響應(yīng)面分析法優(yōu)化假單胞菌產(chǎn)絮凝劑的培養(yǎng)條件

何建玲，楊雙雙，2，黃金田，*，周冰倩，3，董　　銳

（1.鹽城工學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，江蘇鹽城224051；2.安徽理工大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院，安徽淮南232000；3.常州大學(xué)材料科學(xué)與工程，江蘇常州213000）

響應(yīng)面分析法優(yōu)化假單胞菌產(chǎn)絮凝劑的培養(yǎng)條件

何建玲1，楊雙雙1，2，黃金田1，*，周冰倩1，3，董銳1

（1.鹽城工學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，江蘇鹽城224051；2.安徽理工大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院，安徽淮南232000；3.常州大學(xué)材料科學(xué)與工程，江蘇常州213000）

從油漆廢水中分離得到一株具有較高絮凝活性的菌種FL-1，通過(guò)16sDNA凝膠電泳圖鑒定菌種的種類為門多薩假單胞菌。然后采用單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，分別考察了培養(yǎng)基的初始pH、碳氮源及溫度對(duì)絮凝效果的影響。最后用響應(yīng)面設(shè)計(jì)法對(duì)這四因素進(jìn)行優(yōu)化，得到最佳的培養(yǎng)條件為葡萄糖26.5 g/L，（NH4）2SO40.5 g/L，初始pH7.0，溫度31℃。在此條件下的絮凝率的理論值為96.55%，實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證值為95.19%。實(shí)驗(yàn)值與響應(yīng)面預(yù)測(cè)值擬合情況良好，則說(shuō)明通過(guò)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)FL-1培養(yǎng)條件的優(yōu)化是有效的。

響應(yīng)面法，假單胞菌，微生物絮凝劑，培養(yǎng)條件

微生物絮凝劑（Microbial flocculent，簡(jiǎn)稱MBF）是由微生物本身產(chǎn)生且具有高效的絮凝活性的天然高分子物質(zhì)，具有高效、無(wú)毒、易降解、無(wú)二次污染、應(yīng)用范圍廣、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，因而被人們廣泛應(yīng)用于污水處理、醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域［1］。微生物絮凝劑的主要化學(xué)成分有糖蛋白、蛋白質(zhì)、多糖和纖維素等物質(zhì)。在20世紀(jì)70年代日本學(xué)者在研究肽酸酯生物降解時(shí)發(fā)現(xiàn)了微生物的培養(yǎng)液具有絮凝作用，因此研究開(kāi)發(fā)出了微生物絮凝劑［2］。二十世紀(jì)九十年代，日本倉(cāng)根隆一郎等從日本的旱田土壤中分離篩選出一株對(duì)膨脹性污泥等有絮凝的菌S-1［3-4］。我國(guó)對(duì)微生物絮凝劑的研究起步相對(duì)較晚，主要是針對(duì)絮凝劑產(chǎn)生菌的篩選分離和培養(yǎng)條件進(jìn)行研究［5］。甘莉等［6］分別對(duì)培養(yǎng)基初始pH、培養(yǎng)基的組成、溫度和通氣量等條件進(jìn)行了考察，得出適合該菌種產(chǎn)生絮凝劑的最適條件。目前微生物絮凝劑的研究還處于實(shí)驗(yàn)室階段，工業(yè)應(yīng)用的還不多，所以在未來(lái)有很大的發(fā)展前景［2］。

響應(yīng)面法（Response surface methodology，簡(jiǎn)稱RSM）是一種數(shù)學(xué)方法與統(tǒng)計(jì)方法相結(jié)合，對(duì)多個(gè)影響變量進(jìn)行建模和分析的方法，最終確定出最優(yōu)的條件。目前響應(yīng)面法已經(jīng)廣泛的應(yīng)用于化工、生物、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域［7］。本實(shí)驗(yàn)是在已經(jīng)獲得較好的微生物絮凝菌的基礎(chǔ)上，通過(guò)研究培養(yǎng)基的初始pH、碳氮源、溫度、接種量等對(duì)絮凝活性的影響，分別設(shè)計(jì)單因素實(shí)驗(yàn)、響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)，以絮凝劑發(fā)酵液的絮凝率為響應(yīng)值，對(duì)培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，最終得到最佳的培養(yǎng)條件。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

菌種江蘇韓一模塑有限公司的油漆廢水中篩選分離得到；分離/鑒定培養(yǎng)基牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，瓊脂15～20 g，蒸餾水1000 mL，pH7.0～7.2，121℃滅菌20 min；種子培養(yǎng)基牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，蒸餾水1000 mL，pH7.0～7.2，121℃滅菌20 min；發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖20 g，KH2PO42 g，K2HPO45 g，（NH4）2SO40.2 g，NaCl 0.1 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，尿素0.2 g，酵母膏0.5 g，蒸餾水1000 mL，pH7.0～7.2，115℃滅菌20 min。

SW-CJ-1F型超凈工作臺(tái)蘇州凈化設(shè)備有限公司；SHP-160生化培養(yǎng)箱上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司；AUY220型電子天平日本SHIMADZU公司；20～200 μL、100～1000 μL移液槍德國(guó)Eppendrof公司；LDZX-50KBS型立式高壓蒸汽滅菌器上海申安醫(yī)療器械廠；CT15RT型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)上海天美科學(xué)儀器有限公司；HYG-A型全溫?fù)u瓶柜太倉(cāng)市強(qiáng)樂(lè)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；UV752N型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上海佑科儀器儀表有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1絮凝率的測(cè)定在150 mL錐形瓶中加入50 mL 4 g/L的高嶺土懸濁液，用1 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8左右，在加入1%CaCl2溶液作為助凝劑，搖勻后，加入2 mL發(fā)酵液，快速振蕩1 min后靜置10 min，用移液槍吸取液面下2 cm處上清液，在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上測(cè)定波長(zhǎng)在550 nm處的吸光度（OD550nm）。以等量蒸餾水代替發(fā)酵液作為對(duì)照。絮凝率的計(jì)算公式如下：

絮凝率（%）=（A-B）/A×100

其中，A—空白上清液的吸光度；B—樣品上清液的吸光度［8］。

1.2.2生長(zhǎng)曲線的測(cè)定取待測(cè)的發(fā)酵液在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上測(cè)定波長(zhǎng)在600 nm處的吸光度（OD600nm），空白樣為未接菌株的發(fā)酵液，測(cè)得的OD600nm即為生長(zhǎng)值［9］。

1.2.3菌種的分離純化100 mL種子培養(yǎng)基裝入250 mL三角瓶中，滅菌后在無(wú)菌環(huán)境下將取回來(lái)的廢水用移液槍吸取100 μL接種于三角瓶中，37℃恒溫?cái)U(kuò)大培養(yǎng)24 h后，然后將培養(yǎng)液分別稀釋到10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6倍，再將各個(gè)稀釋后的菌懸液涂布于分離培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)24 h后觀察。根據(jù)菌落的形態(tài)，挑出菌落完成初步分離。再將挑出的各個(gè)菌接種于種子培養(yǎng)基，37℃恒溫培養(yǎng)24 h后，對(duì)各個(gè)菌的培養(yǎng)液稀釋并進(jìn)行劃線分離。這樣反復(fù)培養(yǎng)劃線對(duì)菌進(jìn)行純化，最后得到單菌落保存在分離培養(yǎng)基中［10］。

1.2.4菌種的篩選將分離出來(lái)的菌接種于種子培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)24 h后，再將菌種子液按3%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中30℃培養(yǎng)72 h后，在4 g/L高嶺土懸濁液中加入4%的量發(fā)酵液測(cè)定絮凝率，篩選出絮凝率較大的菌株。

1.2.5菌種的鑒定觀察菌落表面形態(tài)、革蘭氏染色，并且通過(guò)上海生工測(cè)定16sDNA凝膠電泳圖鑒定菌種的種類［11］。

1.2.6單因素實(shí)驗(yàn)

1.2.6.1培養(yǎng)基的初始pH取250 mL的錐形瓶裝入100 mL的發(fā)酵培養(yǎng)液，然后用1 mol/L NaOH溶液或HCl溶液將pH分別調(diào)節(jié)到2、3、4、5、6、7、8、9、10，滅菌冷卻后，在無(wú)菌條件下接入3%的FL-1菌，在恒溫?fù)u床上30℃、160 r/min培養(yǎng)72 h，測(cè)定相對(duì)應(yīng)培養(yǎng)液的絮凝活性，以不接菌的發(fā)酵液作對(duì)照，從而確定最佳的初始pH。

1.2.6.2培養(yǎng)基中的碳源在確定最佳pH的基礎(chǔ)上，按20 g/L的量加入D-果糖、蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉、α-乳糖代替培養(yǎng)基中的碳源。在無(wú)菌條件下，不同的碳源培養(yǎng)基中接入3%菌種，30℃、160 r/min培養(yǎng)72 h，測(cè)定對(duì)應(yīng)培養(yǎng)液的絮凝活性，以不接菌種的發(fā)酵液作對(duì)照，進(jìn)而確定最佳碳源。

1.2.6.3培養(yǎng)基中的氮源在確定最佳初始pH和碳源的基礎(chǔ)上，不改變發(fā)酵培養(yǎng)基中其他成分的情況下，分別按0.4 g/L硝酸銨、0.4 g/L氯化銨、0.2 g/L硫酸銨、10 g/L蛋白胨、0.2 g/L尿素、0.5 g/L酵母膏的量代替發(fā)酵培養(yǎng)基中的氮源。在無(wú)菌的條件下，接入3%的FL-1菌種于含100 mL培養(yǎng)基的250 mL錐形瓶中，30℃、160 r/min培養(yǎng)72 h，測(cè)定對(duì)應(yīng)培養(yǎng)液的絮凝活性，以不接菌種的發(fā)酵液作對(duì)照，進(jìn)而確定最佳氮源。

1.2.6.4培養(yǎng)溫度在培養(yǎng)基初始pH和培養(yǎng)基成分不變的情況下，將溫度分別調(diào)為25、30、35、37、40、45℃，觀察其生長(zhǎng)和絮凝情況來(lái)確定最佳溫度。

1.2.7培養(yǎng)條件的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)根據(jù)上述單因素的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，對(duì)其進(jìn)行四因素三水平的響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)。因素與水平的編碼見(jiàn)表1，并運(yùn)用軟件Design-Expert.V8.0.6進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)以及數(shù)據(jù)分析，最終確定各影響因子對(duì)絮凝活性的影響程度以及最佳的培養(yǎng)條件。

表1　因素水平編碼表Table 1　Factors and levels of response surface experiments

2　結(jié)果與分析

2.1菌種的鑒定結(jié)果

從油漆廢水中分離篩選得到一株具有較高絮凝活性的菌株，對(duì)其鑒定結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1觀察可知，F(xiàn)L-1為白色不透明凸起狀菌落，表面光滑，邊緣整齊，有粘性，革蘭氏染色為陰性。

圖1　FL-1菌落形態(tài)Fig.1　Colony of FL-1

采用RT-PCR對(duì)所分離細(xì)菌的16 SrDNA進(jìn)行擴(kuò)增，用于菌種鑒定。凝膠電泳結(jié)果見(jiàn)圖2。根據(jù)16 SrDNA測(cè)序結(jié)果可以判斷本文所分離的細(xì)菌與門多薩假單胞菌Pseudomonas mendocina LMG（GenBank序列號(hào)為Z76664）的置信度達(dá)到96%，因此，初步確定菌株FL-1屬于Pseudomonas mendocina，命名為P.mendocina FL-1。

圖2　FL-1菌株的16SrDNA凝膠電泳圖Fig.2　Gel of 16SrDNA of strain FL-1

2.2單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1培養(yǎng)基的初始pH由圖3可知，菌FL-1在pH7～9生長(zhǎng)較好，絮凝率也較高，絮凝率分別達(dá)到92.4%、92.8%、93%，說(shuō)明FL-1適合在pH為7、8、9的范圍下生長(zhǎng)，此時(shí)酶促反應(yīng)速率快，生長(zhǎng)和代謝速率也大。pH為7、8、9時(shí)，絮凝率差異不大，考慮培養(yǎng)基的成本和環(huán)境，選擇pH為7作為培養(yǎng)基的初始pH。

2.2.2培養(yǎng)基中的碳源碳源為微生物的生長(zhǎng)代謝提供能量及合成有機(jī)物質(zhì)的骨架。不同的微生物所能產(chǎn)生的酶系不同，所利用的碳源也不同。由圖4可知，菌FL-1對(duì)碳源的生長(zhǎng)較為挑剔，對(duì)葡萄糖和果糖能有效的利用，并且葡萄糖和果糖所產(chǎn)菌的絮凝率分別達(dá)到91.1%和89%，而其他均低于55%，因此選用葡萄糖作為最佳碳源。

圖3　培養(yǎng)基初始pH對(duì)菌FL-1的生長(zhǎng)及絮凝率的影響Fig.3　Effect of initial pH on the growth and flocculating activity

圖4　不同碳源對(duì)菌的生長(zhǎng)及絮凝率的影響Fig.4　Effect of carbon sources on the growth and flocculating activity

2.2.3培養(yǎng)基中的氮源氮源分為有機(jī)和無(wú)機(jī)氮源。由圖5可見(jiàn)，對(duì)于生長(zhǎng)情況而言，無(wú)機(jī)氮源氯化銨、硫酸銨和有機(jī)氮源尿素的生長(zhǎng)情況較好；對(duì)于絮凝情況而言，絮凝效果較好的是無(wú)機(jī)氮源硫酸銨和有機(jī)氮源蛋白胨和尿素，絮凝率分別是89.2%、93.6%、83.7%。因此鑒于培養(yǎng)基的成本，可以考慮混合氮源為硫酸銨、蛋白胨、尿素的組合。

2.2.4培養(yǎng)溫度由圖6可知，當(dāng)溫度為25℃時(shí)，菌生長(zhǎng)較緩慢；當(dāng)溫度達(dá)到45℃時(shí)，高溫導(dǎo)致菌體內(nèi)代謝過(guò)程中的活性酶的活性降低，導(dǎo)致菌體不能利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)生成自身生長(zhǎng)所需的基礎(chǔ)物質(zhì)，自然也就不能產(chǎn)生絮凝劑；當(dāng)溫度在30～40℃時(shí)，發(fā)酵液在不同時(shí)間對(duì)高嶺土懸液的絮凝效果也不同，但相比25℃和45℃生長(zhǎng)狀況和絮凝情況較好，并且30℃、72 h時(shí)絮凝率達(dá)到91.4%。綜合考慮溫度、時(shí)間和設(shè)備的要求，菌FL-1的發(fā)酵條件選為30℃下培養(yǎng)72 h。

2.3響應(yīng)面分析及最佳培養(yǎng)基含量確定

根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選取葡萄糖、（NH4）2SO4、pH以及溫度四個(gè)因素進(jìn)行響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以葡萄糖20 g/L、（NH4）2SO40.5 g/L、pH7、溫度30℃為實(shí)驗(yàn)中心點(diǎn)，其余成分的添加量保持不變，采用響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)優(yōu)化培養(yǎng)條件，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及數(shù)據(jù)分析結(jié)果見(jiàn)表2。

通過(guò)二次模型回歸系數(shù)的計(jì)算，得到如下方程來(lái)表征四個(gè)因素對(duì)絮凝率的影響。

Y=-604.5085+7.96168X1+36.206X2+120.14317X3+ 10.22957X4+1.145X1X2-0.0055X1X3-0.02385X1X4+ 6.24X2X3-0.138X2X4-0.19X3X4-0.14591X12-111.88933X22-8.24058X32-0.13022X42

圖5　不同氮源對(duì)菌的生長(zhǎng)及絮凝率的影響Fig.5　Effect of nitrogen sources on the growth and flocculating activity

圖6　不同溫度對(duì)菌的生長(zhǎng)和絮凝率的影響Fig.6　Effect of temperature on the growth and flocculating activity

表2　響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2　Response surface experimental design and results

響應(yīng)面分析中對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行擬合的二次模型方差分析見(jiàn)表3。其中模型p值＜0.0001，說(shuō)明模型極顯著。且其決定系數(shù)R2=0.9988、調(diào)整系數(shù)R2Adj=0.9976、預(yù)測(cè)系數(shù)R2pred=0.9956，說(shuō)明模型擬合度高，即絮凝率的實(shí)測(cè)值和預(yù)測(cè)值之間具有很好的擬合度，實(shí)驗(yàn)誤差小，可以用作菌FL-1絮凝效果的理論預(yù)測(cè)。由表3也可知各因素的顯著性。模型中因素X1、X2、X3、X4、X1X2、X1X4、X2X3、X3X4、X12、X22、X32、X42對(duì)絮凝率的影響極顯著（p＜0.01）。一次項(xiàng)中各因素對(duì)絮凝率的影響顯著性大小順序是X1（葡萄糖）＞X3（pH）＞X4（溫度）＞X2［（NH4）2SO4］。各響應(yīng)面立體分析圖見(jiàn)圖7～圖10。

圖7是培養(yǎng)基中葡萄糖與硫酸銨投加量的交互作用對(duì)絮凝率的影響，其中初始pH與溫度均取7和30℃。由圖7可知，隨著葡萄糖投加量的增加，（NH4）2SO4投加量一定的條件下，絮凝率隨著葡萄糖投加量的增加呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，可見(jiàn)葡萄糖對(duì)絮凝率影響很大；葡萄糖投加量一定時(shí)，絮凝率隨著（NH4）2SO4投加量的增加也呈現(xiàn)先升高后降低的現(xiàn)象，但是變化幅度沒(méi)有葡萄糖大。結(jié)合表3結(jié)果得到兩個(gè)因素的交互影響極顯著（p＜0.01）。在圖7中，響應(yīng)值有一個(gè)高點(diǎn)，即葡萄糖投加量為30 g/L左右，（NH4）2SO4投加量在0.5 g/L左右，絮凝率達(dá)到最大。

表3　實(shí)驗(yàn)各因素主效應(yīng)分析結(jié)果Table 3　Analysis of major effects for various factors of experiment

圖7　葡萄糖與硫酸銨的響應(yīng)面圖Fig.7　Response surface stereogram versus glucose and（NH4）2SO4

圖8　pH和硫酸銨的響應(yīng)面圖Fig.8　Response surface stereogram versus pH and（NH4）2SO4

圖9　葡萄糖和溫度的響應(yīng)面圖Fig.9　Response surface stereogram versus glucose and temperature

圖10　溫度和pH的響應(yīng)面圖Fig.10　Response surface stereogram versus temperature and pH

圖8是pH和硫酸銨投加量交互作用對(duì)絮凝率的影響，其中葡萄糖與溫度取30 g/L和30℃。從圖8上可以看出，當(dāng)一個(gè)因素不變時(shí)，絮凝率均隨著另一個(gè)因素的增加先升高再降低。說(shuō)明pH和（NH4）2SO4投加量交互作用明顯，絮凝率也呈現(xiàn)先升高再降低的趨勢(shì)，中間水平存在一個(gè)最高點(diǎn)。因此，當(dāng)pH為7左右，（NH4）2SO4投加量控制在0.45～0.55 g/L，即可獲得較高的絮凝率。

圖9是葡萄糖投加量和溫度交互作用對(duì)絮凝率的影響，其中（NH4）2SO4投加量和pH取0.5 g/L和7。當(dāng)溫度一定時(shí)，絮凝率隨著葡萄糖投加量的增加先升高再降低；而當(dāng)葡萄糖投加量一定時(shí)，絮凝率也隨著溫度的升高呈現(xiàn)先升再降的過(guò)程，但比較兩個(gè)因素，葡萄糖的影響更大。兩個(gè)因素存在交互作用，絮凝率在葡萄糖投加量為30 g/L，溫度為29～33℃之間能達(dá)到最大值。

圖10是溫度和pH交互作用對(duì)絮凝率的影響，其中葡萄糖與（NH4）2SO4投加量為30 g/L和0.5 g/L。絮凝率隨著溫度和pH的增加均呈現(xiàn)先升高再降低的現(xiàn)象，說(shuō)明兩個(gè)因素存在一定的交互作用。絮凝率也在二者的交互作用中，在溫度29～31℃，pH6.5～7.5之間可以達(dá)到最高點(diǎn)。

2.4參數(shù)優(yōu)化結(jié)果及驗(yàn)證

對(duì)四個(gè)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，參數(shù)取值范圍是：葡萄糖20～40 g/L，（NH4）2SO40.25～0.75 g/L，pH6～8，溫度25～35℃，絮凝率為60.2%～100%。優(yōu)化后，在葡萄糖26.45 g/L，（NH4）2SO40.48 g/L，pH7.1，溫度31.42℃條件下，預(yù)測(cè)的絮凝率高達(dá)96.55%。根據(jù)綜合考慮及對(duì)設(shè)備和技術(shù)的要求，得到優(yōu)化后的培養(yǎng)條件為葡萄糖26.5 g/L，（NH4）2SO40.5 g/L，pH7.0，溫度31℃，在此條件下進(jìn)行驗(yàn)證，測(cè)得絮凝率達(dá)到95.19%，比預(yù)測(cè)值低1.36%。說(shuō)明響應(yīng)面法的得到的最佳培養(yǎng)條件的數(shù)據(jù)是真實(shí)可靠的，因此響應(yīng)面分析法具有可行性。

3　結(jié)論

鑒定了絮凝劑產(chǎn)生菌FL-1為門多薩假單胞菌，并研究了其在不同的培養(yǎng)條件下的產(chǎn)絮凝劑的能力，以生長(zhǎng)及絮凝率為指標(biāo)，確定培養(yǎng)基的初始pH、碳氮源及溫度；通過(guò)爬坡實(shí)驗(yàn)、響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)，得到的最優(yōu)培養(yǎng)條件為葡萄糖26.5 g/L，（NH4）2SO40.5 g/L，pH7，溫度31℃，在此條件下的絮凝率的理論值為96.55%，實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證值為95.19%。

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Optimal culture conditions for Pseudomonas flocculant using response surface analysis

HE Jian-ling1，YANG Shuang-shuang1，2，HUANG Jin-tian1，*，ZHOU Bing-qian1，3，DONG Rui1
（1.Institute of Chemical and Biological Engineering，Yancheng Institute of Technology，Yancheng 224051，China；2.Institute of Chemical Engineering，Anhui University of Science and Technology，Huainan 232000，China；3.Institute of Materials Science and Engineering，Changzhou University，Changzhou 213000，China）

FL-1 bacterium was isolated from waste water，it had high flocculating activity.It was identified as Pseudomonas mendocina by 16sDNA gel electrophoresis figure.Then single factor experiments were adopted to optimize the cultural conditions，including pH，arbon nitrogen source and temperature.At last，response surface analysis was used to optimize above mentioned four factors.The optimum culture conditions were determined as follows：initial pH of 7.0，glucose concentration of 26.5 g/L，（NH4）2SO4concentration of 0.5 g/L，cultivating temperature of 31℃.Under this culture conditions，the theoretical value of the flocculation rate was 96.55%，and the test value was 95.19%.These results indicated that the experimental results were totally in accordance with the predictive results of response surface analysis which was a valid method to optimize the culture conditions of FL-1.

response surface analysis；Pseudomonas sp；microbial flocculant；culture conditions

TS201.2

A

1002-0306（2015）16-0183-06

10.13386/j.issn1002-0306.2015.16.029

2014－12－08

何建玲（1963-），女，碩士，副教授，研究方向：應(yīng)用化學(xué)，E-mail：hjlyc@126.com。

黃金田（1957-），男，本科，教授，研究方向：海洋生態(tài)學(xué)，E-mail：hjt@ycit.cn。

蘇北科技發(fā)展計(jì)劃——科技富民強(qiáng)縣項(xiàng)目（BN2014049）。