流蘇花總黃酮超聲提取工藝及抗氧化活性研究

孫鮮明，李小方，鄧瑞雪，劉一瓊，侯學(xué)文，省永朋，劉　普

（河南省伏牛山野生藥材基源工程技術(shù)研究中心，河南科技大學(xué)化工與制藥學(xué)院，河南洛陽471023）

流蘇花總黃酮超聲提取工藝及抗氧化活性研究

孫鮮明，李小方，鄧瑞雪，劉一瓊，侯學(xué)文，省永朋，劉普*

（河南省伏牛山野生藥材基源工程技術(shù)研究中心，河南科技大學(xué)化工與制藥學(xué)院，河南洛陽471023）

研究流蘇花中總黃酮超聲輔助提取最佳工藝條件，并評(píng)價(jià)提取總黃酮的抗氧化活性。在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以總黃酮的得率為指標(biāo)，采用響應(yīng)面法優(yōu)化總黃酮超聲提取條件；并通過總黃酮清除O2-·、DPPH·和·OH及抗脂質(zhì)體過氧化等的能力來研究其抗氧化活性。流蘇花總黃酮的最佳提取工藝條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)為65%，液料比為37∶1 mL/g，水浴溫度54℃，超聲時(shí)間40 min，在此條件下，總黃酮的得率達(dá)到10.736%。流蘇花總黃酮對(duì)O2-·、DPPH·和·OH具有較好的清除作用，具有較好的抗脂質(zhì)過氧化活性，并與總黃酮的濃度呈一定的量效關(guān)系。利用響應(yīng)面分析法分析結(jié)果可靠，得到了流蘇花總黃酮超聲輔助提取的最佳工藝條件，提取得到的總黃酮具有較好的抗氧化活性。

流蘇花，總黃酮，超聲波輔助提取，響應(yīng)面法，抗氧化

流蘇樹（Chionanthus retusa Lindl et Paxt）為木犀科流蘇樹屬植物，又名花木、蘿卜絲花、油根子、牛荊子、四月雪，為國(guó)家二級(jí)保護(hù)植物。流蘇樹主要分布于黃河中下游及其以南地區(qū)［1］?！吨袊?guó)經(jīng)濟(jì)植物志》中記載，流蘇樹的芽、葉具有消暑止渴功效，主治中暑。民間有在春天采流蘇的嫩葉和花，制作茶飲用的歷史。用流蘇花制作的茶稱為“糯米花茶”，清香爽口，別具一番風(fēng)味［2-3］。流蘇花作為一種珍貴的民間茶原料正因其特殊的風(fēng)味及功能受到越來越多的關(guān)注。胡喜蘭等［4］研究了由流蘇葉及花制成的“糯米茶”和“糯米花茶”中有效成分，明確了其中含有較多的多酚類化合物，并證明這些多酚類物質(zhì)具有較好抑制DPPH自由基的活性。并通過分離進(jìn)一步證實(shí)其中含有黃酮類化合物，并初步探索了黃酮類化合物的抗氧化活性［5］。

課題組前期對(duì)流蘇花的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，證明其中主要含有黃酮類成分［6］。本文繼續(xù)研究流蘇花中黃酮類成分的提取工藝及抗氧化活性，以期為流蘇花的進(jìn)一步研究開發(fā)提供參考。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

流蘇花材料采自伏牛山區(qū)的嵩縣，經(jīng)河南農(nóng)業(yè)大學(xué)高致明教授鑒定為木犀科（Oleaceae）流蘇樹屬（Chionanthus）植物流蘇（Chionanthus retusa Lindlet Paxt）的花和少量嫩葉；卵磷脂、2-硫代巴比妥酸（TBA）、三氯乙酸、三羥甲基氨基甲烷（Tris）、1，1-二苯基-2-三硝基肼（DPPH）、還原性煙酰胺腺嘌呤核苷酸（NADH）、吩嗪甲酯硫酸鹽（PMS）、氯化硝基四氮唑（NBT） 分析純，阿拉丁化學(xué)有限公司；水楊酸、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、硫酸亞鐵、雙氧水、無水乙醇、氫氧化鈉、硝酸鋁、亞硝酸鈉分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品本實(shí)驗(yàn)室自制，經(jīng)核磁和HPLC測(cè)定，純度大于98%；二次蒸餾水自制。

Ymnl-2008DE智能溫控雙頻超聲波萃取儀超聲頻率25 KHz和40 KHz，超聲功率100～1500 W連續(xù)可調(diào)，南京以馬內(nèi)利儀器設(shè)備有限公司；RE-2000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器鞏義予華儀器有限責(zé)任公司；FA2004電子天平天津市天分分析儀器廠；YXJ-A型高速大容量電動(dòng)離心機(jī)江蘇金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠；SB-2A型紫外分光光度儀天津市天分分析儀器廠。

1.2研究方法

1.2.1流蘇花總黃酮的提取工藝流蘇花室溫下于陰涼處陰干，粉碎，過20目篩，準(zhǔn)確稱取1.0 g流蘇花，加入到離心管中，按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的條件，加入一定質(zhì)量倍數(shù)、一定濃度的乙醇，設(shè)定超聲萃取儀的超聲頻率為40 KHz，超聲功率為1000 W，控制一定的超聲時(shí)間及超聲波水浴溫度進(jìn)行提取。提取完成后，6000 r/min離心10 min，收集提取液。重復(fù)提取3次，合并提取液，定容于容量瓶中，測(cè)定總黃酮含量。

1.2.2總黃酮的定量測(cè)定

1.2.2.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作以蘆丁為對(duì)照品，按照參考文獻(xiàn)［7］的方法精確稱取0.0103 g蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，加入體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液溶解，定容至50 mL，然后分別取一定量的溶液，分別加入到容量瓶中。取一定量的蘆丁溶液，加入顯色劑，用紫外分光光度儀在510 nm處測(cè)定溶液吸光度，對(duì)照組為不加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品。以濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2.2流蘇花總黃酮得率的測(cè)定取一定量的黃酮提取物，準(zhǔn)確稱重，溶解后，按照文獻(xiàn)［7］的方法加入顯色劑，用紫外分光光度儀在510 nm處測(cè)定溶液吸光度，然后根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮的含量，然后根據(jù)下列公式計(jì)算總黃酮得率。

式中：M—一定體積測(cè)試液中總黃酮含量/mg；V—測(cè)定時(shí)所吸取樣品試液的體積；V0—離心后定容的總體積；103—質(zhì)量換算因數(shù)。

1.2.3單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.3.1液料比對(duì)流蘇花總黃酮得率的影響稱取五份樣品，設(shè)置液料比分別為10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1（mL/g），在超聲時(shí)間為30 min，超聲提取溫度為45℃，乙醇體積分?jǐn)?shù)為65%條件下提取。每組實(shí)驗(yàn)做3組平行。

1.2.3.2乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)流蘇花總黃酮得率的影響

準(zhǔn)確稱取六份樣品，設(shè)置乙醇體積分?jǐn)?shù)分別為35%、45%、55%、65%、75%、85%，固定液料比為30∶1（mL/g），提取時(shí)間為30 min，提取溫度為45℃。每組實(shí)驗(yàn)做3組平行。

1.2.3.3超聲時(shí)間對(duì)流蘇花總黃酮得率的影響準(zhǔn)確樣品五份，設(shè)置超聲時(shí)間分別為10、20、30、40、50 min，固定乙醇體積分?jǐn)?shù)為65%，液料比為30∶1 mL/g，提取溫度為45℃。每組實(shí)驗(yàn)做3組平行。

1.2.3.4水浴溫度對(duì)流蘇花總黃酮得率的影響準(zhǔn)確稱取五份樣品，設(shè)置水浴溫度分別為35、45、55、65、75℃，固定提取流蘇花黃酮時(shí)乙醇體積分?jǐn)?shù)為65%，液料比為30∶1 mL/g，提取40 min。每組實(shí)驗(yàn)做3組平行。

1.2.4響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)在單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上，選取乙醇體積分?jǐn)?shù)、液料比、超聲時(shí)間、水浴溫度對(duì)流蘇花總黃酮得率影響較大的因素，根據(jù)Box-Beknhen中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，設(shè)計(jì)4因素3水平的響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)［8］?？偣策M(jìn)行29次實(shí)驗(yàn)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)重復(fù)3次，結(jié)果取3次數(shù)據(jù)的平均值。采用隨機(jī)化的原則以減少隨機(jī)誤差。實(shí)驗(yàn)安排見表1。

表1　響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)因素和水平表Table 1　Coded values and corresponding actual values of the optimization parameters used in response surface analysis

1.2.5流蘇花總黃酮的抗氧化活性測(cè)定

1.2.5.1總黃酮對(duì)O2-·清除率測(cè)定O2-·的測(cè)定用NADH-PMS-NBT法［9］測(cè)定：采用Tris-HCl緩沖液（濃度0.05 mmol/L，pH8.0）將流蘇花總黃酮粗提物溶液稀釋成不同的濃度梯度，用移液管從不同濃度的黃酮溶液中各取1.5 mL分別置于5 mL容量瓶中，依次在各個(gè)容量瓶中加入0.5 mL 300 μmol/L的NBT（用pH8.0的Tris-HCl緩沖液進(jìn)行配制），0.5 mL 468 μmol/L的NADH（用pH8.0的Tris-HCl緩沖液進(jìn)行配制），0.5 mL 60 μmol/L的PMS（用pH8.0的Tris-HCl緩沖液進(jìn)行配制），充分混勻之后，25℃水浴5 min，在波長(zhǎng)為560 nm條件下測(cè)定吸光度，以緩沖液作為空白對(duì)照。

E（O2-·）（%）=（1-A0/A1）×100

式中：E（O2·-）—總黃酮提取液對(duì)O2·-的清除率（%）；A1—總黃酮提取液的吸光度；A0—空白對(duì)照組的吸光度。

1.2.5.2總黃酮對(duì)DPPH·清除率測(cè)定參考文獻(xiàn)［10］的方法：從已配好的各個(gè)濃度的總黃酮提取物中各取2 mL于容量瓶中，再向其中加入濃度為0.04 mg/mL的DPPH溶液2 mL，混合均勻，室溫下反應(yīng)20 min，離心，吸取上清液，在波長(zhǎng)為517 nm處測(cè)定樣品的吸光度為A1。另外，再各取2 mL上述不同濃度的總黃酮溶液置于容量瓶中，分別向其中加入無水乙醇2 mL，室溫下反應(yīng)20 min，離心，取上清液，在波長(zhǎng)517 nm處測(cè)定樣品的吸光度為A2；以2 mL 0.04 mg/mL的DPPH和2 mL無水乙醇反應(yīng)做為參比，其吸光度記為A0。

E（DPPH·）（%）=［1-（A1-A2）/A0］×100

式中：E（DPPH·）—總黃酮提取液對(duì)DPPH自由基的清除率（%）；A0—2 mL DPPH溶液+2 mL無水乙醇反應(yīng)后的吸光度；A1—2 mL DPPH溶液+2 mL總黃酮提取液的吸光度；A2—2 mL無水乙醇+2 mL總黃酮提取液的吸光度。

1.2.5.3總黃酮對(duì)·OH清除率的測(cè)定參考文獻(xiàn)［11］方法：從已配好的各個(gè)濃度的總黃酮提取物中各取2 mL溶液于容量瓶中，先向其中加入2 mL 6 mmol/L的FeSO4，再加入2 mL 6 mmol/L的H2O2，混合均勻，室溫下靜置10 min，最后加入2 mL 6 mmol/L的水楊酸，混合均勻，室溫下靜置30 min。在波長(zhǎng)為510 nm處測(cè)定其吸光度，用二次蒸餾水代替水楊酸并測(cè)定吸光度，以二次蒸餾水做空白對(duì)照。

E（·OH）（%）=［1-（A1-A2）/A0］×100

式中：E（·OH）—羥基自由基的清除率（%）；A1—總黃酮提取物反應(yīng)的吸光度；A2—有無水楊酸參加反應(yīng)時(shí)總黃酮提取物的吸光度；A0—空白吸光度。

1.2.5.4總黃酮抗脂質(zhì)體過氧化活性的測(cè)定參考文獻(xiàn)［12］的方法：向10 mL容量瓶中分別加入不同質(zhì)量濃度的總黃酮提取物樣品溶液各1.00 mL，卵磷脂溶液1.0 mL，1.0 mL 0.4 mmol/L的FeSO4，混合均勻，在37℃水浴中加熱1 h，再向其中各加入2.0 mL三氯乙酸（TCA）-硫代巴比妥酸（TBA）-鹽酸（HC1）混合液，然后再于100℃水浴中加熱15 min后放冰箱中急速冷卻，離心，吸取上清液，在波長(zhǎng)為532 nm處測(cè)定吸光度，用二次蒸餾水作為參比，用VC作為對(duì)照組。

抑制率（%）=［A0-（A1-A2）］/A0×100

式中：A0—空白對(duì)照液的吸光度；A1—加入總黃酮提取液后的吸光度；A2—不加卵磷脂的總黃酮提取液的吸光度。

1.3數(shù)據(jù)處理

2　結(jié)果與分析

2.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

以吸光度A為縱坐標(biāo)，蘆丁對(duì)照品的質(zhì)量（mg）為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：M=0.992A+ 0.0012（M為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量/mg，A為吸光度），相關(guān)系數(shù)R2=0.998。

2.2單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1液料比對(duì)流蘇花總黃酮得率的影響從圖1可以得出，隨著液料比的增大，流蘇花黃酮的得率不斷的快速升高，當(dāng)液料比為30∶1（mL/g）時(shí)，達(dá)到了最大得率10.654%；之后隨著液料比的增大，流蘇花總黃酮的得率緩慢下降。因此，選取液料比為30∶1（mL/g）最為合適。

圖1　液料比單因素實(shí)驗(yàn)Fig.1　Solid-liquid ratio single factor test

2.2.2乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)流蘇花總黃酮得率的影響從圖2可以得出，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大，流蘇花黃酮的得率不斷的升高，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到70%時(shí)達(dá)到最大黃酮得率10.782%；當(dāng)體積分?jǐn)?shù)大于70%時(shí)，流蘇花黃酮的得率開始下降。因此，選用乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%最為合適。

圖2　乙醇體積分?jǐn)?shù)單因素實(shí)驗(yàn)Fig.2　Ethanol volume fraction of single factor test

2.2.3超聲時(shí)間對(duì)流蘇花總黃酮得率的影響由圖3可以看出，流蘇花中黃酮的得率在6.886%～7.165%之間變化。在提取時(shí)間為10～30 min之間時(shí)黃酮得率隨提取時(shí)間的增加而增大。當(dāng)提取時(shí)間大于30 min黃酮的得率隨時(shí)間的增加趨勢(shì)變緩。因此超聲的時(shí)間可以選定為30 min。

2.2.4水浴溫度對(duì)流蘇花總黃酮得率的影響從圖4可知，流蘇花黃酮的得率隨著超聲溫度的增大而增大，在55℃時(shí)折線又下降，增大與下降的速度都較快。即在55℃的時(shí)候基本達(dá)到最大得率為8.255%，得率總的變化值為7.505%～8.255%。在最大得率的溫度非常適合提取流蘇花中黃酮類化學(xué)成分，而且不會(huì)導(dǎo)致由于高溫而產(chǎn)生的活性物質(zhì)的活性喪失。因此，選擇55℃進(jìn)行響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)。

由單因素實(shí)驗(yàn)確定了乙醇體積分?jǐn)?shù)的選擇區(qū)間為60%～80%，液料比的選擇區(qū)間為20∶1～40∶1 mL/g，超聲時(shí)間為20～40 min，水浴溫度為45～65℃。

2.3響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果

響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果如表2所示。利用統(tǒng)計(jì)軟件Design Expert 8對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，進(jìn)行回歸擬合，得方程：

Y（%）=10.44-0.33A+0.51B+0.11C+0.032D+ 0.19AB+0.1AC-0.42AD+7.5E-003BC+0.013BD-0.078CD-1.29A2-0.36B2+0.01C2-0.13D2。

模型p＜0.0001，表明回歸模型達(dá)到了極顯著水平，失擬項(xiàng)（p=0.0806）不顯著，說明回歸模型和預(yù)測(cè)值之間有較好的擬合度，能夠正確反映出總黃酮得率與超聲時(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)、水浴溫度、液料比之間的關(guān)系。因此，該模型可以用于預(yù)測(cè)總黃酮得率的實(shí)際情況。

由表3可以看出，模型的一次項(xiàng)A、B極顯著；交互項(xiàng)AD顯著；二次項(xiàng)A2、B2極顯著。由此可知，自變量和響應(yīng)值之間不是簡(jiǎn)單的線性關(guān)系。從F值的大小可以看出，四個(gè)因素對(duì)總黃酮得率的影響順序?yàn)椋築（液料比）＞A（乙醇體積分?jǐn)?shù)）＞C（超聲時(shí)間）＞D（水浴溫度）。

為了更直觀地表現(xiàn)兩個(gè)因素對(duì)流蘇花總黃酮得率（綜合指標(biāo)）的影響，可以令其他因素水平值為零，即以乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲時(shí)間、液料比、水浴溫度4個(gè)因素中兩個(gè)因素取零水平時(shí)，另兩個(gè)因素對(duì)流蘇花總黃酮得率的影響進(jìn)行分析。圖5直觀地反映了各因素交互作用對(duì)響應(yīng)值的影響。

圖3　超聲時(shí)間單因素實(shí)驗(yàn)Fig.3　The ultrasonic time single factor test

圖4　水浴溫度單因素實(shí)驗(yàn)Fig.4　The temperature of the water bath single factor test

表2　響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)分析及結(jié)果Table 2　Experimental design and results for response surface analysis

圖5　液料比與乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮得率影響的響應(yīng)面圖Fig.5　Response surface plot showing the interactive effects of liquid/material ratio and ethanol concentration on the extraction rate of total flavonoids

根據(jù)回歸分析結(jié)果，得到響應(yīng)面曲面圖5～圖10，由圖5可以看出，隨著液料比的增大，總黃酮的得率有明顯的變化趨勢(shì)，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大，總黃酮的得率變化不太明顯。由等高線疏密可以看出，沿液料比移動(dòng)的密度大于沿乙醇體積分?jǐn)?shù)的密度，表明液料比對(duì)響應(yīng)面的影響更大一些。同理得出單因素對(duì)總黃酮得率的影響程度依次為B（液料比）＞A（乙醇體積分?jǐn)?shù)）＞C（超聲時(shí)間）＞D（水浴溫度），與F值結(jié)構(gòu)相符。

表3　響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)方差分析結(jié)果Table 3　Analysis of variance for the fitted regression model

圖6　水浴溫度與超聲時(shí)間與對(duì)黃酮得率影響的響應(yīng)面圖Fig.6　Response surface plot showing the interactive effects of extraction temperature and extraction time on the extraction rate of total flavonoids

圖7　液料比和超聲時(shí)間對(duì)總黃酮得率影響的響應(yīng)面圖Fig.7　Response surface plot showing the interactive effects of liquid/material ratio and extraction time on the extraction rate of total flavonoids

圖8　超聲時(shí)間與乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮得率影響的響應(yīng)面圖Fig.8　Response surface plot showing the interactive effects of extraction time and ethanol concentration on the extraction rate of total flavonoids

圖9　水浴溫度與乙醇體積分?jǐn)?shù)與對(duì)黃酮得率影響的響應(yīng)面圖Fig.9　Response surface plot showing the interactive effects of extraction temperature and ethanol concentration on the extraction rate of total flavonoids

由響應(yīng)面回歸方程，通過軟件的分析，得到流蘇花黃酮的理論最佳提取工藝的條件：體積分?jǐn)?shù)為64.67%，液料比為37.15∶1 mL/g，超聲時(shí)間為40.00 min，水浴溫度為53.93℃，流蘇花黃酮的理論得率可達(dá)到10.7484%?？紤]到實(shí)際操作，將最優(yōu)條件校正為乙醇體積分?jǐn)?shù)65%，液料比37∶1 mL/g，超聲時(shí)間40 min，水浴溫度54℃，在此條件下，總黃酮得率為10.736%。與理論預(yù)測(cè)值基本吻合，說明采用響應(yīng)面法優(yōu)化得到的超聲提取條件參數(shù)準(zhǔn)確可靠，具有一定的實(shí)用價(jià)值。

2.4總黃酮的抗氧化活性

2.4.1總黃酮對(duì)超氧陰離子清除率測(cè)定由圖11可以看出，隨著流蘇花黃酮提取物濃度的增加，黃酮對(duì)超氧陰離子的清除能力也就越來越好，清除能力較強(qiáng)，EC50為0.03831 mg/mL。VC的清除率變化趨勢(shì)與流蘇花黃酮相類似，但是其清除率與黃酮相比，效果稍差。VC的EC50為0.05637 mg/mL，約為流蘇花黃酮的1.6倍，這可以說明流蘇花黃酮本身具有很強(qiáng)的超氧陰離子清除能力。

圖10　水浴溫度與乙醇體積分?jǐn)?shù)與對(duì)黃酮得率影響的響應(yīng)面圖Fig.10　Response surface plot showing the interactive effects of extraction temperature and ethanol concentration on the extraction rate of total flavonoids

圖11　超氧陰離子清除率曲線Fig.11　Curve of superoxide anion scavenging rate

2.4.2總黃酮對(duì)DPPH自由基清除率測(cè)定由圖12可以看出，流蘇花黃酮隨著濃度的增大，對(duì)DPPH的清除率也隨著增大，EC50為0.02635 mg/mL。相比之下，VC的清除率要大于流蘇花黃酮的清除率，其EC50值為0.001424 mg/mL。流蘇花黃酮的DPPH自由基EC50約為VC的1.85倍。流蘇花黃酮的DPPH自由基清除率較VC差，但是也有一定的清除能力。

圖12　DPPH自由基清除率曲線Fig.12　Curve of DPPH radical scavenging rate

2.4.3總黃酮對(duì)羥自由基（·OH）清除率的測(cè)定由圖13可以看出，流蘇花黃酮和VC對(duì)羥基自由基清除率的走勢(shì)類似，流蘇花黃酮的EC50值為0.00567 mg/mL，VC的EC50值為0.00508 mg/mL，流蘇花黃酮的EC50值約是VC的1.1倍，因此流蘇黃酮清除效果和VC相似，顯示出較好的清除能力。

圖13　羥基自由基清除率曲線Fig.13　Curve of·OH scavenging rate

圖14　抗脂質(zhì)體過氧化能力折線圖Fig.14　Line curve of anti-lipid peroxidation ability

2.4.4總黃酮抗脂質(zhì)體過氧化活性的測(cè)定由圖14可知，流蘇花黃酮的質(zhì)量對(duì)Fe2+引發(fā)的卵磷脂脂質(zhì)體過氧化有抑制作用，隨著流蘇花黃酮質(zhì)量濃度的增加抑制率增強(qiáng)，具有較強(qiáng)的的抗脂質(zhì)體過氧化能力。

3　結(jié)論

通過單因素實(shí)驗(yàn)和Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及響應(yīng)面分析法，采用乙醇-水體系超聲輔助提取對(duì)流蘇花中的黃酮提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，得到的最佳提取條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)65%，液料比37∶1 mL/g，超聲時(shí)間40 min，水浴溫度54℃，在此條件下，總黃酮得率為10.736%，與理論值吻合很好。超聲技術(shù)可以有效縮短提取時(shí)間、提高得率，降低提取溫度，在黃酮等活性物質(zhì)提取領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景。

流蘇花總黃酮對(duì)超氧陰離子、DPPH、羥基自由基等具有較好的清除能力，EC50分別為0.03831、0.02635和0.00567 mg/mL，并具有較好的抗脂質(zhì)體過氧化能力。流蘇花制作的“糯米花茶”在民間泡茶飲用，本實(shí)驗(yàn)對(duì)流蘇花中黃酮成分提取工藝和體外抗氧化活性進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)其抗氧化活性較強(qiáng)，可進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行深入的開發(fā)利用。

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Study on the extraction technology and antioxidant activity of total flavonoids from the flower of Chionanthus retusa

SUN Xian-ming，LI Xiao-fang，DENG Rui-xue，LIU Yi-qiong，HOU Xue-wen，XING Yong-peng，LIU Pu*
（Henan Engneering Techndogy Research Center for Funiu Mountain Wild Medicinal Source，Chemical Engineering& Pharmaceutical College，Henan University of Science and Technology，Luoyang 471023，China）

To explore the optimal ultrasonic-assisted extraction conditions of total flavonoids from the flower of Chionanthus retusa Lindl et Paxt.，and evaluate the antioxidant activity.Based on the single-factor tests，the ultrasonic extraction conditions of total flavonoids from the flower of C.retusa Lindl et Paxt.were optimized by response surface methodology in order to increase the extraction rate of total flavonoids.Meanwhile，the antioxidant activity of total flavonoids was assessed by scavenging assays of hydroxyl，superoxide anion free radicals，DPPH radical and resisting lipid peroxidation.The optimal extraction conditions of total flavonoids were ethanol concentration of 65%，liquid-material ratio of 37∶1 mL/g，extraction time of 40 min and extraction temperature of 54℃.Under the optimal conditions，the maximum extraction rate of total flavonoids was 10.736%.Extracted total flavonoids had strong scavenging capacity on hydroxyl，superoxide anion free radicals and DPPH radical，and strong resisting lipid peroxidation in a dose-dependent manners.Response surface methodology was applicable for the optimization of ultrasonic extraction of total flavonoids from the flower of C.retusa Lindl et Paxt.The total flavonoids from the flower of C.retusa Lindl et Paxt.had strong antioxidant capacity.These investigations will be theoretical reference for further development and utilization of the flower of C.retusa Lindl et Paxt.

flower of Chionanthus retusa；total flavonoids；ultrasonic extraction；response surface optimization；antioxidant activity

TS201.1

B

1002-0306（2015）16-0266-07

10.13386/j.issn1002-0306.2015.16.046

2014－12－22

孫鮮明（1956-），大學(xué)本科，副教授，主要從事液相分析方法方面的研究，E-mail：sxm_1956@126.com。

劉普（1978-），博士，副教授，主要從事天然功能食品研究與開發(fā)方面的研究，E-mail：liuputju@163.com。

河南省重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目（122102310274）。