丹參多酚酸鹽對急診PCI患者術(shù)后MDA、NADPH氧化酶p22phox活性的影響

李光彩 姚宗芹 楊樹國 付存玉

急性心肌梗死的發(fā)病率及就診率逐年提高，急診PCI術(shù)大大提高了患者生存率，然而慢復(fù)流或無復(fù)流現(xiàn)象成為影響患者生存率的重要問題，其機制尚不明確。急診PCI術(shù)后氧化應(yīng)激的增強對再灌注的影響是近年來學(xué)者關(guān)注的焦點，有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)丹參多酚酸鹽可改善冠脈慢血流現(xiàn)象[1]，其機制尚待進一步研究。因此設(shè)立本課題，旨在從氧化應(yīng)激的角度探討丹參多酚酸鹽的臨床療效。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年6月-2014年6月在臨沂市沂水中心醫(yī)院就診的83例急性ST段抬高型心肌梗死行急診PCI治療的患者，隨機數(shù)字表法分為治療組46例，其中男29例，女17例，平均年齡（68.4±17.1）歲；和對照組37例，其中男24例，女13例，平均年齡（66.3±14.2）歲。對照組包括雙抗血小板、抗凝、調(diào)脂等治療，治療組在對照組治療的基礎(chǔ)上+丹參多酚酸鹽注射液200 mg/d靜滴。急性ST段抬高型心肌梗死的診斷符合2010年中華醫(yī)學(xué)會急性ST段抬高型心肌梗死診斷及治療指南。本次研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核通過，入選研究對象均在知情同意下簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 急診PCI術(shù) 所有患者入院立即行急診PCI術(shù)，時間窗均在6 h內(nèi)，由經(jīng)驗豐富介入醫(yī)師進行操作。

1.2.2 MDA測定 所有研究對象均于入院即刻及治療后2周抽取肘靜脈血各2 mL，分離血清用于MDA測定。采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。通過繪制標準曲線求出標本中MDA濃度。由上海西唐生物工程研究所提供試劑盒，按照說明書測定。

1.2.3 NADPH氧化酶p22phox活性測定 入院即刻及治療后2周取肘靜脈血各2 mL，采用明膠自然沉淀法聯(lián)合紅細胞裂解液法提取外周血吞噬細胞；硫氰酸胍一步法提取吞噬細胞總RNA；NADPH氧化酶p22phox（317bp）及GAPDH內(nèi)參基因（572bp）的引物序列由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司提供。其中p22phox：上游 5’-TGGGCGGC TGCTTGATGGT-3’；下游5’-TGGGCGGCTGCTTGATGGT-3’；GAPDH mRNA： 上游 5’-TCACCATCTTCCAGGAGCG-3’； 下 游 5’-CTGCTTCACCACCTTCTTGA-3’。PCR擴增體系采用50 μL反應(yīng)體系。凝膠成像儀成像并保存結(jié)果。通過目的基因p22phox mRNA表達條帶與內(nèi)參條帶的灰度比值比代表吞噬細NADPH氧化酶p22phox的表達水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 所得數(shù)據(jù)使用SPSS 16.0軟件包進行統(tǒng)計分析，符合正態(tài)分布的計量資料以（±s）表示，符合正態(tài)分布且方差齊性兩組間比較及兩獨立樣本比較采用t檢驗，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前后MDA水平的變化 治療組治療前后MDA水平分別為（2562.28±920.17）nmol/mL、（1867.72±836.20）nmol/mL，對照組分別為（2448.41±872.81）nmol/mL、（2352.79±870.01）nmol/mL，治療組治療后MDA水平較治療前明顯下降，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），治療組治療后MDA水平較對照組治療后明顯下降，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 治療組及對照組治療前后p22phox活性的變化 治療組治療后NADPH氧化酶p22phox表達（0.61±0.30）較治療前（0.98±0.45）明顯下降，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）（圖1）。對照組治療后NADPH氧化酶p22phox（0.88±0.32）與入院時（0.96±0.42）比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。治療組治療后2周NADPH氧化酶p22phox活性較對照組治療后明顯降低，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）（圖2）。

圖1 治療組治療前后凝膠電泳結(jié)果

圖2 治療組與對照組治療后凝膠電泳結(jié)果

3 討論

良好的心肌再灌注是行PCI術(shù)的最終目標，也是改善患者預(yù)后的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前研究表明，影響心肌再灌注的機制復(fù)雜，不能用單一的機制來防范和解決，而采用藥物預(yù)防和治療是研究的主要方向。氧化應(yīng)激是近年來提出的影響PCI術(shù)后慢血流或無復(fù)流現(xiàn)象發(fā)生的重要機制之一[2-3]，近來動物實驗研究發(fā)現(xiàn)丹參多酚酸鹽預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷具有較好的防護作用[4]，可對抗心肌細胞凋亡的發(fā)生[5]，減少自由基的生成及增加對自由基的清除，再灌注損傷減輕，從側(cè)面提示氧化應(yīng)激對再灌注的影響[6]。NADPH氧化酶，是機體產(chǎn)生活性氧族的主要來源[7-8]，是參與氧化應(yīng)激的主要的酶系，該途徑促進大鼠心肌缺血再灌注氧化損傷[9]。MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物之一，脂質(zhì)過氧化在氧化應(yīng)激研究中最為廣泛，其水平高低常?？煞从持|(zhì)過氧化的程度，間接地反映出機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度和細胞損傷的程度，是評價心肌缺血損傷的較好指標[10]。

本研究中，治療組經(jīng)治療后NADPH氧化酶p22phox活性較治療前明顯降低，MDA水平下降，提示急性ST段抬高型心肌梗死患者經(jīng)治療后體內(nèi)氧化應(yīng)激水平下降，脂質(zhì)過氧化水平降低，與張學(xué)軍等[11]研究結(jié)論一致。而丹參多酚酸鹽治療組較對照組NADPH氧化酶p22phox活性及MDA水平下降更加明顯，提示在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上，加用丹參多酚酸鹽可進一步抑制氧化應(yīng)激的水平。丹參多酚酸鹽可明顯減弱NADPH氧化酶p22phox活性及降低MDA水平，在抑制氧化應(yīng)激方面發(fā)揮重要作用，與相關(guān)研究結(jié)果一致[12]。對照組二者均有降低趨勢，但差別無統(tǒng)計學(xué)意義，可能與PCI本身及時進行血運重建，且進行了規(guī)范的抗血小板、抗凝、調(diào)脂等治療有關(guān)。且在丹參多酚酸鹽的整個治療過程中，無不良反應(yīng)發(fā)生，提示丹參多酚酸鹽臨床用安全、有效。

中藥丹參的成分可分為水溶性和脂溶性，而水溶性成分主要為酚類物質(zhì)，對心血管疾病有益。而丹參多酚酸鹽是酚類物質(zhì)的高度純化，其可降低急性ST段抬高型心肌梗死PCI術(shù)后氧化應(yīng)激水平[13]，改善微循環(huán)，提高組織灌注，但潛含著多元化的藥理作用機制[14]，其中之一可能與減弱吞噬細胞NADPH氧化酶p22phox的活性有關(guān)，但由于病例組發(fā)病機制本身較為復(fù)雜，氧化應(yīng)激影響因素眾多，尚需在以后的臨床工作中進一步研究。

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