• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    皮秒脈沖電場(chǎng)對(duì)宮頸癌侵襲能力影響的實(shí)驗(yàn)研究

    2015-08-28 03:17:00吳麗梅華媛媛吳雨桐姚陳果張睿哲王智亮熊正愛
    解放軍醫(yī)學(xué)雜志 2015年9期
    關(guān)鍵詞:皮秒電場(chǎng)宮頸癌

    吳麗梅,華媛媛,吳雨桐,姚陳果,張睿哲,王智亮,熊正愛

    2012年國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)公布的全球腫瘤流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明,發(fā)展中國(guó)家宮頸癌新增病例44.45萬(wàn),其中死亡病例23.02萬(wàn),分別居所有新增病例和死亡病例的第2﹑3位[1]。雖然世界各國(guó)的研究人員都在致力于探索新的宮頸癌治療策略[2-4],但是目前的手術(shù)治療及放﹑化療效果有限,且不良反應(yīng)明顯[5-7],其臨床應(yīng)用前景不容樂(lè)觀。皮秒脈沖電場(chǎng)作為一種新興的物理治療方法,具有較高的時(shí)間和空間分辨率,信號(hào)失真小,并能避免對(duì)正常組織的損傷,從而能實(shí)現(xiàn)腫瘤的無(wú)創(chuàng)治療,但其對(duì)腫瘤的作用及機(jī)制研究尚處于初步階段。本研究從組織水平研究皮秒脈沖電場(chǎng)對(duì)宮頸癌的組織殺傷效應(yīng)及其對(duì)宮頸癌侵襲能力的影響,以期推動(dòng)該技術(shù)盡早進(jìn)入臨床,為宮頸癌患者提供一種無(wú)創(chuàng)的保留生育功能的新方法。

    1 材料與方法

    1.1 主要試劑和儀器 10%水合氯醛(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院),抗基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)單克隆抗體(Santa Cruz公司),抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)多克隆抗體(北京博奧森生物科技有限公司);皮秒脈沖電場(chǎng)發(fā)生儀(重慶市重慶大學(xué)輸配電裝備及系統(tǒng)安全與新技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室制造并調(diào)試)﹑示波器(Tektronix TDS3032B,USA)﹑鑷型電極(重慶市重慶大學(xué)輸配電裝備及系統(tǒng)安全與新技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 24只4~6周齡健康雌性BALB/c裸鼠由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,體重14.0~18.0g,飼養(yǎng)于無(wú)特殊病原體的環(huán)境中,實(shí)驗(yàn)前先于該環(huán)境中適應(yīng)3~5d。1.3 宮頸癌移植瘤模型制作 消毒上述裸鼠腹股溝根部待接種部位,注射混勻的HeLa細(xì)胞懸液0.2ml(含細(xì)胞5×106個(gè)),20~25d后待腫瘤最大直徑長(zhǎng)至0.5~0.8cm時(shí),采用10%水合氯醛(70μl/20g)麻醉裸鼠,取皮下腫瘤組織置于冰上的培養(yǎng)皿中剪碎至1mm×1mm×1mm大小,消毒待接種的裸鼠左上肢根部皮膚,將組織塊迅速接種于裸鼠皮下,對(duì)合皮膚并消毒,每隔1d觀察移植瘤生長(zhǎng)情況,約20d后成功建立宮頸癌移植瘤動(dòng)物模型備用。

    1.4 psPEF電場(chǎng)處理裸鼠移植瘤 10%水合氯醛麻醉待處理裸鼠,常規(guī)消毒腫瘤區(qū)域皮膚,根據(jù)腫瘤的形態(tài)選擇適當(dāng)?shù)蔫囆坞姌O擺放位置,盡可能使其作用范圍覆蓋整個(gè)腫瘤區(qū)域。按皮秒脈沖電場(chǎng)場(chǎng)強(qiáng)不同隨機(jī)將宮頸癌模型動(dòng)物分為4組:對(duì)照組﹑場(chǎng)強(qiáng)50kV/cm組﹑場(chǎng)強(qiáng)60kV/cm組﹑場(chǎng)強(qiáng)70kV/cm組,每組6只裸鼠。脈沖電場(chǎng)參數(shù)設(shè)定:固定頻率為3Hz,脈寬為800ps,脈沖個(gè)數(shù)為2000個(gè),每只裸鼠處理時(shí)間11min。對(duì)照組不予以任何處理。然后繼續(xù)在上述環(huán)境中飼養(yǎng)1周,期間每隔1d觀察裸鼠移植瘤生長(zhǎng)情況,裸鼠的精神及飲食狀況。

    1.5 裸鼠移植瘤的組織學(xué)觀察 皮秒脈沖電場(chǎng)處理后1周頸椎脫臼法處死裸鼠,立即取腫瘤組織,放入4%多聚甲醛溶液中固定,常規(guī)石蠟包埋﹑切片﹑HE染色,光鏡下觀察組織形態(tài)學(xué)的改變;同時(shí)將即刻取下的腫瘤切取2~3個(gè)1mm3大小的組織塊,4%戊二醛固定,送重慶醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)院電子顯微鏡室脫水,環(huán)氧樹脂浸透,包埋﹑聚合,超薄切片,鈾/鉛染色,應(yīng)用Hitachi-7500型透射電鏡觀察組織超微結(jié)構(gòu)的變化。

    1.6 免疫組化檢測(cè)VEGF﹑MMP-9的表達(dá) 用兔多克隆抗體VEGF﹑鼠單克隆抗體MMP-9檢測(cè)腫瘤組織內(nèi)VEGF﹑MMP-9的表達(dá),免疫組化染色按SP試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)說(shuō)明書進(jìn)行,采用Image-pro plus 6.0對(duì)圖片的平均光密度值進(jìn)行分析。

    1.7 Western blotting檢測(cè) 皮秒脈沖處理后1周,頸椎脫臼法處死裸鼠,立即取腫瘤組織放入液氮中保存,Western blotting檢測(cè)腫瘤組織內(nèi)VEGF﹑MMP-9的表達(dá)情況,以GAPDH為內(nèi)參,用Bio-Rad凝膠成像系統(tǒng)掃描制片并行半定量分析。

    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)用±s表示,多組間比較采用單因素方差分析,進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 宮頸癌荷瘤裸鼠模型的建立 腫瘤組織接種裸鼠皮下后1周可于接種部位見明顯的腫瘤生長(zhǎng),接種后20d腫瘤長(zhǎng)至0.6~0.8cm大小,可用于皮秒脈沖處理(圖1)。

    2.2 皮秒脈沖電場(chǎng)對(duì)宮頸癌組織的殺傷效應(yīng)

    2.2.1 HE染色結(jié)果 光鏡下,對(duì)照組可見大量腫瘤細(xì)胞活躍生長(zhǎng),細(xì)胞密集,間質(zhì)少,細(xì)胞核呈圓形﹑不規(guī)則形,核大,核仁明顯,核分裂象多見;50kV/cm處理組腫瘤組織周邊仍可見較大范圍的癌細(xì)胞生長(zhǎng),壞死主要集中在中間區(qū)域,壞死組織內(nèi)夾雜少許癌細(xì)胞;60kV/cm處理組腫瘤組織周邊癌細(xì)胞較50kV/cm組減少,中央壞死區(qū)域增大,壞死較徹底,少數(shù)可見壞死細(xì)胞輪廓;70kV/cm處理組腫瘤組織周邊僅見3~4層腫瘤細(xì)胞,可見少數(shù)壞死細(xì)胞輪廓(圖2)。

    圖1 皮秒脈沖電場(chǎng)作用于裸鼠皮下移植瘤(箭頭示鑷形電極)Fig. 1 psPEF acted on the subcutaneous transplanted tumor Arrow shows the tweezers type plate electrodes

    2.2.2 電鏡檢測(cè)結(jié)果 電鏡下,對(duì)照組腫瘤細(xì)胞核漿比大,核仁大而明顯,可見少量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體,細(xì)胞間連接清晰可見;50kV/cm處理組胞質(zhì)內(nèi)線粒體輕﹑中度腫脹,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕﹑中度擴(kuò)張,細(xì)胞核改變不明顯,細(xì)胞間連接輕度減少;60kV/cm處理組腫瘤細(xì)胞質(zhì)內(nèi)線粒體明顯腫脹,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張,細(xì)胞器部分受損,輪廓不清,胞核異染色質(zhì)凝聚成團(tuán)塊狀,并向核周邊集;70kV/cm處理組腫瘤細(xì)胞大量壞死,鏡下見大量細(xì)胞碎片,細(xì)胞器嚴(yán)重受損,不能辨認(rèn)其結(jié)構(gòu),腫瘤細(xì)胞輪廓消失(圖3)。

    圖2 各組腫瘤組織HE染色切片(×200)Fig. 2 HE staining of tumor tissue in each group (×200)

    2.3 皮秒脈沖電場(chǎng)對(duì)宮頸癌細(xì)胞侵襲能力的影響

    2.3.1 免疫組化檢測(cè)結(jié)果 VEGF主要分布于胞質(zhì)和基質(zhì)中,MMP-9主要分布于胞質(zhì)。對(duì)照組組織中陽(yáng)性瘤細(xì)胞數(shù)目多,胞質(zhì)染色較深,呈棕黃色,皮秒脈沖處理組隨著脈沖場(chǎng)強(qiáng)的增加陽(yáng)性瘤細(xì)胞數(shù)逐漸減少,染色逐漸變淺,呈淺黃色,尤其在70kV/cm處理組,極少見陽(yáng)性瘤細(xì)胞(圖4)。運(yùn)用Image-Pro Plus 6.0軟件對(duì)免疫組化圖片進(jìn)行光密度值測(cè)量,結(jié)果如表1所示:經(jīng)皮秒脈沖電場(chǎng)處理后,腫瘤組織中VEGF和MMP-9蛋白的平均光密度值較對(duì)照組明顯下降,且隨著脈沖電場(chǎng)強(qiáng)度的增強(qiáng),平均光密度值呈逐漸下降趨勢(shì),組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    表1 各組VEGF和MMP-9的平均光密度值變化(±s,n=6)Tab. 1 The average optical density of VEGF and MMP-9 in each group (±s, n=6)

    表1 各組VEGF和MMP-9的平均光密度值變化(±s,n=6)Tab. 1 The average optical density of VEGF and MMP-9 in each group (±s, n=6)

    (1)P<0.05 compared with control group; (2)P<0.05 compared with 50kV/cm group; (3)P<0.05 compared with 60kV/cm group

    Group VEGF MMP-9 Control 0.151±0.012 0.146±0.011 50kV/cm 0.102±0.014(1) 0.100±0.016(1)60kV/cm 0.081±0.009(1)(2) 0.064±0.007(1)(2)70kV/cm 0.022±0.004(1)(2)(3) 0.014±0.002(1)(2)(3)

    圖4 VEGF﹑MMP-9表達(dá)的免疫組化分析(×400)Fig. 4 Expression of VEGF and MMP-9 in each group (IHC staining ×400)

    2.3.2 Western blotting檢測(cè)結(jié)果 隨著皮秒脈沖電場(chǎng)強(qiáng)度的增加,VEGF和MMP-9的蛋白表達(dá)水平逐漸下降(P<0.05)。運(yùn)用Quantity One灰度定量分析軟件計(jì)算各條帶的灰度值,并計(jì)算出目的條帶灰度值與內(nèi)參條帶灰度值的比值,結(jié)果顯示:處理組VEGF的灰度值(50kV/cm組0.666±0.055,60kV/cm組0.511±0.032,70kV/cm組0.305±0.023)明顯低于對(duì)照組(0.818±0.043),組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且60﹑70kV/cm組明顯低于50kV/cm組(P<0.05),但60﹑70kV/cm組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。處理組MMP-9的灰度值(50kV/cm組0.818±0.040,60kV/cm組0.656±0.062,70kV/cm組0.464±0.027)也明顯低于對(duì)照組(1.006±0.027,P<0.05),且60﹑70kV/cm組明顯低于50kV/cm組(P<0.05),但60﹑70kV/cm組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖5)。

    圖5 皮秒脈沖電場(chǎng)對(duì)VEGF﹑MMP-9蛋白表達(dá)的影響Fig. 5 Effect of psPEF on the protein expression of VEGF and MMP-9

    3 討 論

    近年來(lái),世界各國(guó)的研究人員都致力于探索新的宮頸癌治療策略[8-10],脈沖電場(chǎng)作為一種新興的物理治療方法逐漸被人們所重視。目前國(guó)內(nèi)外研究者已對(duì)毫秒級(jí)﹑微秒級(jí)﹑納秒級(jí)脈沖電場(chǎng)進(jìn)行了大量研究,并取得了較大進(jìn)展[11-14],但其有創(chuàng)性限制了在臨床上的應(yīng)用。皮秒脈沖電場(chǎng)通過(guò)沖激脈沖輻射天線可無(wú)創(chuàng)地將脈沖電場(chǎng)傳輸至生物組織內(nèi)部,在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)可避免對(duì)正常組織的損傷[15]。本課題組前期研究證實(shí),psPEF對(duì)宮頸癌動(dòng)物模型具有在體殺傷效應(yīng),而該效應(yīng)可能與線粒體膜電位下降及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激活化Caspase依賴的細(xì)胞凋亡途徑相關(guān)[16]。但是我們同樣觀察到,皮秒脈沖作用后,腫瘤組織內(nèi)仍殘存少量癌細(xì)胞,而該部分癌細(xì)胞可能是后期復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的隱患。因此,本課題在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,重點(diǎn)對(duì)皮秒脈沖電場(chǎng)作用后殘存腫瘤細(xì)胞的侵襲能力進(jìn)行了初步研究。

    腫瘤的侵襲過(guò)程主要包括腫瘤細(xì)胞的黏附﹑細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的降解和細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[17]。在這個(gè)過(guò)程中MMP-9和VEGF發(fā)揮著重要作用,其中MMP-9主要發(fā)揮降解ECM的作用[18],而VEGF在腫瘤新生血管形成﹑腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮著重要作用[19]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察psPEF作用于裸鼠宮頸癌移植瘤后的組織學(xué)改變發(fā)現(xiàn),psPEF能強(qiáng)有力地殺傷宮頸癌細(xì)胞,且在一定場(chǎng)強(qiáng)范圍內(nèi)隨著脈沖電場(chǎng)強(qiáng)度的增強(qiáng),殺傷效應(yīng)逐漸增強(qiáng),電鏡觀察可見大量不同形式的異染色質(zhì)凝聚成塊狀﹑核溶解等,該結(jié)果符合本課題組前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果[20]。此外,本研究結(jié)果還顯示,促血管生成相關(guān)因子VEGF及基質(zhì)降解相關(guān)蛋白MMP-9的表達(dá)隨著脈沖電場(chǎng)強(qiáng)度的增強(qiáng)而逐漸降低,其中以70kV/cm組最為明顯,說(shuō)明psPEF可以抑制殘存宮頸癌組織ECM的降解,減少腫瘤細(xì)胞周圍營(yíng)養(yǎng)血管的生成,從而降低其遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的可能。以上結(jié)果初步表明,psPEF在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí),還可抑制殘存腫瘤細(xì)胞分泌VEGF和MMP-9,能在一定程度上降低治療后的復(fù)發(fā)和局部殘存癌細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,降低其侵襲能力。但psPEF發(fā)揮該作用的機(jī)制并不清楚,我們推測(cè)可能是其引起了腫瘤內(nèi)部微環(huán)境的變化,從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞分泌功能的異常。

    綜上所述,psPEF具有抗宮頸癌的效應(yīng),該效應(yīng)可能包括兩個(gè)方面:直接作用于宮頸癌細(xì)胞,導(dǎo)致細(xì)胞死亡;間接調(diào)控腫瘤內(nèi)部微環(huán)境,抑制殘存腫瘤細(xì)胞VEGF﹑MMP-9的分泌。二者協(xié)同在宮頸癌治療及提高宮頸癌患者遠(yuǎn)期生存率上具有很好的臨床應(yīng)用前景。但是由于目前的研究?jī)H處于初步階段,因此psPEF對(duì)宮頸癌的具體作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步完善。

    [1] Torre LA, Bray F, Siegel RL, et al. Global cancer statistics[J]. CA Cancer J Clin, 2012, 65(2): 87-108.

    [2] Eskander RN, Tewari KS. Targeting angiogenesis in advanced cervical cancer[J]. Ther Adv Med Oncol, 2014, 6(6): 280-292.

    [3] Ma J, Waxman DJ. Combination of antiangiogenesis with chemotherapy for more effective cancer treatment[J]. Mol Cancer Ther, 2008, 7(12): 3670-3684.

    [4] Ackermann M, Carvajal IM, Morse BA, et al. Adnectin CT-322 inhibits tumor growth and affects microvascular architecture and function in Colo205 tumor xenografts[J]. Int J Oncol, 2011,38(1): 71-80.

    [5] Verheul HM, Pinedo HM. Possible molecular mechanisms involved in the toxicity of angiogenesis inhibition[J]. Nat Rev Cancer, 2007, 7(6): 475-485.

    [6] Speiser D, Mangler M, K?hler C, et al. Fertility outcome after radical vaginal trachelectomy: a prospective study of 212 patients[J]. Int J Gynecol Cancer, 2011, 21(9): 1635-1639.

    [7] Lloyd PA, Briggs EV, Kane N, et al. Women's experiences after a radical vaginal trachelectomy for early stage cervical cancer. A descriptive phenomenological study[J]. Eur J Oncol Nurs, 2014,18(4): 362-366.

    [8] Liu XJ, Hou B, Song XJ, et al. The efficacy of Endostar combined with co-chemoradiotherapy for stage Ⅲ bulky cervical cancer[J]. J Logist Univ PAPF (Med Sci), 2013, 22(3): 178-181.[劉興京, 侯兵, 宋曉軍, 等. 恩度聯(lián)合同步放化療治療Ⅲ期巨塊型宮頸癌的臨床療效觀察[J]. 武警后勤學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版), 2013, 22(3): 178-181.]

    [9] Liu HL, Lu CS, Ding BJ, et al. Photodynamic effect of new photodynamic therapy combined with nucleolin silenceon cervical cancer cell line SiHa[J]. J Jilin Univ (Med Ed), 2014,40(4): 748-752, 915. [劉洪麗, 呂昌帥, 丁佰娟, 等. 新型光動(dòng)力學(xué)療法聯(lián)合核仁素沉默對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞的光動(dòng)力學(xué)效應(yīng)[J]. 吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版), 2014, 40(4): 748-752, 915.]

    [10] Wang J, Zhang YZ, Feng JB, et al. Inhibitive effects of lenti virus-mediated hTERT RNA interference and TMPyP4-PDT on cervix cancer SiHa cells[J]. J Shandong Univ (Health Sci),2015, 53(1): 27-33. [王頡, 張友忠, 馮進(jìn)波, 等. 慢病毒介導(dǎo)的hTERT-shRNA聯(lián)合光動(dòng)力治療對(duì)宮頸癌細(xì)胞SiHa的影響[J]. 山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版), 2015, 53(1): 27-33.]

    [11] Cemazar M, Parkins CS, Holder AL, et al. Electroporation of human microvascular endothelial cells: evidence for an antivascular mechanism of electrochemotherapy[J]. Br J Cancer,2001, 84(4): 565-570.

    [12] Nuccitelli R, Chen X, Pakhomov AG, et al. A new pulsed electric field therapy for melanoma disrupts the tumor's blood supply and causes complete remission without recurrence[J]. Int J Cancer, 2009, 125(2): 438-445.

    [13] Chen X, Chen X, Swanson RJ, et al. Histopathological follow-up by tissue micro-array in a survival study after melanoma treated by nanosecond pulsed electric fields (nsPEF)[J]. J Dermatolog Treat, 2011, 22(3): 153-161.

    [14] Chen X, Zhuang J, Kolb JF, et al. Long term survival of mice with hepatocellular carcinoma after pulse power ablation with nanosecond pulsed electric fields[J]. Technol Cancer Res Treat,2012, 11(1): 83-93.

    [15] Jia J, Xiong ZA, Qin Q, et al. Picosecond pulsed electric fields induce apoptosis in a cervical cancer xenograft[J]. Mol Med Rep, 2015, 11(3): 1623-1628.

    [16] Hua YY, Xiong ZA, Zhang Y, et al. Growth and apoptosis of HeLa cells induced by intense picosecond pulsed electric field[J]. Med J Chin PLA, 2011, 36(7): 711-713. [華媛媛, 熊正愛, 張玉, 等.高強(qiáng)度皮秒脈沖電場(chǎng)對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制及凋亡誘導(dǎo)作用[J]. 解放軍醫(yī)學(xué)雜志, 2011, 36(7): 711-713.]

    [17] Leber MF, Efferth T. Molecular principles of cancer invasion and metastasis (review)[J]. Int J Oncol, 2009, 34(4): 881-895.

    [18] Roomi MW, Kalinovsky T, Cha J, et al. Effects of a nutrient mixture on immunohistochemical localization of cancer markers in human cervical cancer HeLa cell tumor xenografts in female nude mice[J]. Exp Ther Med, 2015, 9(2): 294-302.

    [19] Nagy VM, Buiga R, Brie I, et al. Expression of VEGF, VEGFR,EGFR, COX-2 and MVD in cervical carcinoma, in relation with the response to radio-chemotherapy[J]. Rom J Morphol Embryol, 2011, 52(1): 53-59.

    [20] Qin Q, Xiong ZA, Jia J. In vivo effects of picosecond pulse electric field on nude rat model of cervical cancer[J]. J Third Mil Univ, 2014, 36(23): 2372-2376. [秦琴, 熊正愛, 賈佳. 皮秒脈沖電場(chǎng)治療宮頸癌動(dòng)物模型的體內(nèi)效應(yīng)研究[J]. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào), 2014, 36(23): 2372-2376.]

    猜你喜歡
    皮秒電場(chǎng)宮頸癌
    巧用對(duì)稱法 妙解電場(chǎng)題
    中老年女性的宮頸癌預(yù)防
    “皮秒激光”,真的那么神奇嗎
    皮秒激光開啟新年美膚計(jì)劃
    電場(chǎng)強(qiáng)度單個(gè)表達(dá)的比較
    皮秒激光的臨床應(yīng)用
    Hepsin及HMGB-1在宮頸癌組織中的表達(dá)與侵襲性相關(guān)性分析
    電場(chǎng)中六個(gè)常見物理量的大小比較
    E-cadherin、Ezrin在宮頸癌組織中的表達(dá)及臨床意義
    食管疾病(2015年3期)2015-12-05 01:45:07
    Survivin、NF-кB和STAT3 mRNA在宮頸癌中的表達(dá)及其臨床意義
    亚洲成人免费电影在线观看| 国产免费福利视频在线观看| 免费在线观看黄色视频的| 久久ye,这里只有精品| 欧美人与性动交α欧美软件| av在线app专区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 日本一区二区免费在线视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 麻豆乱淫一区二区| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲七黄色美女视频| 日本wwww免费看| 青青草视频在线视频观看| 国产精品1区2区在线观看. | 岛国在线观看网站| 亚洲国产看品久久| av网站免费在线观看视频| 国产国语露脸激情在线看| 色视频在线一区二区三区| 国产精品1区2区在线观看. | 蜜桃国产av成人99| 欧美激情极品国产一区二区三区| 久久香蕉激情| 中文字幕av电影在线播放| 久久久精品区二区三区| 99re6热这里在线精品视频| 国产精品一区二区在线不卡| 手机成人av网站| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 乱人伦中国视频| 成年人免费黄色播放视频| 久久九九热精品免费| 正在播放国产对白刺激| 丰满饥渴人妻一区二区三| 在线永久观看黄色视频| 中亚洲国语对白在线视频| 大码成人一级视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 一级片免费观看大全| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 欧美国产精品va在线观看不卡| 免费黄频网站在线观看国产| 国产精品av久久久久免费| 国产一区二区在线观看av| 国产1区2区3区精品| 丝袜在线中文字幕| 视频区欧美日本亚洲| 最黄视频免费看| 久久久久久久精品精品| www.自偷自拍.com| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 久久久久国产一级毛片高清牌| 一本久久精品| 国产淫语在线视频| 男女边摸边吃奶| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 日韩一区二区三区影片| 黄色视频不卡| av片东京热男人的天堂| 老司机亚洲免费影院| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 免费观看人在逋| 首页视频小说图片口味搜索| 9热在线视频观看99| 国产淫语在线视频| 日本av免费视频播放| 久久综合国产亚洲精品| 嫩草影视91久久| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲成人免费av在线播放| 黑丝袜美女国产一区| 极品人妻少妇av视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久精品国产a三级三级三级| 久久女婷五月综合色啪小说| 一级片'在线观看视频| 久久久久网色| 久久天堂一区二区三区四区| 黄色片一级片一级黄色片| 国产成人a∨麻豆精品| 成年av动漫网址| videosex国产| 亚洲成国产人片在线观看| 超碰成人久久| 亚洲视频免费观看视频| 久久精品成人免费网站| 男人操女人黄网站| 日本一区二区免费在线视频| 在线av久久热| 精品一区二区三区av网在线观看 | 欧美日韩成人在线一区二区| 日日夜夜操网爽| 999久久久国产精品视频| 亚洲人成77777在线视频| 性少妇av在线| 老司机影院成人| 男女无遮挡免费网站观看| 精品福利永久在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 久久久精品免费免费高清| 免费人妻精品一区二区三区视频| 亚洲欧美一区二区三区久久| 国产免费av片在线观看野外av| 一区二区三区精品91| 91老司机精品| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 777米奇影视久久| 欧美激情久久久久久爽电影 | av超薄肉色丝袜交足视频| 一级毛片电影观看| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲黑人精品在线| 精品国内亚洲2022精品成人 | 国产成+人综合+亚洲专区| 天天影视国产精品| 欧美精品一区二区免费开放| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 无遮挡黄片免费观看| 男女免费视频国产| 一级毛片电影观看| 亚洲精品一区蜜桃| a在线观看视频网站| 黄色怎么调成土黄色| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲欧美精品自产自拍| 天堂8中文在线网| 国产高清视频在线播放一区 | 欧美日韩精品网址| 国产亚洲欧美在线一区二区| 多毛熟女@视频| 韩国高清视频一区二区三区| 捣出白浆h1v1| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲av美国av| 99久久精品国产亚洲精品| 欧美国产精品va在线观看不卡| 另类亚洲欧美激情| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲精品第二区| 十八禁网站网址无遮挡| 少妇人妻久久综合中文| 下体分泌物呈黄色| 亚洲中文av在线| 国产精品亚洲av一区麻豆| 手机成人av网站| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 夜夜骑夜夜射夜夜干| av欧美777| 亚洲人成电影观看| 成年人黄色毛片网站| 精品第一国产精品| 久久人人97超碰香蕉20202| 91av网站免费观看| 一级毛片女人18水好多| 欧美在线黄色| 精品熟女少妇八av免费久了| 久热爱精品视频在线9| 99re6热这里在线精品视频| 免费不卡黄色视频| 日韩一区二区三区影片| 欧美xxⅹ黑人| 一区二区三区四区激情视频| 国产野战对白在线观看| 青草久久国产| 热99国产精品久久久久久7| 国产精品国产av在线观看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 9191精品国产免费久久| 美女午夜性视频免费| 嫁个100分男人电影在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 久久久精品免费免费高清| 最黄视频免费看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲国产精品999| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 免费av中文字幕在线| 精品国产国语对白av| 国产精品久久久久久精品古装| 女人久久www免费人成看片| 日韩中文字幕视频在线看片| 日韩一区二区三区影片| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 一级毛片电影观看| 久久久国产欧美日韩av| 欧美日韩成人在线一区二区| 美国免费a级毛片| a级片在线免费高清观看视频| 国产成人av教育| 国产老妇伦熟女老妇高清| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 两人在一起打扑克的视频| av免费在线观看网站| www.av在线官网国产| 日韩中文字幕视频在线看片| 自线自在国产av| 日韩人妻精品一区2区三区| 真人做人爱边吃奶动态| 黄片小视频在线播放| 极品人妻少妇av视频| 亚洲精品第二区| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 乱人伦中国视频| 1024视频免费在线观看| 国产精品久久久久成人av| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产区一区二久久| 超碰97精品在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 欧美大码av| 欧美+亚洲+日韩+国产| 交换朋友夫妻互换小说| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产淫语在线视频| 人人妻人人澡人人看| 午夜激情av网站| 国产亚洲欧美在线一区二区| 淫妇啪啪啪对白视频 | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 啪啪无遮挡十八禁网站| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲男人天堂网一区| 国产区一区二久久| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久久久久国内视频| www日本在线高清视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 欧美激情高清一区二区三区| 两性夫妻黄色片| 精品一区在线观看国产| 99热全是精品| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产99久久九九免费精品| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 操出白浆在线播放| 欧美日韩精品网址| 久久中文字幕一级| 精品卡一卡二卡四卡免费| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 麻豆乱淫一区二区| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产激情久久老熟女| 美女福利国产在线| 欧美av亚洲av综合av国产av| 一进一出抽搐动态| 97精品久久久久久久久久精品| 老司机影院毛片| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 丁香六月天网| 人人妻人人澡人人看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 中国美女看黄片| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 91精品三级在线观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 国产精品久久久人人做人人爽| 桃花免费在线播放| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 这个男人来自地球电影免费观看| 97人妻天天添夜夜摸| 国产有黄有色有爽视频| 国产99久久九九免费精品| 久久久欧美国产精品| 在线av久久热| 男女午夜视频在线观看| 国产国语露脸激情在线看| 国产亚洲一区二区精品| 午夜福利在线观看吧| 美国免费a级毛片| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产成人av激情在线播放| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 日本vs欧美在线观看视频| 美女视频免费永久观看网站| 中文欧美无线码| 国产精品一区二区精品视频观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 美女国产高潮福利片在线看| 99国产精品免费福利视频| 免费在线观看黄色视频的| 一本综合久久免费| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 欧美日韩av久久| 久久国产精品大桥未久av| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲久久久国产精品| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 一区二区三区精品91| 9热在线视频观看99| 免费观看人在逋| 亚洲国产欧美网| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久中文看片网| 午夜成年电影在线免费观看| 男女无遮挡免费网站观看| 一本色道久久久久久精品综合| 纯流量卡能插随身wifi吗| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲欧美激情在线| 最近最新免费中文字幕在线| a 毛片基地| 亚洲精品久久午夜乱码| 另类亚洲欧美激情| 伦理电影免费视频| 午夜福利一区二区在线看| 中文字幕色久视频| 无遮挡黄片免费观看| 免费在线观看黄色视频的| 国产精品熟女久久久久浪| 他把我摸到了高潮在线观看 | 久久精品久久久久久噜噜老黄| 黑人操中国人逼视频| 午夜福利,免费看| 国产精品 欧美亚洲| 欧美精品高潮呻吟av久久| 免费不卡黄色视频| 亚洲成人免费av在线播放| 国产麻豆69| 欧美 日韩 精品 国产| 国产精品成人在线| 国产精品久久久久久精品古装| 视频在线观看一区二区三区| 一级a爱视频在线免费观看| 国产亚洲精品久久久久5区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美久久黑人一区二区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 精品一区二区三区av网在线观看 | 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 久久综合国产亚洲精品| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲 欧美一区二区三区| 99re6热这里在线精品视频| 欧美久久黑人一区二区| 久久久久精品人妻al黑| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 日韩三级视频一区二区三区| 午夜福利视频精品| 91成年电影在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 成年人免费黄色播放视频| 久久久久久久精品精品| 国产在线免费精品| 午夜福利视频精品| 亚洲九九香蕉| 欧美性长视频在线观看| 在线看a的网站| 我要看黄色一级片免费的| 免费观看人在逋| 一本大道久久a久久精品| 大陆偷拍与自拍| 丝袜美足系列| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| www日本在线高清视频| 满18在线观看网站| 丝袜脚勾引网站| 大型av网站在线播放| 不卡av一区二区三区| 国产免费福利视频在线观看| 97人妻天天添夜夜摸| av超薄肉色丝袜交足视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 一二三四在线观看免费中文在| 电影成人av| 少妇 在线观看| 亚洲精华国产精华精| 在线 av 中文字幕| 久久久久久久久久久久大奶| 一边摸一边做爽爽视频免费| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 人人妻人人澡人人看| 亚洲伊人色综图| 精品一区二区三区四区五区乱码| 涩涩av久久男人的天堂| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 久久影院123| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 免费高清在线观看视频在线观看| 999精品在线视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲全国av大片| 女警被强在线播放| 十八禁高潮呻吟视频| 国产成人免费观看mmmm| 国产又爽黄色视频| 国产片内射在线| kizo精华| 精品少妇久久久久久888优播| 老汉色av国产亚洲站长工具| 美女福利国产在线| 性色av乱码一区二区三区2| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 男女下面插进去视频免费观看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 丝袜人妻中文字幕| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| av片东京热男人的天堂| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产片内射在线| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久99热这里只频精品6学生| 成年人免费黄色播放视频| 精品少妇内射三级| 天堂中文最新版在线下载| 97人妻天天添夜夜摸| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲国产成人一精品久久久| 在线观看免费午夜福利视频| 午夜免费成人在线视频| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 国产在线视频一区二区| 丰满少妇做爰视频| 国产成人精品久久二区二区91| a 毛片基地| 超色免费av| 蜜桃国产av成人99| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲精品一区蜜桃| 国产男女内射视频| 亚洲第一青青草原| 美女福利国产在线| 在线看a的网站| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 少妇 在线观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 啦啦啦啦在线视频资源| 极品人妻少妇av视频| 国产又爽黄色视频| 久久热在线av| 性高湖久久久久久久久免费观看| 一本久久精品| 久久精品成人免费网站| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 一本色道久久久久久精品综合| 午夜福利乱码中文字幕| 两个人看的免费小视频| 亚洲av电影在线进入| 老司机影院成人| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 久久久久久人人人人人| 亚洲免费av在线视频| 日韩视频在线欧美| 91大片在线观看| 欧美日本中文国产一区发布| 一本综合久久免费| 久久久久国内视频| 自线自在国产av| 亚洲国产欧美在线一区| 久久天堂一区二区三区四区| 黄色毛片三级朝国网站| 免费观看人在逋| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲天堂av无毛| 久久精品国产a三级三级三级| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产一卡二卡三卡精品| 日日夜夜操网爽| 大香蕉久久网| 日日夜夜操网爽| 欧美日本中文国产一区发布| 天堂8中文在线网| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 91精品国产国语对白视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 水蜜桃什么品种好| 成人黄色视频免费在线看| 男女午夜视频在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久 | 国产人伦9x9x在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美日韩精品网址| 在线观看免费午夜福利视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 成人国语在线视频| 午夜福利一区二区在线看| 日日夜夜操网爽| 亚洲欧美精品自产自拍| 欧美日韩黄片免| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲一区中文字幕在线| 最新的欧美精品一区二区| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久久国产一区二区| 人妻一区二区av| 国产99久久九九免费精品| 黄频高清免费视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久这里只有精品19| 欧美在线黄色| 免费在线观看日本一区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 午夜两性在线视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产不卡av网站在线观看| 大片免费播放器 马上看| 男女下面插进去视频免费观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 中文字幕色久视频| 十八禁网站免费在线| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 免费日韩欧美在线观看| 男人操女人黄网站| 啦啦啦免费观看视频1| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产av精品麻豆| 九色亚洲精品在线播放| 日本wwww免费看| 在线永久观看黄色视频| 黑人操中国人逼视频| 亚洲av国产av综合av卡| 自线自在国产av| 欧美国产精品一级二级三级| 国产成人精品在线电影| 亚洲五月色婷婷综合| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 久久久精品免费免费高清| 午夜福利视频精品| 1024视频免费在线观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 丰满饥渴人妻一区二区三| 在线av久久热| 十八禁网站网址无遮挡| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 最黄视频免费看| h视频一区二区三区| 亚洲色图综合在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产精品亚洲av一区麻豆| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 制服人妻中文乱码| 99精品欧美一区二区三区四区| 黄片播放在线免费| 亚洲人成77777在线视频| 午夜两性在线视频| 各种免费的搞黄视频| 一二三四社区在线视频社区8| 老司机深夜福利视频在线观看 | 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 多毛熟女@视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产精品1区2区在线观看. | 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲男人天堂网一区| www日本在线高清视频| 女警被强在线播放| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲欧美清纯卡通| 制服诱惑二区| 久久亚洲精品不卡| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲国产欧美网| 国产色视频综合| 国产又爽黄色视频| 中文字幕高清在线视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 久久青草综合色| 啪啪无遮挡十八禁网站| 极品少妇高潮喷水抽搐| 91老司机精品| av网站免费在线观看视频| 十八禁高潮呻吟视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 欧美精品一区二区大全| 韩国精品一区二区三区| 黑人欧美特级aaaaaa片| 大型av网站在线播放| 亚洲精品一区蜜桃| 高潮久久久久久久久久久不卡| 电影成人av| 久久久国产欧美日韩av| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 色精品久久人妻99蜜桃| tube8黄色片| 在线观看免费高清a一片| 久久久久国内视频| 日本欧美视频一区| 大片免费播放器 马上看| 日本av免费视频播放| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 精品少妇内射三级| 亚洲美女黄色视频免费看| 人妻 亚洲 视频|