槲皮素減輕順鉑引起腎損傷的作用研究

鄭 華 孫 藝* 紀(jì)鎮(zhèn)華

（沈陽醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院，遼寧 沈陽 110000）

槲皮素減輕順鉑引起腎損傷的作用研究

鄭 華 孫 藝* 紀(jì)鎮(zhèn)華

（沈陽醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院，遼寧 沈陽 110000）

目的 觀察槲皮素拮抗順鉑引起腎小管上皮細(xì)胞凋亡的作用。方法 6～8周齡雄性Wistar大鼠15只，隨機(jī)分為3組，每組5只。A組：腹腔注射順鉑6 mg/（kg·d）；B組：腹腔注射順鉑6 mg/（kg·d）+槲皮素50 mg/（kg·d）；C組：正常大鼠。結(jié)果 A組大鼠的肌酐水平增加，腎臟間質(zhì)水腫嚴(yán)重，凋亡蛋白表達(dá)增加。B組大鼠肌酐水平低于A組大鼠，凋亡蛋白表達(dá)低于A組。結(jié)論 槲皮素可拮抗腎小管上皮細(xì)胞凋亡，減輕腎臟損傷。

順鉑；槲皮素；腎臟；凋亡

順鉑是一種常見的抗腫瘤藥物，已有研究證實(shí)順鉑對(duì)腎臟的毒性主要表現(xiàn)為對(duì)腎小管-間質(zhì)損傷。槲皮素（3，3’，4’，5，7-五羥基黃酮）是植物界分布最廣的黃酮類化合物，本實(shí)驗(yàn)研究槲皮素在拮抗順鉑引起腎小管上皮細(xì)胞凋亡的作用。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物模型：6～8周齡雄性Wistar大鼠15只，體質(zhì)量（197.18±8.88）g。隨機(jī)分為3組，每組5只。A組給予腹腔注射順鉑6 mg/（kg·d），連續(xù)性給藥3 d；B組：腹腔注射順鉑6 mg/（kg·d）+槲皮素50 mg/（kg·d）連續(xù)給藥7 d；C組正常大鼠。7 d后處死大鼠，留取血標(biāo)本及腎臟組織。

1.2免疫組化實(shí)驗(yàn)方法：組織浸泡在4%多聚甲醛中固定，蠟塊包埋組織，切片。脫蠟，抗原修復(fù)，山羊血清封閉10 min，孵一抗4 ℃過夜，bax，bcl-2一抗（santa公司）濃度1∶200，PBS清洗3次，二抗37 ℃孵育15 min，辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗37 ℃孵育15 min，PBS清洗3次，加DAB顯色劑，顯棕色后水洗終止反應(yīng)，蘇木素復(fù)染10 min后水洗。梯度酒精脫水，二甲苯透明，光學(xué)樹脂膠封片。隨機(jī)選取光鏡400倍下5個(gè)視野進(jìn)行半定量分析，每個(gè)視野含1個(gè)腎小球及附近10個(gè)腎小管，按腎小管染色百分比評(píng)分：0～10%為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%～100%為4分，染色強(qiáng)度評(píng)分（不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分），評(píng)分值=（陽性率評(píng)分+染色強(qiáng)度評(píng)分）/2。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，數(shù)據(jù)采用方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2　結(jié) 果

2.1A組大鼠的肌酐水平增加，B組大鼠肌酐水平低于A組大鼠，但高于正常組。P＜0.01，見表1。

2.2免疫組化結(jié)果：A組大鼠的腎間質(zhì)水腫嚴(yán)重，bax表達(dá)較正常組明顯增加，B組大鼠腎臟損傷改變減輕，bax表達(dá)較A組下降，Bcl-2表達(dá)較A組增加。具體見圖1、2和表2。

表1　各組大鼠肌酐、尿素氮水平變化

圖1　bax表達(dá)的免疫組化結(jié)果（×400）

圖2　Bcl-2表達(dá)的免疫組化結(jié)果（×400）

表2　光鏡下免疫組化評(píng)分

3　結(jié) 論

給予順鉑注射組大鼠的肌酐水平較正常組升高，t檢驗(yàn)，P＜0.01，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Western blot結(jié)果示bax表達(dá)明顯增加；順鉑+槲皮素注射后大鼠肌酐水平低于順鉑組大鼠，bax表達(dá)低于單純注射順鉑組大4討 論

鼠，bcl-2表達(dá)高于單純注射順鉑組大鼠，t檢驗(yàn)，P＜0.01。單純注射槲皮素大鼠與正常組比較無明顯變化。槲皮素可減輕順鉑引起的腎間質(zhì)水腫及減少細(xì)胞凋亡，改善腎功能。

順鉑在腫瘤治療中占有十分重要的地位，但其在腫瘤治療的同時(shí)，腎毒性作用也陸續(xù)被大量研究所證實(shí)，順鉑對(duì)腎臟的毒性包括對(duì)線粒體的損傷，活性氧的增多，啟動(dòng)細(xì)胞凋亡途徑等［1-2］。過度凋亡可導(dǎo)致腎組織結(jié)構(gòu)和功能喪失。凋亡作為細(xì)胞丟失的途徑之一，同樣可造成腎小管基底膜裸露、轉(zhuǎn)運(yùn)功能喪失及小管液回漏等功能障礙，成為少尿或無尿的病理生理基礎(chǔ)。有研究表明，腎小管上皮細(xì)胞凋亡在腎間質(zhì)纖維化中具有重要作用［3］。槲皮素（quercertin）是黃酮類化合物，主要有抗氧化，抗炎，抗增殖，抗腫瘤，降血壓，抗血小板聚集，抗動(dòng)脈粥樣硬化等作用［4］，可減輕腎臟組織纖維化［5-6］。Bcl-2家族成員在細(xì)胞凋亡過程中起著至關(guān)重要的作用，目前認(rèn)為Bax同源二聚體能促進(jìn)細(xì)胞凋亡，而Bcl-2則通過與Bax競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，形成異源二聚體來抑制細(xì)胞凋亡。Bcl-2與而Bax比值下降可進(jìn)一步導(dǎo)致caspase-3和caspase-9活化，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡［7］。本研究結(jié)果表明應(yīng)用順鉑后腎小管上皮細(xì)胞腫脹水腫，凋亡蛋白bax表達(dá)增加。給予槲皮素后順鉑所致的腎臟間質(zhì)纖維化減輕，腎功能改善，考慮槲皮素中的黃酮類化合物抑制了氧自由基大量生成，以及由此引起的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，抑制了腎小管上皮細(xì)胞凋亡及壞死。

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Quercertin Protect Renal Injury Induced by Cisplatin

ZHENG Hua， SUN Yi， JI Zhen-hua
（Affiliated Central Hospital of Shenyang Medical College， Shenyang 110000， China）

Objective To study if quercertin can protect renal tubular cells apoptosis induced by cisplatin. Methods 15 male wistar rat devided into three groups. Group A： cisplatin intraperitoneal injection 6 mg/（kg·d）. Group B： cisplatin intraperitoneal injection 6 mg/（kg·d）+quercertin 50 mg/（kg·d）. Group C：normal rat. Result The blood creatinin of group A increased， interstitial of kidney injured， the apoptosis protein express increased. The level of creatinin and apoptosis protein of group B is lower than group A. Conclusion Quercertin can protect renal tubular cells apoptosis induced by cisplatin.

Cisplatin； Quercetin； Kidney； Apoptosis

R282.710.7

B

1671-8194（2015）26-0001-02

沈陽醫(yī)學(xué)院青年基金（項(xiàng)目編號(hào)：20142052）