2014年3月手術切除并經(jīng)病理證實的結直腸癌石蠟標本68例（術前未行放、化療），且有完整的臨床病理資料。其中男43例，女25例；年齡45-82歲，平均62歲。68例中，中高分化27例，低分化41例；有淋巴結轉移47例，無淋巴結轉移21例；2010年TNM臨床分期Ⅰ-Ⅱ期28例，Ⅲ-Ⅳ期40例；癌組織浸潤至黏膜層8例，浸潤至肌層20例，浸潤至漿膜層及以下40例。同時，收集手術切除的癌周正常腸黏膜（距癌組織＞8cm）標本15例作為對照。

1.2 免疫組化染色 所有標本連續(xù)4μm切片，采用免疫組化SABC法分別檢測Bmi-1蛋白和hTERT的表達，一抗均為兔抗，稀釋度1：100（一抗購于武漢博士德生物科技有限公司），DAB顯色，蘇木素復染。以PBS替代一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定標準 切片采用盲法由兩位病理醫(yī)師單獨閱片，采用雙積分半定量法量化［7］。隨機采集4個不同高倍（×400）視野，計數(shù)總細胞數(shù)和陽性細胞數(shù)，根據(jù)陽性細胞率打分：1分，≤10%；2分，＞10%且≤50%；3分＞50%且≤75%；4分＞75%。同時，對染色程度進行評分：1分，與背景色完全一致；2分，淡黃色；3分，棕黃色；4分，棕褐色。兩種計分結果相乘后判定結果：≤8為陰性，＞8為陽性。

1.4 統(tǒng)計分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資數(shù)行卡方檢驗，相關性分析行Spearman相關分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 結直腸癌組織Bmi-1和hTERT的表達 Bmi-1蛋白和hTERT主要表達于癌細胞核，少部分細胞質也有染色；Bmi-1陽性細胞內(nèi)可見棕黃色或棕褐色顆粒，hTERT陽性細胞均勻著色，呈棕黃色。結直腸癌組織Bmi-1和hTERT的陽性表達率明顯高于癌旁正常黏膜（P＜0.05）。見表1：

表1 結直腸組織和癌旁正常黏膜Bmi-1和hTERT的表達情況

2.2 Bmi-1和hTERT表達與結直癌生物學行為的關系

Bmi-1、hTERT陽性表達與TNM分期、浸潤深度和有無淋巴結轉移有關（P＜0.05），與性別和分化程度無關（P＞0.05）。見表2：

表2 Bmi-1和hTERT表達與結直癌生物學行為的關系

2.3 結直腸癌組織Bmi-1和hTERT表達的相關性 結直腸癌組織Bmi-1和hTERT的表達呈正相關關系（rs=0.503，P＜0.05）。見表3：

表3 結直腸癌組織Bmi-1和hTERT表達的相關性

3 討論

端粒在大多數(shù)正常細胞中隨著細胞周期縮短，當縮短到一定長度時染色體畸變，失去穩(wěn)定性，最終導致細胞衰亡。但在造血干細胞、生殖細胞和腫瘤細胞，端粒酶激活維持端粒長度，從而使細胞獲得無限分裂和增殖能力。hTERT是端粒酶的主要催化亞單位，在正常細胞中其表達受到抑制。因此，hTERT高表達是端粒酶激活的標志，與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。Bmi-1基因于1991年由荷蘭癌癥中心在鼠淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)，可通過抑制Ink4a位點、誘導端粒酶逆轉錄酶表達、維持腫瘤干細胞的自我更新等多種途徑促進腫瘤的惡性進展，也是腫瘤術后復發(fā)的根源之一［8-10］。

本研究顯示，結直腸癌組織Bmi-1和hTERT蛋白表達的陽性率顯著高于癌旁正常黏膜，且二者陽性表達與浸潤深度、淋巴結轉移和TNM分期有關。因此提示，Bmi-1和hTERT在結直腸癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。相關分析顯示，結直腸癌組織Bmi-1和hTERT表達在翻譯水平呈正相關。與Dimri等［9］的研究結果一致。

總之，Bmi-1和hTERT與結直腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關，且二者在結直腸癌發(fā)生發(fā)展中具有協(xié)同作用。本研究推測，聯(lián)合檢測Bmi-1和hTERT可能有助于結直腸癌的診斷，以及為結直腸癌的臨床治療提供新策略。

［1］Rossi DJ， Jammieson CH， Weissman IL. Stem cells and the pathways to aging and cancer［J］. Cell， 2008， 132（4）： 681-696.

［2］Silva J， Garcia V， Garcia J M， et al. Circulation Bmi-1 mRNA as a possible prognostic factor for advanced breast cancer patients［J］. Breast Cancer Res， 2007， 9（4）： R55.

［3］Liu JH， Song LB， Zhang X， et al. Bmi-1 expression predicts prognosis for patients with gastric carcinoma［J］. Surg Oncol，2008， 97（3）： 267-272.

［4］劉蓓，王瓊，范軍，等.Bmi-1在宮頸癌組織中的表達及意義［J］.微循環(huán)學雜志，2010，20（3）：20-22，26.

［5］馮艷，宋藏兵，郭寶紅，等.Bmi-l在乳腺癌組織中的表達及意義［J］.癌癥，2007，26（2）：154-157.

［6］Chang JT， Chen YL， Yang HT， et al. Differential regulation of telomerase activity by six telomerase subunits ［J］. Eur J Biochem，2002， 269（14）： 3442-3450.

［7］戰(zhàn)懷兵，蔡曦光，吳鳳銘，等.Bmi-1和hTERT在非小細胞肺癌中的表達及相關性研究［J］.臨床腫瘤學雜志，2009，14（1）：10-14.

［8］Kim JH， Yoon SY， Kim CN， et al. The Bmi-1 oncoprotein is overexpressed in human colorectal cancer and correlates with the reduced p16INK4a/p14ARF proteins［J］. Cancer Letters， 2004，203（2）： 217-224.

［9］Dimri GP， Martinez JL， Jacobs JJ， et al. The Bmi-1 oncogene induces telomerase activity and immortalizes human mammary epithelial cells ［J］. Cancer Research， 2002， 62（16）： 4736-4745.

［10］Jiang L， Li J， Song L. Bmi-1， stem cells and cancer［J］. Acta Biochim Biophys Sin， 2009， 41（7）： 527-534.

EXPRESSIONS AND CORRELATIONS OF BMI-1 AND HTERT IN COLORECTAL CARCINOMA

HU Zhan-feng， LI Shu-quan， YAN Peng， et al

（Chengde Medical College， Hebei Chengde 067000， China）

Objective： To investigate the actions of Bmi-1 and hTERT in development of colorectal carcinoma. Methods： Immunohistochemical stain was used to detect the expression of Bmi-1 and hTERT. Results：The positive expression rate of Bmi-1 and hTERT in colorectal carcinoma were obviously higher than that in para-carcinoma normal mucosa （P＜0.05）. The positive expression of Bmi-1 and hTERT in colorectal carcinoma were associated with pathological stage， infi ltration depth and lymph node metastasis （P＜0.05）； but not associated with age and differentiated degree （P ＜0.05）. In colorectal carcinoma， the expression of Bmi-1 was positively related to hTERT （P＜0.05）.Conclusions：Bmi-1 and hTERT are closely related to development of colorectal carcinoma； Moreover， they also have synergistic effects in development of colorectal carcinoma.

Colorectal carcinoma； Bmi-1； hTERT； Immunohistochemical stain

R735.3

A

1004-6879（2015）02-0093-03

2014-08-29）