外標(biāo)法測(cè)定黃酒中β-苯乙醇的含量

趙陽 丁春燕 蔡良英

（德清縣食品藥品檢驗(yàn)所，浙江德清313200）

·食品分析·

外標(biāo)法測(cè)定黃酒中β-苯乙醇的含量

趙陽*丁春燕 蔡良英

（德清縣食品藥品檢驗(yàn)所，浙江德清313200）

β-苯乙醇是稻米類黃酒在發(fā)酵過程中產(chǎn)生的特征性物質(zhì)，是稻米類黃酒中重要的營養(yǎng)指標(biāo)。GB/T 13662—2008黃酒標(biāo)準(zhǔn)中，按產(chǎn)品風(fēng)格將黃酒分為傳統(tǒng)型黃酒、清爽型黃酒和特型黃酒，其中規(guī)定傳統(tǒng)型稻米類黃酒β-苯乙醇至少不低于40.0 mg/L，清爽型黃酒β-苯乙醇至少不低于30.0 mg/L。

現(xiàn)有的β-苯乙醇檢測(cè)方法有氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法、高效液相色譜法和紫外分光光度法等。GB/T 13662—2008中采用直接進(jìn)樣氣相色譜內(nèi)標(biāo)定量法測(cè)定。實(shí)際操作中，由于黃酒樣品含有大量焦糖、色素等，未經(jīng)前處理直接進(jìn)樣易對(duì)襯管、毛細(xì)管柱造成污染，且內(nèi)標(biāo)的峰形差，定量誤差大。因此本文研究了通過氯化鈉鹽析、正己烷萃取黃酒中的β-苯乙醇后用氣相色譜儀外標(biāo)法定量。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

氣相色譜儀，美國Agilent 7890A型氣相色譜儀，Openlab在線、離線數(shù)據(jù)工作站，配自動(dòng)進(jìn)樣器和FID檢測(cè)器，載氣為高純N2（純度99.999%），燃?xì)鉃镠2（純度99.9%），助燃?xì)鉃楦呒兛諝猓兌?9.999%）；低速離心機(jī)，安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司；氮吹儀，Oranomation Associates，Jnc。

β-苯乙醇，純度≥98.3%，正己烷，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，光學(xué)純；氯化鈉，江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司，分析純。

黃酒樣品，購于本地超市。

1.2 色譜參數(shù)

進(jìn)樣口溫度：230℃；分流模式：分流比2∶1；HP-INNOWax色譜柱：30m×0.32mm×0.25 μm；柱流量：2 mL/min；程序升溫模式：120℃保持2 min，以25℃/min升溫到210℃，保持5 min；檢測(cè)器溫度：280℃；H2流量：30 mL/min；空氣流量：300 mL/min；尾吹氣流量（N2）：25 mL/min；進(jìn)樣量：1.00 μL。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

準(zhǔn)確稱取0.250 0 gβ-苯乙醇，用正己烷定容至50 mL為儲(chǔ)備液。臨用前，用正己烷逐級(jí)稀釋至0.5 mg/L、1.0 mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、50.0 mg/L、100.0 mg/L。

1.4 樣品的測(cè)定

準(zhǔn)確移取2 mL樣品，置于10 mL具塞離心管，加入1.5 g氯化鈉和3 mL正己烷，劇烈振搖30 s后，以6 000 r/min離心1 min，轉(zhuǎn)移上層萃取液于10 mL刻度試管，下層溶液用6 mL正己烷重復(fù)萃取2次，合并上層萃取液。

將萃取液置于氮吹儀上，50℃下氮吹蒸發(fā)至少于5 mL后，用正己烷定容至5 mL，略靜置后裝入進(jìn)樣小瓶待測(cè)。

吸取1.00 μL待測(cè)溶液進(jìn)樣，以β-苯乙醇的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

2 數(shù)據(jù)與結(jié)果

2.1 樣品色譜圖

將處理好的黃酒樣品注入氣相色譜儀測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間定性，確定5.613 min色譜峰為β-苯乙醇。β-苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見圖1，黃酒樣品中β-苯乙醇色譜圖見圖2。

圖1 β-苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖2 黃酒樣品中β-苯乙醇色譜圖

2.2 線性范圍

將不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液注入氣相色譜儀分別測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。試驗(yàn)結(jié)果表明，β-苯乙醇在0.513 2 mg/L～102.6 mg/L范圍內(nèi)線性良好。

線性回歸方程為y=5.332 95x-2.369 00，R2= 0.999 9，可滿足日常黃酒樣品測(cè)定的需要。

2.3 檢出限和定量限

將0.030 79 mg/L和0.205 3 mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液注入氣相色譜儀分別測(cè)定，得到平均信噪比分別為S/N＝3.25，S/N=11.7，確定本方法的檢出限（S/N＝3）為0.075 mg/L，定量限（S/N＝10）為0.500 mg/L。

2.4 精密度試驗(yàn)

對(duì)同一樣品重復(fù)測(cè)定6次，測(cè)定值分別為50.06 mg/L、50.46 mg/L、50.31 mg/L、50.68 mg/L、50.48 mg/L、50.46 mg/L，RSD為0.41%。

2.5 回收率試驗(yàn)

對(duì)本方法進(jìn)行加標(biāo)回收率考察，結(jié)果見表1。

表1 黃酒樣品中β-苯乙醇加標(biāo)回收率

2.6 樣品測(cè)定結(jié)果

按本方法測(cè)定了11個(gè)黃酒樣品，結(jié)果分別為39.03 mg/L、71.58 mg/L、74.77 mg/L、70.14 mg/L、49.88 mg/L、54.02 mg/L、53.74 mg/L、52.11 mg/L、82.08 mg/L、72.68 mg/L、70.77 mg/L，結(jié)果均符合標(biāo)準(zhǔn)限量值要求。

3 討論與總結(jié)

3.1 樣品前處理的選擇

GB/T 13662—2008中樣品采用加入內(nèi)標(biāo)2-乙基正丁酸后直接進(jìn)樣的方式，試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)該內(nèi)標(biāo)物在HP-INNOWax色譜柱上峰形較差，也有文獻(xiàn)報(bào)道考慮到內(nèi)標(biāo)的不穩(wěn)定性而選擇外標(biāo)法直接定量，但無論哪種定量方式皆為樣品直接進(jìn)樣。由于黃酒中糖類和色素含量較高，乙醇含量較低（一般在15%以下），對(duì)襯管和毛細(xì)管色譜柱傷害較大，因此綜合考慮，試驗(yàn)采用了正己烷提取后進(jìn)樣，可有效避免上述問題。

3.2 提取溶劑的選擇

陳虹等考察了正己烷、正庚烷、正辛烷的萃取回收率，以正己烷最高（87.04%），考慮到正己烷的強(qiáng)揮發(fā)性對(duì)紫外分光光度法測(cè)定的影響較大，而改用正庚烷。但在氣相色譜中，樣品溶液均裝于進(jìn)樣小瓶密封保存，此因素影響不大，且正己烷為色譜常用溶劑之一，綜合考慮，本試驗(yàn)選用了正己烷為萃取溶劑。

3.3 萃取方式的改進(jìn)

在尹桂豪等采用正己烷直接萃取β-苯乙醇的方式基礎(chǔ)上，加入了氯化鈉鹽析，顯著提高了正己烷的萃取效率，回收率達(dá)到了96.93%～100.81%，并使萃取液總體積控制在10 mL以下，通過氮吹濃縮定容的方式批量操作，更簡(jiǎn)便快捷。

3.4 總結(jié)

本試驗(yàn)利用了正己烷萃取黃酒樣品中的β-苯乙醇后用氣相色譜法來外標(biāo)定量，避免了直接進(jìn)樣對(duì)襯管、毛細(xì)管柱造成的污染；通過加入氯化鈉鹽析，顯著提高了萃取效率和方法的加標(biāo)回收率，減少了萃取溶劑的使用量；選擇用氮吹定容，為試驗(yàn)室的批量操作提供了方便。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法在0.50 mg/L～100.00 mg/L的范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小，回收率高，檢出限低，方法準(zhǔn)確可靠。

［1］中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院，浙江省輕工業(yè)研究所，浙江古越龍山紹興酒股份有限公司，等.GB/T 13662—2008黃酒［S］.北京：標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008：1-19.

［2］黎軍，吳嘉碧，陳侶平，等.氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定豉香型白酒中β-苯乙醇及3種二元羧酸的二乙酯［J］.理化檢驗(yàn)(化學(xué)分冊(cè))，2008，44（9）：883-884.

［3］諸葛慶，李博斌，鄭云峰，等.反相高效液相色譜法測(cè)定黃酒中的β-苯乙醇［J］.食品科學(xué)，2009，30（14）：175-177.

［4］陳虹，梅建鳳，陳蔚青.紫外分光光度法測(cè)定發(fā)酵液中的2-苯乙醇含量［J］.食品與發(fā)酵工業(yè)，2007，33（4）：134-136.

［5］李家壽.黃酒色、香、味成分來源淺析［J］.釀酒科技，2001（3）：48-50.

［6］張倩，尋思穎，馮永渝，等.用氣相色譜法測(cè)定飲料酒中β-苯乙醇含量的探討［J］.中國釀造，2012，31（7）：149-151.

［7］尹桂豪，吳月仙，章程輝，等.氣相色譜法測(cè)定黃酒中β-苯乙醇的含量［J］.中國釀造，2008（17）：74-75.

Externalstandard method ofdeterm ination of β-phenylethanolcontent in Chinese-rice w ine

ZHAOYang*DINGChunyan CAI Liangying
（Deqing institute for food and drug control，Zhejiang Deqing 313200，China）

建立了毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定黃酒中的β-苯乙醇含量。采用氯化鈉鹽析，正己烷萃取黃酒中β-苯乙醇，經(jīng)氮吹濃縮定容后，采用HP-INNOWAX毛細(xì)管柱分離，F(xiàn)ID檢測(cè)器檢測(cè)，以保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。該方法的線性范圍為0.513 2 mg/L～102.6 mg/L，R2=0.999 9（n=7），檢出限（S/N＝3）0.075 mg/L，定量限（S/N＝10）為0.50 mg/L，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）0.41%（n=6），回收率96.93%～100.81%。

鹽析；正己烷提?。煌鈽?biāo)法；氣相色譜法；β-苯乙醇

The detection method of the β-phenylethanol content in Chinese-rice wine with capillary gas chromatography is established.The β-phenylethanol was detected by HP-INNOWAX gas chromatography column and FID detector after β-phenylethanol in Chinese-rice wine was extracted with hexane by salting out with sodium chloride and concentrated by nitrogen-blow.Qualitative analysis was achieved by retention time and quantitative analysis was obtained byexternal standard method.The linear calibration curve is from 0.5132 mg/L to102.6 mg/Lwith a correlation of 0.999 9（n=7）;The detection limit（S/N=3）is 0.075 mg/L，the quantitative limit（S/N=10）is 0.50mg/L；The relative standard deviation（RSD）is 0.41%（n=6）and the recovery rate are between 96.93%and 96.93%.

salt out；hexane extraction；external standard；gas chromatography；β-phenylethanol

TS262.4

A

1673-6044（2015）04-0061-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2015.04.017

*趙陽，男，1988年出生，2010年畢業(yè)于中國藥科大學(xué)中藥學(xué)專業(yè)，質(zhì)量工程師。

2015-09-17