養(yǎng)陰生肌膜的處方工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

羅會(huì)盛，寇恒烈，范　競(jìng)，王　迅

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇　南京　210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇　南京　210023）

養(yǎng)陰生肌膜的處方工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

羅會(huì)盛1，寇恒烈2，范競(jìng)1，王迅1

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇南京210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京210023）

目的研究養(yǎng)陰生肌膜的成型工藝及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用單因素考察及正交設(shè)計(jì)的試驗(yàn)方法篩選養(yǎng)陰生肌膜的成型工藝；用高效液相色譜法測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果羧甲基纖維素鈉與聚乙烯醇17-88的質(zhì)量比例為2∶3，羧甲基纖維素鈉與聚乙烯醇17-88的總質(zhì)量在膜漿中的濃度為4％，藥粉質(zhì)量在膜漿中的濃度為2.5％，是養(yǎng)陰生肌膜的最佳處方工藝；鹽酸小檗堿的進(jìn)樣量在2.62～13.1ng范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 3），平均回收率為99.4％，RSD=1.48％（n=6）。結(jié)論篩選出的成型工藝穩(wěn)定可靠，含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好、專(zhuān)屬性強(qiáng)，為該制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了依據(jù)。

養(yǎng)陰生肌膜；成型工藝；高效液相色譜法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；鹽酸小檗堿

口腔黏膜疾病，尤其是口腔潰瘍?yōu)榭谇豢瞥Ｒ?jiàn)病、多發(fā)病。它以反復(fù)發(fā)作和劇烈燒灼、疼痛為特點(diǎn)，給患者帶來(lái)較大的痛苦。其病因復(fù)雜，中醫(yī)認(rèn)為，口腔潰瘍病因歸于火熱（實(shí)火或虛火），與心脾兩臟關(guān)系最為密切［1］。臨床上多以局部用藥、對(duì)癥治療為主。

我院制劑養(yǎng)陰生肌散具有清熱解毒功效，在臨床上廣泛應(yīng)用于頑固性口腔炎、口腔潰瘍及其他各種口唇炎癥的治療。其外用覆蓋面積大，具有易分散、起效快的特點(diǎn)［2］，同時(shí)具有一定程度的機(jī)械性保護(hù)、收斂等作用，而且制備工藝簡(jiǎn)單，劑量易于控制，可隨癥增減，便于小兒服用，儲(chǔ)存、運(yùn)輸、攜帶比較方便。但由于養(yǎng)陰生肌散在口腔中具有很強(qiáng)的吸濕性，故其嗅味、刺激性也相應(yīng)地增加，且治療時(shí)極易發(fā)生移位現(xiàn)象，往往達(dá)不到良好的治療效果，而且由于組方中含有雄黃及易揮發(fā)成分冰片，因此散劑并不是其發(fā)揮藥效最理想的劑型。故本研究試圖通過(guò)研究養(yǎng)陰生肌膜的制備工藝優(yōu)選及同時(shí)建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，來(lái)滿足臨床使用量的日漸增加，同時(shí)解決散劑的上述缺點(diǎn)。

1　儀器與試藥

1.1儀器高效液相色譜儀Agilent 1260系統(tǒng)；十萬(wàn)分之一電子分析天平（BP-211D型，德國(guó)Sartorius）；萬(wàn)分之一電子天平（AR2140型，美國(guó)Ohaus公司）；SK6200H型超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市杰瑞爾電器有限公司）；溶出儀（RC-806型，上海隆拓儀器設(shè)備有限公司）。

1.2試藥養(yǎng)陰生肌散（江蘇省中醫(yī)院醫(yī)院制劑，批號(hào)：1404001、1404002、1404003）；聚乙烯醇 17-50型（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：T20071017）；聚乙烯醇17-88型（阿拉丁，批號(hào)：L1409024）；十二烷基磺酸鈉（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20140422）；羧甲基纖維素鈉（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20140520）；甘油（無(wú)錫正達(dá)藥業(yè)有限公司）；鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110713-201401）；液體石蠟（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20130312）；磷酸（成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)：2013122801）；乙腈、甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2　養(yǎng)陰生肌膜的成型工藝研究

2.1成膜材料選擇中藥膜劑是中藥制劑中的一個(gè)新興領(lǐng)域，包括天然或合成高分子成膜材料構(gòu)成的膜狀載體及中藥活性成分。通過(guò)查閱文獻(xiàn)可知，聚乙烯醇（PVA）在體液中溶化慢，作用時(shí)間長(zhǎng)，具有長(zhǎng)效作用，因此采用PVA為成膜材料制備中藥膜劑的報(bào)道較多，工藝成熟，如蘆薈膜劑、丹皮酚口腔藥膜、雙黃連膜劑等中藥膜劑都選用了PVA作成膜材料［3～6］。

故本課題對(duì)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的不同規(guī)格的成膜材料：聚乙烯醇17-88（PVA17-88）和聚乙烯醇17-50（PVA17-50）進(jìn)行成膜性能比較。

精密稱(chēng)取PVA17-88和PVA17-50各1.00 g，分別加入不同比例的雙蒸水（PVA∶水=1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6、1∶7），待充分溶脹后，置水浴中加熱至溶。觀察溶解情況。再加入不同比例的無(wú)水乙醇（PVA∶無(wú)水乙醇=1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5），攪拌均勻后，超聲脫氣，涂布在涂有液體石蠟的干凈玻璃板上，干燥。觀察成膜情況，結(jié)果見(jiàn)表1、2。

表2　加入不同無(wú)水乙醇量PVA的成膜情況

通過(guò)以上兩種不同規(guī)格PVA的比較，結(jié)果表明，PVA17-88水溶性好于PVA17-50，不同水量PVA17-88在70℃的水浴中即可完全溶解，而不同水量PVA17-50則需要在沸水浴中才能溶解，但有一半是粘結(jié)狀態(tài)。加入無(wú)水乙醇后，PVA17-88膠液無(wú)明顯反應(yīng)，只是膠液變稀，而一部分PVA17-50膠液卻出現(xiàn)白色絮狀固體，難以成膜，另一部分PVA17-50膠液成膜后，表面有粒狀凸起，柔韌性一般。相比而言，PVA17-88成膜膜面光滑，柔韌性較佳。

綜上所述，選擇PVA17-88作為本課題的成膜材料。

2.2PVA膜處方的研究試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)用PVA制膜，膜較硬，柔軟性稍差，為了提高膜材的光滑性、均勻性、柔韌性和成膜性，考慮加入一定量的甘油作為增塑劑，同時(shí)考察羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）作為輔料加入能否對(duì)膜的柔韌性進(jìn)一步提高，故對(duì)CMC-Na和甘油的用量進(jìn)行確定。

取6份PVA17-88（3 g）、3份CMC-Na（2 g），分別用30、20 mL雙蒸水浸泡。充分溶脹后，將6份PVA17-88置于水浴上加熱溶解，其中3份PVA17-88中加入溶脹完全的CMC-Na，攪拌混和均勻，作為一組。另3份PVA17-88作為一組。兩組分別加入不同量的甘油（2.5、5.0、7.5mL），混合均勻，加入適量無(wú)水乙醇，超聲脫氣。待氣泡除盡后，涂布在涂有液體石蠟的干凈玻璃板上，干燥，脫模，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　不同甘油量的兩組成膜比較（以光滑性、均勻性、柔韌性和成膜性來(lái)形容）

結(jié)果表明，加入CMC-Na的一組成膜好于不加CMC-Na的一組。在CMC-Na組中，加入7.5mL甘油的膜油膩，加入2.5mL的甘油成膜較佳，加入5.0 mL的甘油成膜效果最佳。

2.3膜劑成型工藝的優(yōu)化本課題在單因素考察的基礎(chǔ)上，對(duì)影響膜劑成型的3個(gè)因素，采用3因素3水平的正交設(shè)計(jì)進(jìn)行工藝優(yōu)化。試驗(yàn)因素水平見(jiàn)表4，其中，因素A為CMC-Na與PVA17-88的質(zhì)量比例，因素 B為藥在膜漿的濃度，因素C為 CMC-Na與PVA17-88的總量在膜漿中的濃度。正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)見(jiàn)表5。

表4　因素水平表

表5　正交試驗(yàn)安排

2.3.1外觀評(píng)價(jià)外觀評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)如下：柔軟性（滿分10分，脫膜容易，膜的完整性好得分高）；光滑性（滿分10分，膜表面無(wú)粒狀固體，無(wú)氣泡得分高）；成膜性（滿分10分，膜漿易涂布得分高）；均勻性（滿分10分，藥物分散均勻，膜厚薄一致得分高）。外觀評(píng)價(jià)結(jié)果如下表6。

表6　外觀評(píng)價(jià)結(jié)果

2.3.2溶解時(shí)間評(píng)價(jià)精密稱(chēng)取各處方膜0.5g，以（37±0.5）℃的水為溶劑（30 mL），觀察溶解情況。溶解情況見(jiàn)表7。

2.3.3鹽酸小檗堿的含量測(cè)定鹽酸小檗堿的含量按照《中國(guó)藥典》2010年版（一部）中黃柏的含量檢測(cè)方法進(jìn)行測(cè)定［7］，結(jié)果見(jiàn)表8。

表7　溶解時(shí)間評(píng)價(jià)結(jié)果

表8　鹽酸小檗堿含量測(cè)定結(jié)果

2.3.4綜合評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)處理及評(píng)分用多指標(biāo)試驗(yàn)全概率法［8，9］，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，設(shè)Bi為第i號(hào)試驗(yàn)，Aj為第j個(gè)指標(biāo)，i=1、2、3……n，j=1、2、3……k，且 A1、A2、A3……An，互不相容，又設(shè)各指標(biāo)的重要程度之比為A1∶A2∶A3……Ar=M1∶M2……Mr，則：

以Xij表示第j個(gè)指標(biāo)下的第i個(gè)測(cè)定值，以Sj表示第j個(gè)指標(biāo)下各次（n次）試驗(yàn)結(jié)果的和。即：

［3］式即為同時(shí)兼顧各指標(biāo)綜合效應(yīng)的全概率公式。以膜的外觀、膜的溶解時(shí)間及鹽酸小檗堿含量的加和為綜合評(píng)分，三者權(quán)重系數(shù)相同。綜合分值公式用下式計(jì)算：P（Bi）=P（Bi/A1）+P（Bi/A2）+P（Bi/A3），i=1、2、3……n，結(jié)果見(jiàn)表6～8。正交試驗(yàn)的直觀分析、方差分析結(jié)果如表9、10所示。

由表可以得出結(jié)論，因素A、因素B和因素C對(duì)試驗(yàn)結(jié)果無(wú)顯著影響（F比小于F臨界值）。根據(jù)直觀分析和方差分析結(jié)果，選定A2B2C3（處方5）作為養(yǎng)陰生肌膜最佳的成型工藝處方。即：CMCNa與PVA17-88的質(zhì)量比例為2∶3，CMC-Na與PVA17-88的總質(zhì)量在膜漿中的濃度為4％，藥粉質(zhì)量在膜漿中的濃度為2.5％，是養(yǎng)陰生肌膜的最佳處方工藝。

表9　正交直觀分析法

表10　正交方差分析表

2.3.5驗(yàn)證試驗(yàn)按照正交試驗(yàn)優(yōu)選出來(lái)的最佳工藝，取7劑藥量進(jìn)行驗(yàn)證，平行做3份。按前面的方法進(jìn)行膜的外觀、膜的溶解時(shí)間及鹽酸小檗堿含量的測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表11。

表11　驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，優(yōu)選出的成型工藝質(zhì)量穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。

3　養(yǎng)陰生肌膜的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

3.1色譜條件色譜條件：Agilent C18（4.6mm× 250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1％磷酸溶液（每100 mL加0.1g十二烷基磺酸鈉）（36∶64）；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：284 nm；進(jìn)樣量：5 μL；柱溫：30℃。

3.2溶液的制備對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)定鹽酸小檗堿對(duì)照品（6.55 mg）于25 mL容量瓶中，加入適量流動(dòng)相超聲溶解45 min，定容至刻度，搖勻，作為母液（262 μg·mL-1）。用移液管移取2.5mL母液于25 mL容量瓶中，加入流動(dòng)相定容至刻度線，得到鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液（26.2μg·mL-1）。

供試品溶液：取養(yǎng)陰生肌膜精密稱(chēng)定0.5g，加水30 mL，超聲溶解40 min，用移液管移取1 mL溶液于10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度線，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

陰性對(duì)照溶液：按照供試品溶液的制備方法，同法制備鹽酸小檗堿的陰性溶液。

3.3方法專(zhuān)屬性研究分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀。結(jié)果見(jiàn)圖1，說(shuō)明該方法可行。

圖1　HPLC圖譜

3.4線性關(guān)系考察分別精密移取0.2、0.28、0.4、0.6、0.8、1.0 mL鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液（26.2μg·mL-1）到6個(gè)10 mL容量瓶中，加流相定容至刻度線，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。以峰面積積分值（A）對(duì)鹽酸小檗堿進(jìn)樣量（C）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為A=4.528 1C+1.889 1（r= 0.999 3）。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿的進(jìn)樣量在2.62 ～13.1ng范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 3）。

3.5精密度試驗(yàn)精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，按“3.1”項(xiàng)下條件測(cè)定。結(jié)果RSD=0.95％（n=6），表明儀器精密度良好。

3.6重復(fù)性試驗(yàn)取供試品，照供試品溶液制備方法，制備溶液6份，分別進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果RSD= 0.51％（n=6），表明供試品重現(xiàn)性良好。

3.7溶液穩(wěn)定性研究取同一供試品溶液，分別在制備后0、2、4、6、12、24 h進(jìn)樣，結(jié)果RSD=0.43％，表明其在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.8加樣回收率試驗(yàn)精密稱(chēng)取同一批號(hào)樣品（批號(hào)：1404001）共6份，加入相應(yīng)量的鹽酸小檗堿對(duì)照品，按“3.1”項(xiàng)下的方法制備并測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表12。RSD為1.48％（n=6），結(jié)果表明本方法準(zhǔn)確可靠。

表12　養(yǎng)陰生肌膜中鹽酸小檗堿加樣回收率試驗(yàn)

3.9樣品含量測(cè)定分別取3批樣品，按“3.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“3.2”項(xiàng)下條件測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算樣品中的鹽酸小檗堿含量。RSD= 0.57％（n=3）。結(jié)果見(jiàn)表13。

表13　樣品含量測(cè)定結(jié)果

4　討論

4.1黃柏堿與小檗堿作為處方中主藥黃柏的含量測(cè)定指標(biāo)，檢視波長(zhǎng)分別為265 nm與284 nm，在265 nm波長(zhǎng)下，黃柏堿幾乎沒(méi)有吸收，在284 nm處有最大吸收，而小檗堿在2個(gè)波長(zhǎng)下幾乎沒(méi)有影響，所以選擇284 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。但是在本試驗(yàn)中，因?yàn)橹苽涔┰嚻匪Q(chēng)取膜的量相對(duì)較少，在試驗(yàn)中黃柏堿的峰并不明顯，因此本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定小檗堿含量建立養(yǎng)陰生肌膜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

4.2本方中含有少量有毒中藥雄黃，因時(shí)間原因，本課題暫時(shí)沒(méi)有對(duì)雄黃的有毒成分制定限度標(biāo)準(zhǔn)，該限度標(biāo)準(zhǔn)將在下一步的試驗(yàn)中進(jìn)行制定。

4.3與原來(lái)的散劑相比，養(yǎng)陰生肌膜的成型工藝簡(jiǎn)單可靠，含量測(cè)定方法準(zhǔn)確，可用于該制劑的制備及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的參考。同時(shí)，新劑型將會(huì)滿足臨床的需要，被進(jìn)一步推廣，服務(wù)病人。

目前，中藥膜劑尚屬發(fā)展階段，其以精制度高、工藝簡(jiǎn)單、療效精確、緩慢釋放、使用舒適、設(shè)備便宜、成本低廉等諸多特點(diǎn)，符合中藥劑型現(xiàn)代化的改革趨勢(shì)，具有十分廣闊的發(fā)展空間。

［1］李雨，林越，孫麗霞.中醫(yī)藥治療復(fù)發(fā)性口腔潰瘍研究進(jìn)展［J］.國(guó)醫(yī)論壇，2007，22（4）：55-56.

［2］諸玄仁.中藥散劑的初步探討［J］.江蘇中醫(yī)，1963，8：5-8.

［3］張韻慧，李寧，許建辰，等.聚乙烯醇在中藥新劑型中的應(yīng)用［J］.中國(guó)中藥雜志，2004，29（2）：101-103.

［4］孫迎東，汪風(fēng)芹，趙濱，等.復(fù)方雙層緩釋口腔藥膜的制備及臨床觀察［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2004，15（8）：489-490.

［5］王晉，劉巨厚，王占琴.正交試驗(yàn)優(yōu)化白及成膜材料的制備工藝［J］.中國(guó)藥房，2005，16（15）：1134-1136.

［6］王文剛，惲榴紅，王睿，等.經(jīng)皮吸收促進(jìn)劑的研究與應(yīng)用進(jìn)展［J］.中國(guó)新藥雜志，2006，15（4）：254-261.

［7］劉強(qiáng)，周莉玲，李銳.中藥透皮吸收制劑的研究思路［J］.中藥新藥與臨床藥理，1997，8（2）：116-118.

［8］韓旻.中藥凝膠制劑的研究概況［J］.中草藥，2002，33（5）：473-474.

［9］富志軍，周東新，鐘鳴.復(fù)方中藥口腔粘膜粘附緩釋膜的研究［J］.中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，32（5）：350-353.

The prescription process and quality standard of Yangyin Shengji Membrane

LUO Hui-sheng1，KOU Heng-lie2，F(xiàn)AN Jing1，WANG Xun1
（1.Affiliated Hospital of Nanjing University of TCM，Nanjing 210029，China；2.Nanjing University of TCM，Nanjing 210023，China）

Objective To study the molding process and quality standard of Yangyin Shengji Membrane.Methods The optimum conditions about molding process of Yangyin Shengji Membrane were optimized by the single factor test and the means of the orthogonal design；The content of berberine hydrochloride was determined by HPLC and its quality standard was established.Results The best molding process of Yangyin Shengji Membrane as follow：the mass ratio of CMC-Na and PVA17-88 was 2∶3，the total mass of CMC-Na and PVA17-88 in the plasma membrane was 4％，the concentration of the medicine in the plasma membrane was 2.5％.The linear range of berberine hydrochloride was 2.62～13.1 ng（r= 0.999 3）.The average recovery was 99.4％，RSD=1.48％（n=6）.Conclusion The screened molding process was stable and reliable.The method of measurement was simple and had good reproducibility and specificity.It can provide a basis for the quality evaluation of Yangyin Shengji Membrance.

Yangyin Shengji Membrance；Molding process；HPLC；Quality standard；Berberine hydrochloride

R927.1

A

2095-5375（2015）12-0714-005

江蘇省藥學(xué)會(huì)奧賽康臨床藥學(xué)基金（No.201304）

羅會(huì)盛，男，副主任中藥師，研究方向：中藥制劑的研究與標(biāo)準(zhǔn)制定，E-mail：870646578@qq.com

王迅，男，主管中藥師，研究方向：中藥制劑的研發(fā)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立，Tel：025-86614204，E-mail：xiaowangyaoshi@hotmail.com