藏藥螃蟹甲苯乙醇苷對(duì)急性高原肺水腫大鼠的保護(hù)作用

欒飛，李茂星，周保柱，曹馨元，趙一，王先敏

隨著青藏鐵路的通車、國(guó)家西部大開(kāi)發(fā)戰(zhàn)略的實(shí)施以及國(guó)防建設(shè)的需要，越來(lái)越多的人員進(jìn)入高原地區(qū)。但是高原低壓低氧特殊環(huán)境導(dǎo)致的急性高原病嚴(yán)重威脅進(jìn)入高原人群的身體健康，其中約5%可出現(xiàn)高原肺水腫(high altitude pulmonary edema，HAPE)，如搶救不及時(shí)常危及生命[1]。近年來(lái)關(guān)于HAPE的研究表明，氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)在高原病的發(fā)病中發(fā)揮了重要作用[2-4]。

藏藥螃蟹甲來(lái)源于唇形科糙蘇屬多年生草本植物螃蟹甲(Phlomis younghusbandii Mukerjee)的干燥塊根，藏語(yǔ)稱“露木爾”，為藏醫(yī)習(xí)用藥材，至今已有千余年的使用歷史。螃蟹甲生長(zhǎng)于青藏高原東緣海拔3100～4800m的干燥山坡、草甸和河灘草地。本課題組前期研究表明，螃蟹甲中含有大量的苯乙醇苷類成分(phenylethanoid glycosides，PhGCs)[5-6]，主要包含毛蕊花糖苷和松果菊苷，廣泛用于治療感冒、咳嗽、瘡疥腫毒、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺炎、支氣管炎等疾病，具有良好的抗炎鎮(zhèn)痛活性[7-8]。相關(guān)藥理研究表明，毛蕊花糖苷與抗高原病有效成分紅景天苷具有相似的藥理作用，具有抗氧化、抗炎、抗缺氧、免疫調(diào)節(jié)、心肌保護(hù)、恢復(fù)毛細(xì)血管通透性以及改善記憶力等多種生物功效[9-11]。然而，螃蟹甲PhGCs成分用于預(yù)防和治療HAPE的相關(guān)藥理作用及機(jī)制目前未見(jiàn)報(bào)道，本研究模擬高原低壓低氧環(huán)境，建立實(shí)驗(yàn)性HAPE大鼠模型，觀察螃蟹甲PhGCs對(duì)其是否具有保護(hù)作用及潛在機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性Wistar大鼠70只，SPF級(jí)，體重180～220g，購(gòu)于蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)科，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXX(軍)2012-0020，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK(軍)2012-0029，飼養(yǎng)于蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)科，期間以標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，動(dòng)物自由攝食進(jìn)水，室溫19～24℃。

1.2 藥材與試劑 藏藥螃蟹甲藥材購(gòu)買于成都荷花池藥材市場(chǎng)，經(jīng)蘭州大學(xué)藥學(xué)院馬志剛教授鑒定為唇形科糙蘇屬多年生草本植物螃蟹甲Phlomis Younghusbandii Mukerjee的干燥塊根；地塞米松片(浙江仙琚制藥股份有限公司, 批號(hào)：140208)；滅菌注射用水(四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：M14110923)；Pierce BCA蛋白定量試劑盒(Thermo Scientific，批號(hào)：NC13227CH)；白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、酶聯(lián)免疫吸附(enzyme-linked immuno-sorbent assay，ELISA)測(cè)定試劑盒為R&D公司產(chǎn)品；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)試劑盒(批號(hào)：20141225)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)試劑盒(批號(hào)：20141226)、微量還原型谷胱甘肽(reduced glutathione，GSH)試劑盒(批號(hào)：20141222)均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；10×PBS磷酸鹽緩沖液(批號(hào)：20140807)、4%多聚甲醛(批號(hào)：20140416)購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司。其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 模擬高原低壓低氧動(dòng)物實(shí)驗(yàn)艙群(貴州風(fēng)雷航空軍械有限責(zé)任公司，DYC-9070)；全自動(dòng)熒光酶標(biāo)儀(SpectraMax? i3)；Sigma高速冷凍離心機(jī)(美國(guó)Sigma公司，3K15)；WD-9403F紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(惠普公司，美國(guó))；BP210S電子天平(德國(guó)Sartorius公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；真空干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司，BPZ-6033LC)；聚酰胺(20～40目，浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠，批號(hào)：20111228)；DK-8A型電熱恒溫水槽(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；Harris-80℃冷柜(Harris Manufacturing Co. Ltd)；光學(xué)顯微鏡(日本Nikon公司，E200)；組織切片機(jī)(德國(guó)美康公司，HM340E)；TB-718E型生物組織自動(dòng)包埋機(jī)(湖北泰雅電子技術(shù)有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 螃蟹甲苯乙醇苷的制備 稱取螃蟹甲藥材3.8kg，粉碎后加8倍量水煎煮2次，每次2h，靜置過(guò)濾，母液緩慢、勻速注入預(yù)先處理好的聚酰胺色譜柱中，紫外檢測(cè)流出液成分(無(wú)苯乙醇苷)，上樣完全后蒸餾水洗脫，至流出液無(wú)色后改用75%乙醇洗脫，流出液每100ml收集一份，監(jiān)測(cè)至無(wú)PhGCs流出，合并乙醇洗脫物，45℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，將濃縮液放置真空干燥箱內(nèi)，45℃減壓干燥，得PhGCs(以毛蕊花糖苷為對(duì)照品，在330nm采用外標(biāo)法測(cè)得毛蕊花糖苷含量為76%)。

1.4.2 動(dòng)物分組及模型建立[12]70只SPF級(jí)健康雄性Wistar大鼠在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)7d后，按體重隨機(jī)分為7組：常壓空白組(normoxia control group，NG)、常壓+PhGCs組(NG+400mg/kg PhGCs)、缺氧模型組(hypoxia model group，HG)、PhGCs高劑量組(PhGCs-H，400mg/kg PhGCs)、PhGCs中劑量組(PhGCs-M，200mg/kg PhGCs)、PhGCs低劑量組(PhGCs-L，50mg/kg PhGCs)、地塞米松組(Dex，4mg/kg Dex)，每組10只。各組均在SPF環(huán)境條件下飼養(yǎng)，NG組、HG組給予滅菌注射用水(1.0ml/100g)灌胃，剩余5組按照相應(yīng)劑量灌胃給藥，連續(xù)給藥3d后，第4天起除NG組及NG+PhGCs組外，其余各組均置于模擬海拔8000m(艙內(nèi)壓力35.9kPa，氧分壓7.5kPa)高原環(huán)境的人工實(shí)驗(yàn)艙中飼養(yǎng)72h，每天上午9：00以10m/s速度下降至4000m(艙內(nèi)壓力62.1kPa，氧分壓13.0kPa)，實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)艙，在艙里灌胃給藥，換食水和墊料，連續(xù)3d，每天給藥完畢后，將艙內(nèi)高度以10m/s的速度勻速上升到預(yù)定海拔8000m，在此期間動(dòng)物自由攝食及飲水。

1.4.3 動(dòng)物取材 各缺氧組大鼠完成預(yù)定缺氧時(shí)間后，將人工實(shí)驗(yàn)艙內(nèi)壓力降至4000m的高原環(huán)境，實(shí)驗(yàn)人員通過(guò)緩沖艙進(jìn)入艙內(nèi)，先眼眶采血，后斷頭處死大鼠，小心打開(kāi)胸腔，暴露肺組織，緩慢分離大鼠完整肺組織，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗肺組織3次，清除殘血，然后用濾紙吸干，再將肺組織分為左、右兩葉，右葉肺組織用4%多聚甲醛固定，用于HE染色觀察，左肺組織上葉用電子天平稱濕重后，錫箔紙包裹，用于測(cè)定肺組織含水量，左肺組織下葉－80℃低溫冰箱保存，用于其他指標(biāo)的檢測(cè)。

1.4.4 大鼠肺組織含水量檢測(cè) 肺組織含水量檢測(cè)采用干濕比重法。將錫箔紙包裹的肺組織，放入55℃的恒溫干燥烘箱中連續(xù)烘烤72h后至恒重，然后稱干重，達(dá)恒重后(兩次稱量干重誤差小于0.002g)，再根據(jù)Elliot公式計(jì)算肺組織含水量：大鼠肺組織含水量(%)=(濕重－干重)/濕重×100%。

1.4.5 大鼠肺組織病理學(xué)觀察 取右葉肺組織，用4%多聚甲醛溶液固定，固定組織應(yīng)充分展開(kāi)，切勿擠壓和冷凍，室溫固定3d后，切取肺組織塊2～4mm3，常規(guī)脫水，石蠟包埋、切片、HE染色后，在光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠肺泡間隔病變、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、血管瘀血狀況等組織病理學(xué)變化。

1.4.6 大鼠血清和肺組織中氧化應(yīng)激及炎癥相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè) 將采集的各組大鼠血樣在4℃下，3500r/min離心10min，分裝血清，–80℃冰箱凍存，用于血清中TNF-α、IL-1β含量的測(cè)定。取低溫冰箱保存的大鼠左肺組織下葉，準(zhǔn)確稱重，按重量(g):體積(ml)=1:9的比例，加入9倍體積預(yù)冷的PBS磷酸鹽緩沖液，在冰浴中充分勻漿，制備10%的肺組織勻漿液，3500r/min離心10min，分裝上清液，–80℃冰箱凍存，用于SOD、MDA、GSH、TNF-α、IL-1β的測(cè)定。將標(biāo)準(zhǔn)蛋白樣品和待測(cè)樣品加入一抗包被的96孔板，按ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟操作，最后測(cè)定450nm波長(zhǎng)處的吸光度(A)值，根據(jù)已知濃度標(biāo)準(zhǔn)蛋白的A值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算各待測(cè)樣品中的TNF-α和IL-1β含量。利用紫外分光光度計(jì)采用比色法測(cè)定樣品中SOD、MDA、GSH等氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化，具體步驟按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)均以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 PhGCs對(duì)急性HAPE大鼠肺組織含水量的影響與NG組比較，NG+PhGCs組大鼠肺組織含水量未見(jiàn)明顯變化，HG組大鼠肺組織含水量明顯增加(P＜0.05)。與HG組比較，PhGCs-H組、PhGCs-M組、PhGCs-L組及Dex組大鼠肺組織含水量均明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)，而PhGCs各劑量組與Dex組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

2.2 PhGCs對(duì)急性HAPE大鼠肺組織病理改變的影響 HE染色結(jié)果顯示，NG組及NG+PhGCs組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常，肺泡腔清晰，各級(jí)支氣管壁及肺泡間隔無(wú)水腫和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(圖1A、B)。HG組大鼠肺組織變化明顯，肺組織正常結(jié)構(gòu)消失，出現(xiàn)彌漫性肺水腫，肺泡間隔及肺泡壁明顯增寬，肺泡和間質(zhì)充血且有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡腔出現(xiàn)滲出液(圖1C)。PhGCs-H組、PhGCs-M組及PhGCs-L組大鼠肺組織水腫程度減輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，肺泡間隔及肺泡壁增寬較輕，肺間質(zhì)充血程度明顯減輕，且各級(jí)支氣管和肺泡腔滲出液也不同程度減少，保護(hù)作用明顯(圖1D、E、F)。Dex組大鼠間質(zhì)肺水腫程度較輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，肺泡間隔及肺泡壁增寬明顯減輕(圖1G)。

表1 PhGCs對(duì)急性HAPE大鼠肺組織含水量的影響，n=10)Tab.1 Effect of PhGCs on the lung water content in acute HAPE rats s, n=10)

表1 PhGCs對(duì)急性HAPE大鼠肺組織含水量的影響，n=10)Tab.1 Effect of PhGCs on the lung water content in acute HAPE rats s, n=10)

(1)P＜0.05 compared with NG group; (2)P＜0.05, (3)P＜0.01 compared with HG group

Group PhGCs dosage (mg/kg) Lung water content (%)NG 0 75.90±2.36 NG+PhGCs 400 75.13±1.51 HG 0 78.16±1.92(1)PhGCs-H 400 75.92±2.08(2)PhGCs-M 200 76.20±1.95(2)PhGCs-L 50 76.36±1.86(2)Dex 4 75.49±2.04(3)

2.3 PhGCs對(duì)急性HAPE大鼠肺組織中SOD、GSH活性及MDA含量的影響 與NG組比較，NG+PhGCs組大鼠肺組織中SOD、GSH活性及MDA含量未見(jiàn)明顯變化，HG組大鼠肺組織MDA含量明顯升高(P＜0.05)，SOD、GSH活性明顯降低(P＜0.01或P＜0.05)；與HG組比較，PhGCs-H組和Dex組大鼠肺組織MDA含量明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)，PhGCs-M組、PhGCs-L組和Dex組大鼠肺組織SOD活性均明顯升高(P＜0.05)；PhGCs-M組和Dex組大鼠肺組織GSH活性明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01，表2)。PhGCs各劑量組及Dex組肺組織中SOD、GSH活性和MDA含量比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 光鏡下肺組織病理學(xué)改變 (HE ×200)Fig.1 Histopathological changes of lung tissue observed under light microscopy (HE ×200)

表2 PhGCs對(duì)急性HAPE大鼠肺組織SOD、GSH活性及MDA含量的影響±s, n=10)Tab.2 Effect of PhGCs on the SOD, MDA and GSH of lung tissue in acute HAPE rats±s, n=10)

表2 PhGCs對(duì)急性HAPE大鼠肺組織SOD、GSH活性及MDA含量的影響±s, n=10)Tab.2 Effect of PhGCs on the SOD, MDA and GSH of lung tissue in acute HAPE rats±s, n=10)

(1)P＜0.05, (2)P＜0.01 compared with NG group; (3)P＜0.05, (4)P＜0.01 compared with HG group

Group Dosage (mg/kg) MDA (nmol/mg prot) SOD (U/mg prot) GSH (μmol/g prot)NG 0 2.07±0.57 7.13±1.25 2.70±0.89 NG+PhGCs 400 2.13±0.69 7.29±0.84 2.59±0.71 HG 0 2.73±0.78(1) 5.66±0.76(2) 2.04±0.41(1)PhGCs-H 400 2.04±0.62(3) 6.71±0.99(3) 2.79±0.50(3)PhGCs-M 200 2.33±0.58 6.65±0.79(3) 2.76±0.85(3)PhGCs-L 50 2.36±0.50 6.51±0.97(3) 2.15±0.56 Dex 4 1.98±0.41(4) 6.28±0.44(3) 2.59±0.21(4)

2.4 PhGCs對(duì)急性HAPE大鼠血清中IL-1β、TNF-α含量的影響 與NG組比較，NG+PhGCs組大鼠血清中IL-1β、TNF-α含量未見(jiàn)明顯變化，HG組大鼠血清中IL-1β、TNF-α的含量明顯升高(P＜0.01)；與HG組比較，PhGCs-H、PhGCs-M、PhGCs-L組及Dex組大鼠血清中IL-1β、TNF-α的含量明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)。PhGCs各劑量組及Dex組血清中IL-1β、TNF-α含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表3)。

2.5 PhGCs對(duì)急性HAPE大鼠肺組織中IL-1β、TNF-α含量的影響 與NG組比較，NG+PhGCs組大鼠肺組織中IL-1β、TNF-α含量未見(jiàn)明顯變化，HG組大鼠肺組織IL-1β、TNF-α含量明顯升高(P＜0.01或P＜0.05)。與HG組比較，PhGCs-H、PhGCs-M、PhGCs-L組及Dex組大鼠肺組織IL-1β含量明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)，PhGCs-H、PhGCs-M組及Dex組大鼠肺組織TNF-α的含量明顯降低(P＜0.01)。PhGCs各劑量組及Dex組肺組織中IL-1β、TNF-α含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表4)。

表3 PhGCs對(duì)急性HAPE大鼠血清中IL-1β、TNF-α含量的影響，n=10)Tab.3 Effect of PhGCs on the IL-1β and TNF-α of serum in acute HAPE rats(±s, n=10)

表3 PhGCs對(duì)急性HAPE大鼠血清中IL-1β、TNF-α含量的影響，n=10)Tab.3 Effect of PhGCs on the IL-1β and TNF-α of serum in acute HAPE rats(±s, n=10)

(1)P＜0.05, (2)P＜0.01 compared with NG group; (3)P＜0.05, (4)P＜0.01 compared with HG group

Group Dosage (mg/kg) IL-1β (pg/ml) TNF-α (ng/ml)NG 0 831.90±57.53 37.22±5.90 NG+PhGCs 400 842.63±60.52 36.75±3.63 HG 0 1015.69±97.21(1) 48.73±3.25(1)PhGCs-H 400 880.33±69.90(2) 39.30±3.99(4)PhGCs-M 200 894.99±45.12(2) 40.08±2.12(3)PhGCs-L 50 896.35±40.95(2) 40.65±3.82(3)Dex 4 834.74±94.54(2) 38.91±6.37(4)

表4 PhGCs對(duì)急性HAPE大鼠肺組織中IL-1β、TNF-α含量的影響±s, n=10)Tab.4 Effect of PhGCs on the IL-1β and TNF-α of lung tissue in acute HAPE rats±s, n=10)

表4 PhGCs對(duì)急性HAPE大鼠肺組織中IL-1β、TNF-α含量的影響±s, n=10)Tab.4 Effect of PhGCs on the IL-1β and TNF-α of lung tissue in acute HAPE rats±s, n=10)

(1)P＜0.05, (2)P＜0.01 compared with NG group; (3)P＜0.05, (4)P＜0.01 compared with HG group

Group Dosage (mg/kg) IL-1β (pg/ml) TNF-α (ng/ml)NG 0 1094.63±47.27 41.68±4.26 NG+PhGCs 400 1025.13±53.12 41.29±1.69 HG 0 1303.07±61.52(2) 49.50±4.21(1)PhGCs-H 400 1126.03±82.67(4) 42.46±1.72(3)PhGCs-M 200 1196.70±71.57(3) 44.09±1.62(3)PhGCs-L 50 1210.82±55.41(3) 47.09±1.44 Dex 4 1097.23±89.30(4) 42.77±1.46(3)

3 討 論

HAPE的發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜，目前認(rèn)為可能包括以下因素：缺氧引起肺動(dòng)脈壓增高以及血流動(dòng)力學(xué)改變；炎癥介質(zhì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮受損，氣血屏障通透性升高，大量液體進(jìn)入肺間質(zhì)；進(jìn)入肺間質(zhì)的液體不能被有效吸收，進(jìn)入肺泡，從而形成肺泡性肺水腫[13]。本實(shí)驗(yàn)中，我們采用大型低壓氧艙模擬海拔8000m的高原環(huán)境，缺氧暴露72h后建立實(shí)驗(yàn)性急性HAPE大鼠模型，HE染色觀察可見(jiàn)肺組織正常結(jié)構(gòu)消失，出現(xiàn)彌漫性肺水腫，肺泡間隔及肺泡壁明顯增厚，肺泡和間質(zhì)充血且有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡腔出現(xiàn)滲出液，肺組織含水量明顯增高，說(shuō)明HAPE大鼠模型制備成功。PhGCs各劑量組大鼠肺組織水腫程度減輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，肺泡間隔及肺泡壁增寬較輕，肺間質(zhì)充血程度明顯減輕，且各級(jí)支氣管和肺泡腔滲出液也不同程度減少，具有明顯的保護(hù)作用。

機(jī)體缺氧后，自由基損傷導(dǎo)致細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能破壞，是肺組織缺氧損傷的主要機(jī)制之一。正常情況下，自由基的產(chǎn)生與清除處于一種平衡狀態(tài)，使氧自由基的生成量不至于達(dá)到損傷組織的程度，然而機(jī)體清除氧自由基的能力是有限的，氧自由基產(chǎn)生過(guò)多時(shí)，即可造成組織損傷。機(jī)體缺氧時(shí)，MDA含量明顯升高，SOD、GSH活性明顯降低[14]。MDA是氧自由基和生物膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，其產(chǎn)生的量與氧自由基清除的量相平行，測(cè)定MDA可反映氧自由基的代謝情況，間接反映出細(xì)胞損傷的程度[15]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PhGCs可降低缺氧大鼠肺組織中MDA的含量，提高SOD和GSH酶活性，對(duì)HAPE大鼠表現(xiàn)出良好的抗氧化作用，推測(cè)PhGCs的抗氧化作用可能是通過(guò)重建體內(nèi)自由基產(chǎn)生與清除的平衡，從而起到保護(hù)作用。

在高海拔地區(qū)，由于肺等組織面對(duì)突然的低壓低氧應(yīng)激，可快速產(chǎn)生各種生理反應(yīng)[16]，對(duì)抗這種應(yīng)激發(fā)揮代償機(jī)制[17]，此過(guò)程勢(shì)必會(huì)損傷部分細(xì)胞器甚至細(xì)胞、組織(如線粒體自由基增多、細(xì)胞自噬、神經(jīng)元軸突受損等)，并產(chǎn)生一些細(xì)胞因子(如IL-1β、TNF-α等)，部分小分子最初發(fā)揮保護(hù)作用[18]，但炎癥因子的過(guò)表達(dá)可引起機(jī)體進(jìn)一步的損傷。TNF-α是全身炎癥反應(yīng)的起始因子，是激活細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)的主要介質(zhì)，在血液循環(huán)中出現(xiàn)最早，并迅速達(dá)到高峰，TNF-α一旦釋放很快引起次級(jí)因子IL-1β的大量產(chǎn)生。機(jī)體暴露于高原環(huán)境時(shí)，肺組織出現(xiàn)水腫并伴有全身性炎癥反應(yīng)[19-21]，小鼠短暫性常壓缺氧后也可導(dǎo)致多個(gè)器官內(nèi)炎癥細(xì)胞聚集并伴有血清細(xì)胞因子升高，故我們推測(cè)，HAPE應(yīng)該和炎癥存在某種關(guān)系，相關(guān)研究也證明HAPE患者體內(nèi)IL-1β、TNF-α水平升高[22]。本實(shí)驗(yàn)中，HG組大鼠血清和肺組織中IL-1β、TNF-α含量明顯升高，主要是因?yàn)槿毖醮碳ず驼T導(dǎo)炎癥反應(yīng)，造成以巨噬細(xì)胞為主的活性細(xì)胞產(chǎn)生大量的IL-1β和TNF-α并釋放入血，導(dǎo)致血清和肺組織中IL-1β和TNF-α的含量升高。而PhGCs各劑量組血清和肺組織中IL-1β和TNF-α的含量較HG組明顯降低，說(shuō)明PhGCs的抗炎作用可能是通過(guò)降低IL-1β和TNF-α等細(xì)胞因子的含量，重建體內(nèi)炎癥反應(yīng)的平衡來(lái)實(shí)現(xiàn)的。此外，PhGCs各劑量組肺組織含水量較HG組也明顯降低，表明PhGCs對(duì)HAPE具有一定的緩解作用。

綜上所述，螃蟹甲PhGCs可有效抑制低壓低氧誘導(dǎo)的大鼠急性HAPE，其中抗氧化應(yīng)激和抗炎可能是螃蟹甲PhGCs預(yù)防急性HAPE的主要作用，但其具體機(jī)制還有待進(jìn)一步深入研究。

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