白念珠菌對(duì)人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系產(chǎn)生腫瘤壞死因子α、活化信號(hào)分子p38MAPK的影響

段志敏 杜蕾蕾 曾榮 沈永年 胡素泉 劉維達(dá) 陳青 李岷

·論著·

白念珠菌對(duì)人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系產(chǎn)生腫瘤壞死因子α、活化信號(hào)分子p38MAPK的影響

段志敏 杜蕾蕾 曾榮 沈永年 胡素泉 劉維達(dá) 陳青 李岷

目的 探討白念珠菌對(duì)人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系（THP-1細(xì)胞系）分泌腫瘤壞死因子α（TNF-α）和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子p38絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）激活的影響。方法 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析105、106CFU/ml滅活白念珠菌及陽(yáng)性刺激物脂多糖刺激THP-1細(xì)胞1、3、6 h后TNF-α mRNA表達(dá)水平變化。40 μg/L地塞米松預(yù)先與THP-1細(xì)胞共培養(yǎng)30 min后，再用106CFU/ml白念珠菌、脂多糖刺激6 h后檢測(cè)TNF-α mRNA表達(dá)水平。酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)白念珠菌刺激THP-1細(xì)胞24 h后TNF-α分泌量。免疫印跡法分析白念珠菌體外作用THP-1細(xì)胞30 min、1 h后p38MAPK和磷酸化p38MAPK的水平。結(jié)果 105CFU/ml白念珠菌、106CFU/ml白念珠菌、脂多糖刺激THP-1細(xì)胞組以及空白對(duì)照組TNF-α mRNA表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=110.98，P<0.001）；白念珠菌刺激 1、3、6 h 之間差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=701.680，P<0.001），隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，THP-1細(xì)胞TNF-α mRNA水平增高，呈時(shí)間依賴(lài)效應(yīng)。106CFU/ml白念珠菌刺激THP-1細(xì)胞后24 h，TNF-α蛋白水平（6385.70±533.99 ng/L）較空白對(duì)照組（147.10±0.53 ng/L）明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。106CFU/ml白念珠菌作用于THP-1細(xì)胞30、60 min后磷酸化p38MAPK蛋白水平也明顯升高。40 μg/L地塞米松預(yù)先與THP-1細(xì)胞共培養(yǎng)30 min后，再以106CFU/ml白念珠菌刺激6 h后TNF-α mRNA表達(dá)水平（3.77±0.62）較未用地塞米松組（208.50±10.50）明顯降低，地塞米松可阻斷白念珠菌上調(diào)TNF-α mRNA水平。結(jié)論 人THP-1細(xì)胞體外與白念珠菌作用后激活信號(hào)分子p38MAPK并分泌TNF-α，參與抗念珠菌感染固有免疫反應(yīng)。

白色念珠菌；白血病，單核細(xì)胞，急性；腫瘤壞死因子α；p38絲裂原活化蛋白激酶類(lèi)；細(xì)胞系，腫瘤

念珠菌是常見(jiàn)的正常人體寄生菌群，但在宿主環(huán)境狀態(tài)發(fā)生變化時(shí)可從共生狀態(tài)轉(zhuǎn)化為致病狀態(tài)。侵襲性念珠菌病在接受免疫抑制治療的器官移植患者和癌癥患者中常見(jiàn)，念珠菌血癥在院內(nèi)感染中占第4位，死亡率可達(dá)15%~35%，而白念珠菌是最常見(jiàn)的致病念珠菌［1］。因此，研究人體的免疫反應(yīng)在抗白念珠菌過(guò)程中的作用極為重要。在宿主的固有免疫中，單核巨噬細(xì)胞對(duì)識(shí)別、清除入侵的白念珠菌起重要作用［2］。本研究旨在探討白念珠菌能否激活人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系（THP-1）的信號(hào)分子p38絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）及誘導(dǎo)腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor α，TNF-α）的分泌。

材料和方法

1.菌株、細(xì)胞和主要試劑：白念珠菌ATCC32354由中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)醫(yī)學(xué)真菌中心提供，56℃30 min水浴滅活后，配制成不同濃度菌懸液待用。THP-1細(xì)胞株購(gòu)自美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)（ATCC）。兔抗人p38MAPK和磷酸化p38MAPK抗體為美國(guó)Cell Signaling Technology公司產(chǎn)品；iTaq Universal SYBR Green Supermix為美國(guó)Bio-rad公司產(chǎn)品；PrimeScript RT Master Mix逆轉(zhuǎn)錄酶試劑盒為日本TaKaRa公司產(chǎn)品；TNF-α酶聯(lián)免疫吸附試劑盒為欣博盛公司產(chǎn)品；丙二醇甲醚醋酸酯（PMA）、脂多糖為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品；地塞米松為美國(guó)Invivogen公司產(chǎn)品。

2.細(xì)胞培養(yǎng)：人THP-1細(xì)胞用含10%胎牛血清、1%青鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基，于37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)、傳代。將細(xì)胞制備成105個(gè)/ml細(xì)胞懸液，接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板（每孔2 ml）及12孔細(xì)胞培養(yǎng)板（每孔1 ml），加入100 μg/L PMA刺激48 h后，加入不同濃度白念珠菌共培養(yǎng)。

3.實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR法檢測(cè)白念珠菌與THP-1細(xì)胞共孵育不同時(shí)間點(diǎn)TNF-α mRNA表達(dá)水平：105和 106CFU/ml白念珠菌與 105個(gè)/ml THP-1細(xì)胞共孵育，并設(shè)培養(yǎng)基空白對(duì)照組、陽(yáng)性刺激物100 μg/L脂多糖組、地塞米松抑制組（40 μg/L地塞米松預(yù)先與細(xì)胞共培養(yǎng)30 min）。設(shè)置多個(gè)白念珠菌與THP-1細(xì)胞共孵育時(shí)間點(diǎn)，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)，刺激1 h后TNF-α mRNA表達(dá)水平開(kāi)始升高，3 h后繼續(xù)升高，6 h后表達(dá)水平達(dá)到最高，繼續(xù)延長(zhǎng)作用時(shí)間后TNF-α mRNA表達(dá)水平開(kāi)始降低。本實(shí)驗(yàn)選擇1、3、6 h作為觀察時(shí)間，地塞米松抑制組僅選擇刺激效果最強(qiáng)的6 h作為觀察時(shí)間。Trizol法抽提總RNA，按PrimeScript RT Master Mix逆轉(zhuǎn)錄酶試劑盒說(shuō)明書(shū)將1 μg總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。使用實(shí)時(shí)定量PCR儀7300型（美國(guó)ABI公司），采用Syber green法對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。以β肌動(dòng)蛋白作為內(nèi)參照，引物TNF-α及β肌動(dòng)蛋白由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物序列TNF-α上游 5′-CGAGTGACAAGCCTGTAGC-3′，下游 5′-GGTGTGGGTGAGGAGCACAT-3′，β 肌動(dòng)蛋白上游5′-TCTGGCACCACACCTTCTA-3′， 下 游 5′-AGGCATACAGGGACAGCAC-3′，反應(yīng)條件：預(yù)變性95 ℃ 10 min，變性 95 ℃ 15 s，退火 60 ℃ 30 s，延伸72 ℃ 30 s，循環(huán)數(shù) 40。采用 2-△△Ct法計(jì)算目的基因的變化水平，ΔCt=目的基因Ct值-β肌動(dòng)蛋白Ct值；樣品ΔΔCt=樣品ΔCt-對(duì)照組樣品ΔCt。以對(duì)照組目的基因表達(dá)量為1，2-△△Ct值即為實(shí)驗(yàn)組目的基因較對(duì)照組目的基因表達(dá)的倍數(shù)。

4.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：收集上清液后按照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)上清液中TNF-α含量。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)，106CFU/ml白念珠菌刺激THP-1細(xì)胞后，上清液TNF-α含量升高更明顯。設(shè)置不同的刺激時(shí)間，發(fā)現(xiàn)刺激24 h后上清液TNF-α含量達(dá)到最高。本實(shí)驗(yàn)選擇24 h作為觀察時(shí)間。

5.Western印跡法：收集與白念珠菌菌懸液共培養(yǎng)的THP-1細(xì)胞，裂解細(xì)胞，提取總蛋白。等量蛋白的不同樣品梯度SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，電轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯膜上。5%牛血清白蛋白（BSA）封閉2 h，兔抗人單克隆抗體4℃孵育過(guò)夜。TBST液（Tris-Buffered Saline Tween-20）洗膜3次后，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG第二抗體反應(yīng)2 h，TBST液洗膜3次，Supersignal試劑顯色發(fā)光，檢測(cè)p38MAPK和磷酸化p38MAPK的水平。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)，106CFU/ml白念珠菌刺激THP-1細(xì)胞后磷酸化p38MAPK的水平升高更明顯。設(shè)置不同的刺激時(shí)間發(fā)現(xiàn)，刺激30 min后磷酸化p38MAPK的水平開(kāi)始升高，刺激1 h后達(dá)到最高。

6.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示。不同時(shí)間不同組別間或不同組別不同處理間TNF-α mRNA表達(dá)水平的比較采用雙因素方差分析；不同組別間TNF-α蛋白含量的比較采用單因素方差分析，并采用LSD-t檢驗(yàn)對(duì)不同處理因素間進(jìn)行兩兩比較。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.白念珠菌對(duì)THP-1細(xì)胞TNF-α mRNA水平的影響：刺激后 1、3、6 h，經(jīng)雙因素方差分析，不同濃度白念珠菌組、脂多糖組、空白對(duì)照組TNF-α mRNA表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=110.983，P<0.001，v=3），白念珠菌刺激 1、3、6 h 之間差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=701.680，P<0.001，v=2），THP-1細(xì)胞TNF-α mRNA水平隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)增高，呈劑量依賴(lài)效應(yīng)。見(jiàn)表1。

2.白念珠菌對(duì)THP-1細(xì)胞TNF-α蛋白分泌的影響：106CFU/ml白念珠菌刺激后24 h，白念珠菌組、脂多糖組、空白對(duì)照組的上清液中TNF-α蛋白分別 為 （6385.70 ± 533.99）、（3212.06 ± 353.00）、（147.10±0.53）ng/L，經(jīng)單因素方差分析，3組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=8，F(xiàn)=71.25，P<0.01），白念珠菌組、脂多糖組分別與空白對(duì)照組比較，TNF-α蛋白分泌量均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值分別<0.01、<0.05）。

表1 白念珠菌對(duì)HTP-1細(xì)胞TNF-α mRNA表達(dá)水平的影響（2-△△Ct±s）

表1 白念珠菌對(duì)HTP-1細(xì)胞TNF-α mRNA表達(dá)水平的影響（2-△△Ct±s）

注：與空白對(duì)照組比較，a：P<0.05；b：P<0.001；c：P<0.01

組別 刺激后1 h 刺激后3 h 刺激后6 h 105CFU/ml白念珠菌組 3.65±1.15 8.27±0.28a169.93±12.35b 106CFU/ml白念珠菌組 7.22±0.78c10.79±0.84c205.10±12.13b脂多糖組（100 μg/L） 6.94±0.69c25.27±1.82b148.45±6.43b空白對(duì)照組 1.23±0.11 0.84±0.21 1.09±0.31

3.白念珠菌對(duì)THP-1細(xì)胞p38MAPK激活的影響：白念珠菌刺激后30 min，與空白對(duì)照組相比，磷酸化p38MAPK蛋白水平已升高，60 min時(shí)持續(xù)升高；而p38MAPK蛋白水平在刺激后30 min、1 h均沒(méi)有變化。見(jiàn)圖1。

4.地塞米松對(duì)白念珠菌上調(diào)TNF-α mRNA水平的影響：40 μg/L地塞米松預(yù)先與THP-1細(xì)胞共培養(yǎng)30 min后，再用106CFU/ml白念珠菌、脂多糖刺激6 h TNF-α mRNA表達(dá)水平見(jiàn)表2。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，3組是否采用地塞米松TNF-α mRNA表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3 320.025，P<0.01，v=2），地塞米松可阻斷白念珠菌上調(diào)TNF-α mRNA水平。

討 論

作為抗感染免疫反應(yīng)的第一道防線，固有免疫反應(yīng)在抗白念珠菌感染中發(fā)揮重要作用，其中起主要作用的細(xì)胞包括單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞。單核巨噬細(xì)胞對(duì)識(shí)別、清除入侵的白念珠菌起重要作用。本研究旨在探討THP-1在白念珠菌刺激后相關(guān)的信號(hào)分子p38 MAPK如何活化，是否誘導(dǎo)TNF-α的分泌，從而研究人體免疫反應(yīng)在抗白念珠菌過(guò)程中如何發(fā)揮作用。本實(shí)驗(yàn)將白念珠菌滅活后與THP-1細(xì)胞共培養(yǎng)，既保留了白念珠菌的基本形態(tài)，又避免真菌分泌的各種蛋白酶對(duì)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生影響，同時(shí)防止白念珠菌在與細(xì)胞共培養(yǎng)過(guò)程中繁殖太快，使細(xì)胞與真菌的比例易于量化。

圖1 白念珠菌對(duì)THP-1細(xì)胞p38MAPK激活的影響 1：空白對(duì)照組；2：加白念珠菌刺激30 min；3：加白念珠菌刺激1 h。加白念珠菌刺激后30 min，與空白對(duì)照組相比，磷酸化p38MAPK蛋白水平已有升高，60 min時(shí)持續(xù)升高；而p38MAPK蛋白水平在刺激后30 min、1 h則均沒(méi)有變化

表2 地塞米松對(duì)白念珠菌上調(diào)THP-1細(xì)胞TNF-α mRNA水平的影響（±s）

表2 地塞米松對(duì)白念珠菌上調(diào)THP-1細(xì)胞TNF-α mRNA水平的影響（±s）

注：a：與空白對(duì)照組比較，P<0.001；b：與未用地塞米松阻斷組比較，P<0.001

組別 未用地塞米松阻斷 地塞米松阻斷白念珠菌組 208.50±10.50a 3.77±0.62b脂多糖組 161.35±1.65a 6.20±1.93b空白對(duì)照組 1.09±0.07 0.89±0.27

有研究證明，TNF-α可促進(jìn)白細(xì)胞介素12（IL-12）、干擾素γ的產(chǎn)生，并介導(dǎo)樹(shù)突細(xì)胞向炎癥部位遷移，有助于清除新生隱球菌感染［3］。在體外建立的三維皮膚感染模型中，以TNF-α、IL-22同時(shí)刺激角質(zhì)形成細(xì)胞能夠有效阻止白念珠菌的生長(zhǎng)并保持表皮細(xì)胞的完整性［4］。TNF-α基因敲除小鼠對(duì)白念珠菌的易感性增加，與對(duì)照組相比中性粒細(xì)胞的募集及對(duì)白念珠菌的吞噬作用明顯減弱［5］。類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者在使用TNF-α單克隆抗體治療后出現(xiàn)原有真菌感染的復(fù)活或初發(fā)慢性真菌感染的報(bào)道逐漸增多［6］，且念珠菌感染在所有非結(jié)核桿菌感染中最常見(jiàn)［7］?？梢?jiàn)TNF-α在抗白念珠菌感染中發(fā)揮重要作用。

本研究初步發(fā)現(xiàn)，兩種濃度的白念珠菌作用THP-1細(xì)胞后，上調(diào)TNF-α mRNA水平均出現(xiàn)時(shí)間依賴(lài)效應(yīng)，在刺激3 h后出現(xiàn)上升，刺激6 h后105CFU/ml白念珠菌組mRNA水平為3 h的20.5倍，106CFU/ml組則升高19.0倍。本研究采用脂多糖（Toll樣受體4的配體）作為激活THP-1細(xì)胞的陽(yáng)性對(duì)照物，也能誘導(dǎo)出相同的時(shí)間依賴(lài)效應(yīng)，刺激6 h后TNF-α mRNA水平比3 h組上升3.9倍。106CFU/ml作用THP-1細(xì)胞24 h后，上清液中TNF-α含量較空白對(duì)照組明顯升高，表明白念珠菌不僅在mRNA水平誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞上調(diào)TNF-α的轉(zhuǎn)錄，而且在蛋白水平提高該因子的分泌量。

在機(jī)體受到病原微生物感染或組織損傷后，激活固有免疫細(xì)胞的細(xì)胞膜表面及胞質(zhì)內(nèi)的模式識(shí)別受體（RPR）。識(shí)別白念珠菌的RPR主要包括Toll樣受體（Toll-like receptor，TLR）和C型凝集素受體兩類(lèi)，TLR2、TLR4在機(jī)體抗白念珠菌感染中發(fā)揮重要作用，活化下游的MAPK，主要包括細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶（ERK）、p38及 c-Jun氨基末端激酶（JNK）幾個(gè)亞族；p38MAPK作為MAPK家族成員之一，其主要功能是將胞外的信號(hào)傳遞至胞內(nèi)，廣泛參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡等多種細(xì)胞功能調(diào)控［2］。p38MAPK被激活后可以使一些轉(zhuǎn)錄因子如轉(zhuǎn)錄活化因子1（ATF-1）、ATF-2、CREB 及 AP-1的絲氨酸和蘇氨酸位點(diǎn)磷酸化，使這些轉(zhuǎn)錄因子活化，從而調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)［7］。p38MAPK激活后能影響細(xì)胞因子的產(chǎn)生，有研究證實(shí)p38MAPK通路特異性阻斷劑SB203580可以抑制單核細(xì)胞IL-1和TNF的產(chǎn)生［8］。p38MAPK的激活可誘導(dǎo)多種基因的表達(dá)，共同調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，是促進(jìn)TNF-α產(chǎn)生的重要活化分子。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，白念珠菌刺激后30 min，已出現(xiàn)p38MAPK蛋白磷酸化，60 min時(shí)p38MAPK磷酸化水平顯著升高，提示白念珠菌可誘導(dǎo)p38MAPK途徑出現(xiàn)活化，調(diào)節(jié)TNF-α等前炎癥因子的轉(zhuǎn)錄。

地塞米松是一種合成的糖皮質(zhì)激素，具有強(qiáng)大的抗炎活性。有實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明，地塞米松通過(guò)阻斷MAPK通路來(lái)抑制炎癥介質(zhì)基因的表達(dá)［9］。在本實(shí)驗(yàn)中，將人THP-1細(xì)胞與適當(dāng)濃度的地塞米松預(yù)先共培養(yǎng)30 min后，再用106CFU/ml白念珠菌、脂多糖刺激，TNF-α mRNA表達(dá)水平明顯減低，提示地塞米松可通過(guò)阻斷MAPK通路影響下游TNF-α的表達(dá)。

綜上所述，白念珠菌對(duì)人THP-1細(xì)胞刺激后可出現(xiàn)p38MAPK蛋白磷酸化，TNF-α在mRNA水平、蛋白水平表達(dá)量升高，并且在一定程度內(nèi)呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性、時(shí)間依賴(lài)性。表明人THP-1細(xì)胞體外與白念珠菌共培養(yǎng)后激活信號(hào)分子p38MAPK并分泌TNF-α，參與抗念珠菌感染固有免疫反應(yīng)。

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Effects ofCandida albicanson the expression of tumor necrosis factor-α and activation of the intracellular signaling molecule p38MAPK in a human acute monocytic leukemia cell line THP-1

Duan Zhimin*,Du Leilei,Zeng Rong,Shen Yongnian,Hu Suquan,Liu Weida,Chen Qing,Li Min.*Institute of Dermatology,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College;Jiangsu Key Laboratory of Molecular Biology for Skin Diseases and STIs,Nanjing 210042,China

ObjectiveTo investigate the effects ofCandida albicanson the expression of tumor necrosis factorα（TNF-α）and activation of the intracellular signaling molecule p38 mitogen-activated protein kinase（p38MAPK）in a human acute monocytic leukemia cell line THP-1.MethodsSome THP-1 cells were divided into several groupsin vitro:twoC.albicansgroups treated with 105CFU/ml and 106CFU/ml heat-killedC.albicansrespectively,a lipopolysaccharide （LPS）group treated with 100 μg/L LPS,a blank control group treated with RPMI 1640 medium,two dexamethasone-inhibited groups pretreated with 40 μg/L dexamethasone for 30 minutes followed by treatment with 106CFU/ml heat-killedC.albicansand LPS respectively.After treatment for 1,3 and 6 hours,real-time fluorescencebased quantitative PCR was performed to measure TNF-α mRNA expression in THP-1 cells in the above groups.Enzymelinked immunosorbent assay（ELISA）was conducted to determine the level of TNF-α protein in the supernatant of THP-1 cells treated with 106CFU/ml heat-killedC.albicans,100 μg/L LPS or RPMI 1640 medium（blank control group）for 24 hours.Western blot was performed to measure the protein expression of p38MAPK and phosphorylated p38MAPK in THP-1 cells after treatment with 106CFU/ml heat-killedC.albicansor RPMI 1640 medium （blank control group）for 30and 60 minutes.Statistical analysis was carried out by using two-way analysis of variance,one-way analysis of variance and the least significant difference（LSD）-ttest.ResultsSignificant differences were observed in the mRNA expression level of TNF-α among theC.albicansgroups,LPS group and blank control group （F=110.98,P<0.001）.The mRNA expression level of TNF-α in THP-1 cells increased over time in a time-dependent manner afterC.albicanstreatment,with significant differences among different time points （F=701.680,P<0.001）.Compared with the blank control group,both 106-CFU/mlC.albicansgroup and LPS group showed a significant increase in TNF-α protein expression（6385.70±533.99 ng/L and 3212.06±353.00 ng/L vs.147.10±0.53 ng/L,P<0.001 and 0.005,respectively）.An obvious increase was observed in the expression level of phosphorylated p38MAPK protein,but no significant changes were noted in that of p38MAPK protein,in THP-1 cells treated with 106CFU/mlC.albicansfor 30 and 60 minutes compared with the blank control group.The mRNA expression level of TNF-α significantly decreased in dexamethasonepretreated 106-CFU/mlC.albicansgroup and LPS group compared with those without dexamethasone pretreatment（3.77±0.62 vs.208.50±10.50,6.20±1.93 vs.161.35±1.65,bothP<0.001）.Conclusions Heat-killedC.albicanscan induce the activation of p38MAPK in and secretion of TNF-α by human THP-1 cells,which then participate in the innate immune response againstC.albicans.

Candida albicans;Leukemia,monocytic,acute;Tumor necrosis factor-alpha;p38 Mitogen-activated protein kinases;Cell line,tumor

s:Li Min,Email:minli08@gmail.com;Chen Qing,Email:qngchen@hotmail.com

作者單位：210042南京，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院皮膚病研究所，江蘇省皮膚性病分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（段志敏、杜蕾蕾、曾榮、沈永年、胡素泉、劉維達(dá)、李岷）；江蘇省血液中心（陳青）

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2015.08.004

國(guó)家自然科學(xué)基金（81371750、81101734）；江蘇省自然科學(xué)基金（BK2011128）；江蘇省“六大人才高峰”項(xiàng)目（2013-WSW-039、2013-WSW-090）；江蘇省“333 高層次人才培養(yǎng)工程”項(xiàng)目

李岷，Email：minli08@gmail.com；陳青，Email：qngchen@hotmail.com

2014-07-28）

（本文編輯：顏艷）