硒VE營養(yǎng)素補(bǔ)充劑的開發(fā)

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硒VE營養(yǎng)素補(bǔ)充劑是以富硒原料、維生素E為主要原料，配以填充劑等輔料開發(fā)制成的保健食品（營養(yǎng)素補(bǔ)充劑），根據(jù)人體對硒和維生素E的生理需要量，采用合理的配方及工藝加工而成，預(yù)期達(dá)到適量且有效補(bǔ)充人體所需硒和維生素E的效果。

1 硒的作用及其補(bǔ)充方法

硒是一種微量元素,參與體內(nèi)多種內(nèi)分泌代謝活動(dòng)，具有保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能免遭損害，保護(hù)細(xì)胞重要活性物質(zhì)不受強(qiáng)氧化劑的破壞的作用；能參與免疫反應(yīng),提高人體B細(xì)胞的增殖和活性，也可改善T細(xì)胞功能，并通過避免氧化損傷而保護(hù)免疫系統(tǒng)；在生物體內(nèi)可和許多重金屬反應(yīng)，對幫助人畜抵抗環(huán)境中的重金屬污染起到一定的作用；還在視覺和感覺中參與眼中光感受器使光子轉(zhuǎn)換成電信號(hào)能量的轉(zhuǎn)換過程等[1][2]。

此外，大量的研究表明，硒具有廣泛的生物學(xué)作用，特別是對癌癥(如肺癌、腸癌、前列腺癌和肝癌等)；同時(shí)，硒具有強(qiáng)大的保護(hù)作用，對心臟病、老年性疾病、肝和胰臟疾病等四十多種人類疾病有良好的預(yù)防治療作用。相應(yīng)的，如果人體內(nèi)缺少一定量的硒元素，將同樣導(dǎo)致上述疾病的發(fā)生。

人體中所需要的硒不能靠自身合成，需要從外界獲得，食物是主要來源。但由于自然界中的硒分布不均，天然食物中的硒含量不能滿足我國缺硒及低硒地區(qū)人群補(bǔ)硒的需求。我國居民硒膳食攝入量情況調(diào)查表明：富硒地區(qū)人均膳食硒攝入量為每人每天50～100μg；貧硒地區(qū)為10～50μg；而低硒地區(qū)僅10μg[3]，而日、英、美等國的國民的硒攝入量都在77～191μg/d。因此，我國居民需要通過服用高硒的藥品或強(qiáng)化食品、保健食品、日用品等來補(bǔ)充人體所需要的硒元素。通過食用以富硒食品原料為主加工的保健食品則以其硒含量高，食用方便安全等優(yōu)點(diǎn)更易為消費(fèi)者所接受。此類保健食品包括營養(yǎng)素補(bǔ)充劑和有一定保健功能的保健食品兩大類，其中具有保健功能的產(chǎn)品大多是申請的增強(qiáng)免疫力的功能，所用硒原料共有三種，用的比較多的是亞硒酸鈉（無機(jī)硒）和硒化卡拉膠（有機(jī)硒），而新申報(bào)下來的此類保健食品中越來越多地用到了富硒酵母（有機(jī)硒）。

2 硒VE營養(yǎng)素補(bǔ)充劑安全穩(wěn)定

維生素E是人體內(nèi)具有廣泛生理功能的重要脂溶性維生素， 具有較強(qiáng)的抗氧化性，人體不能自行合成，必須從外界攝取。維生素E除了促進(jìn)生殖， 維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和骨骼肌的功能之外， 還具有免疫調(diào)節(jié)劑的作用。維生素E 通過增強(qiáng)體液免疫、提高細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答、影響吞噬細(xì)胞功能等作用而影響機(jī)體免疫狀態(tài)[4][9]。維生素E與硒有協(xié)同作用，能維持體內(nèi)硒的活性形式，并且通過自身的抗氧化功能降低機(jī)體對硒的需要量[5]，硒和維生素E聯(lián)用可明顯升高HDL水平，抗脂質(zhì)過氧化作用效果優(yōu)于硒、維生素E單用，為臨床二者聯(lián)合應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，在安全劑量范圍內(nèi)使用無毒副作用[6]。硒VE營養(yǎng)素補(bǔ)充劑選用的維生素E原料對熱和空氣非常穩(wěn)定，且其標(biāo)準(zhǔn)符合美國藥典和歐洲藥典的要求。

補(bǔ)充硒所用的原料之一是富硒酵母，其中硒的存在形式與普通啤酒酵母中硒的天然存在形式相似， 其有機(jī)硒含量占總硒量的95%以上。動(dòng)物試驗(yàn)表明， 富硒酵母沒有致畸和致突變方面的作用， 其毒性大大低于亞硒酸鈉。在生理活性方面，富硒酵母較無機(jī)硒高， 如對腫瘤的抑制效果較亞硒酸鈉顯著[7]。研究表明， 有機(jī)硒在生物體內(nèi)停留時(shí)間較長， 在人體硒營養(yǎng)狀況良好的情況下， 有機(jī)硒可貯存起來，當(dāng)人體硒營養(yǎng)攝入不足時(shí)， 貯存的有機(jī)硒能夠補(bǔ)充到生理代謝中， 從而滿足硒的需求。無機(jī)硒(如亞硒酸鹽和硒酸鹽)， 進(jìn)入人體后很快通過排泄途徑排出體外， 在體內(nèi)停留時(shí)間較短， 因此活性低于有機(jī)硒， 且毒性又大于有機(jī)硒，通常不適合于直接添加到食品中。因此通過生物富硒將無機(jī)硒轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒， 是生產(chǎn)富硒食品及添加劑的一種安全有效的方法[8]。

3 生產(chǎn)工藝

原輔料過篩、稱量→逐級混合→膠囊填充→拋光→裝瓶→貼簽→成品檢驗(yàn)→入庫。

4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

硒VE營養(yǎng)素補(bǔ)充劑可開發(fā)成多種劑型，如硬膠囊、軟膠囊、口服液、片劑等，本文中僅以硬膠囊的劑型舉例說明工藝及穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)過程。

4.1 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

4.1.1 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)條件 37℃～40℃，相對濕度75%，0、1、2、3月，每月1次，共測4次。

4.1.2 中試樣品批次 1、2、3共計(jì)三批。

4.1.3 結(jié)果與分析 通過對硒VE營養(yǎng)素補(bǔ)充劑三個(gè)批次的中試樣品進(jìn)行三個(gè)月穩(wěn)定性、衛(wèi)生學(xué)和標(biāo)志性成分的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示各項(xiàng)指標(biāo)均在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，且硒和維生素E的測定結(jié)果穩(wěn)定性較為理想，說明該產(chǎn)品的配方及工藝可行，可以作為工業(yè)化生產(chǎn)的參考依據(jù)。

本產(chǎn)品中功效成分的檢測結(jié)果均在《營養(yǎng)素補(bǔ)充劑申報(bào)與審評規(guī)定（試行）》中規(guī)定用量的范圍內(nèi)，因此具有相應(yīng)的營養(yǎng)素補(bǔ)充的作用。

4.2 標(biāo)志性成分的檢測

4.2.1 硒的測定[10]

4.2.1.1 材料與試劑 硝酸、高氯酸、鹽酸、氫氧化鈉均為優(yōu)質(zhì)純；三級水。

4.2.1.2 儀器與設(shè)備 原子熒光光譜儀，帶硒空心陰極燈；電熱板；微波消解系統(tǒng)；感量為 1 mg的天平；粉碎機(jī)；烘箱。

4.2.1.3 試驗(yàn)方法 ①試樣處理 粉碎，混勻，備用。微波消解：稱取0.5g～2g（精確至0.001g） 試樣于消化管中，加10mL 硝酸、2mL 過氧化氫，振搖混合均勻，于微波消化儀中消化，冷卻后轉(zhuǎn)入三角瓶中，加幾粒玻璃珠，在電熱板上繼續(xù)加熱至近干，切不可蒸干。再加5.0mL 鹽酸（6mol/L），繼續(xù)加熱至溶液變?yōu)榍辶翢o色并伴有白煙出現(xiàn)，將六價(jià)硒還原成四價(jià)硒。冷卻，轉(zhuǎn)移試樣， 消化液于25mL 容量瓶中定容，混勻備用。同時(shí)做空白試驗(yàn)。吸取10.mL 試樣消化液于15mL 離心管中，加鹽酸（4.3）2.0mL，鐵氰化鉀溶液（4.7）1.0 mL，混勻待測。

②標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制 分別取0.00mL，0.10mL，0.20mL，0.30mL，0.40mL，0.50 mL標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液于15mL 離心管中用去離子水定容至10mL，再分別加鹽酸（4.3）2mL，鐵氰化鉀溶液（4.7）1.0mL，混勻，制成標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

③測定 儀器參考條件：負(fù)高壓 340 V；燈電流100mA；原子化溫度800℃；爐高8mm；載氣流速500mL/min；屏蔽氣流速1000mL/min；測量方式 標(biāo)準(zhǔn)曲線法；讀數(shù)方式 峰面積；延遲時(shí)間1s；讀數(shù)時(shí)間15s；加液時(shí)間8s；進(jìn)樣體積2mL。測定：設(shè)定好儀器最佳條件，逐步將爐溫升至所需溫度后，穩(wěn)定10min～20min后開始測量。連續(xù)用標(biāo)準(zhǔn)系列的零管進(jìn)樣，待讀數(shù)穩(wěn)定之后，轉(zhuǎn)入標(biāo)準(zhǔn)系列測量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。轉(zhuǎn)入試樣測量，分別測定試樣空白和試樣消化液，每測不同的試樣前都應(yīng)清洗進(jìn)樣器。分析結(jié)果的表述：硒的含量

式中：X為試樣中硒的含量，單位為毫克每千克或毫克每升（mg/kg或mg/L）；C為試樣消化液測定濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；C0為試樣空白消化液測定濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；m 為試樣質(zhì)量（體積），單位為克或毫升（g 或mL）；V為試樣消化液總體積，單位為毫升（mL）。

以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10 %。

附表 已被批準(zhǔn)為營養(yǎng)素補(bǔ)充劑的補(bǔ)硒產(chǎn)品舉例

4.2.2 維生素E的測定[11]

4.2.2.1 材料與試劑 維生素E 標(biāo)準(zhǔn)品；α-淀粉酶：酶活力≥1.5 U/mg；無水硫酸鈉：分析純；異丙醇、乙醇、甲醇、正己烷、環(huán)己烷均為色譜純。石油醚：沸程30 ℃～60 ℃。

4.2.2.2 儀器與設(shè)備 高效液相色譜儀，帶紫外檢測器；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；恒溫磁力攪拌器：20 ℃～80 ℃；氮吹儀；離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥5000轉(zhuǎn)/分鐘；培養(yǎng)箱：60℃±2 ℃；天平：感量為0.1mg。

4.2.2.3 試驗(yàn)方法 ①試樣處理：稱取混合均勻的固體試樣約5g或液體試樣約50g（精確到0.1mg）于250mL三角瓶中，加入lgα-淀粉酶，固體試樣需用約50mL45℃～50 ℃的水使其溶解，混合均勻后充氮，蓋上瓶塞，置于60℃±2℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)30 min。

②待測液的制備 皂化：于上述處理的試樣溶液中加入約100mL 維生素C 的乙醇溶液，充分混勻后加25mL 氫氧化鉀水溶液混勻，放入磁力攪拌棒，充氮排出空氣，蓋上膠塞。1000mL 的燒杯中加入約300mL 的水，將燒杯放在恒溫磁力攪拌器上，當(dāng)水溫控制在53℃±2℃時(shí)，將三角瓶放入燒杯中，磁力攪拌皂化約45min 后，取出立刻冷卻到室溫。 提?。河蒙倭康乃畬⒃砘喝哭D(zhuǎn)入500mL 分液漏斗中，加入100mL 石油醚，輕輕搖動(dòng)，排氣后蓋好瓶塞，室溫下振蕩約10min 后靜置分層，將水相轉(zhuǎn)入另一500mL 分液漏斗中，按上述方法進(jìn)行第二次萃取。合并醚液，用水洗至近中性。醚液通過無水硫酸鈉過濾脫水，濾液收入500mL圓底燒瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上在40℃±2℃充氮條件下蒸至近干（絕不允許蒸干）。殘?jiān)檬兔艳D(zhuǎn)移至10mL 容量瓶中，定容。從上述容量瓶中準(zhǔn)確移取2.0mL石油醚溶液放入試管中， 將試管置于40℃±2℃的氮吹儀中，將試管中的石油醚吹干。向試管中加5.0mL甲醇，振蕩溶解殘?jiān)?。再將試管以不低?000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心10 min，取出靜置至室溫后待測。

③測定 色譜參考條件：色譜柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm，或具同等性能的色譜柱。流動(dòng)相：甲醇。流速：1.0 mL/min。檢測波長：維生素A：325nm；維生素E：294nm。柱溫：35℃±1℃。進(jìn)樣量：20μL。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：分別準(zhǔn)確吸取維生素E標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.00mL、2.00 mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL于50mL棕色容量瓶中，用乙醇定容至刻度混勻。此標(biāo)準(zhǔn)系列工作液濃度分別為10.0μg/mL、20.0μg/mL、30.0μg/mL、40.0μg/mL、50.0μg/mL。將維生素E 標(biāo)準(zhǔn)工作液注入液相色譜儀中，得到峰高(或峰面積)。以峰高(或峰面積)為縱坐標(biāo)，以維生素E 標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為橫坐標(biāo)分別繪制維生素E 標(biāo)準(zhǔn)曲線。維生素E 試樣的測定：將②中待測液注入液相色譜儀中，得到峰高(或峰面積)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測溶液中維生素E的濃度。

④ 分析結(jié)果的表述 維生素E 含量按正式計(jì)算：

式中：X為試樣中維生素E（α-生育酚）的含量，單位為毫克每百克（mg/100g）；Cs為從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的維生素E 待測液的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；m為試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。

以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值，維生素E不得超過算術(shù)平均值的5%。

5 展望

硒是人體不可缺少的必需微量元素，在抗氧化、提高免疫力、降低重金屬的毒性等方面具有十分重要的生理功能，對多種疾病具有預(yù)防及治療等作用，人體補(bǔ)充到足量的硒十分必要。我國硒的平均攝入量遠(yuǎn)沒有達(dá)到每天每人40μg（生理需要量）以上的補(bǔ)硒要求，更遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于日、英、美等國的國民的硒攝入量。硒VE營養(yǎng)素補(bǔ)充劑通過補(bǔ)充適量的硒和維生素E，可滿足大范圍缺硒及少硒地區(qū)人群的補(bǔ)硒要求，適應(yīng)人群十分廣泛，因此具有很大的市場發(fā)展空間。