應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定纈沙坦氨氯地平片有關(guān)物質(zhì)

羅愛輝

摘要：目的：采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定纈沙坦氨氯地平片的有關(guān)物質(zhì)。方法：填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動(dòng)相：三乙胺溶液（應(yīng)用磷酸將PH值調(diào)至2.8）-甲醇（A）-乙腈（B），流速1.0ml/min，梯度洗脫，柱溫37℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為239nm，進(jìn)樣量15μl。結(jié)果：其降解產(chǎn)物與主峰在該色譜條件下能夠有效分離。結(jié)論：應(yīng)用高效液相色譜法可準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的測(cè)定纈沙坦氨氯地平片有關(guān)物質(zhì)。

關(guān)鍵詞： 高效液相色譜；纈沙坦氨氯地平片；有關(guān)物質(zhì)

纈沙坦氨氯地平片為復(fù)方制劑，結(jié)合我國生產(chǎn)的工藝，為控制藥品檢測(cè)質(zhì)量，參考美國藥典對(duì)纈沙坦、氨氯地平有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法，對(duì)纈沙坦氨氯地平片的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定分析[1]。3個(gè)已知雜質(zhì)為：纈沙坦的已知雜質(zhì)（S） -N-（1-戊?；?N-[4-[2-（1H-四氮唑-5-基） 苯基]芐基]-L-纈氨酸芐酯（雜質(zhì)C）和（S） -N-（ 1-丁?；?N-[4-[2-（ 1H-四氮唑-5-基） 苯基]芐基]-L-纈氨酸（ 雜質(zhì)B）。氨氯地平的已知雜質(zhì)3-乙基-5-甲基-2-[（ 2-氨基乙氧基） 甲基]-4-（ 2-氯苯基） -6-甲基吡啶-3，5-二羧酸酯（ 雜質(zhì)D）[2]。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定纈沙坦氨氯地平片中的有關(guān)物質(zhì)，取得了不錯(cuò)的效果，該方法可靠、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便，可用于纈沙坦氨氯地平片有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。

1 資料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀（生產(chǎn)廠家：美國安捷倫；型號(hào)：DE54627713）；電子分析天平（生產(chǎn)廠家：上海精科儀器廠；型號(hào)：BP61）；纈沙坦雜質(zhì)C（生產(chǎn)廠家：USP；批號(hào)：H1J021）；纈沙坦雜質(zhì)B（生產(chǎn)廠家：USP；批號(hào)：HOK089）；氨氯地平雜質(zhì)D（生產(chǎn)廠家：USP；批號(hào)：FOI143）；苯磺酸氨氯地平（生產(chǎn)廠家：中國藥品生物制品檢定所；批號(hào)：100374-200903）；纈沙坦（生產(chǎn)廠家：中國藥品生物制品檢定所；批號(hào)：100651-200902）；水為雙蒸水；乙腈、甲醇為色譜純；其余試劑為分析純。

1.2方法

1.2.1 色譜條件

填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動(dòng)相A：三乙胺10ml加H2O稀釋至1000ml，用磷酸調(diào)節(jié)PH值至2.8；流動(dòng)相B：甲醇；流動(dòng)相C：乙腈，梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為239nm；柱溫37℃[3]。見表1

1.2.2 專屬性試驗(yàn)

（1）光照試驗(yàn)：取樣品適量，陽光下照射10小時(shí)，流動(dòng)相溶解，搖勻，稀釋定容，抽濾后測(cè)定（2）高溫試驗(yàn)：取樣品適量，加入適量流動(dòng)相，100℃水浴4小時(shí)后冷卻，流動(dòng)相稀釋定容，搖勻，抽濾后得高溫破壞樣品溶液（3）氧化試驗(yàn)：取樣品適量，加10%雙氧水10ml，60℃加熱30min后冷卻，流動(dòng)相稀釋定容，搖勻，抽濾后得氧化破壞樣品溶液（4）堿破壞試驗(yàn)：取樣品適量，精密稱量，加入5ml氫氧化鈉溶液（1mol/L），60℃加熱25min，加入5ml鹽酸溶液（1mol/L）中和，加流動(dòng)相稀釋定容，搖勻，抽濾后得堿破壞樣品溶液（5）酸破壞樣品：取樣品適量，精密稱量，加入5ml鹽酸溶液（1mol/L），60℃加熱20min，加入5ml氫氧化鈉溶液（1mol/L）中和，加流動(dòng)相稀釋定容，搖勻，抽濾后得堿破壞樣品溶液[4]。另取纈沙坦原料樣品適量，氨氯地平原料樣品適量，空白輔料樣品適量進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，方法同上。

1.2.3 定量限、檢測(cè)限的測(cè)定

取纈沙坦對(duì)照品、氨氯地平對(duì)照品、纈沙坦雜質(zhì)C對(duì)照品、纈沙坦雜質(zhì)B對(duì)照品、氨氯地平雜質(zhì)D對(duì)照品適量，精密稱量，加入流動(dòng)相溶解，稀釋定容，精密吸取10μl，分別注入液相色譜儀[5]。

1.2.4 線性關(guān)系的考察及校正因子的計(jì)算

取纈沙坦雜質(zhì)C對(duì)照品、纈沙坦雜質(zhì)B對(duì)照品、氨氯地平雜質(zhì)D對(duì)照品適量，流動(dòng)相配液，相應(yīng)物質(zhì)的測(cè)定條件下測(cè)定，線性回歸，橫坐標(biāo)：濃度，縱坐標(biāo)：峰面積A，記錄峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算線性范圍及校正因子[6]。

1.2.5 溶液精密度、穩(wěn)定性試驗(yàn)

取自身對(duì)照溶液、供試品溶液、纈沙坦雜質(zhì)C對(duì)照品溶液、纈沙坦雜質(zhì)B對(duì)照品溶液及氨氯地平雜質(zhì)D對(duì)照品溶液，對(duì)有關(guān)物質(zhì)溶液精密度、穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)定[7]。

1.2.6 樣品測(cè)定 取三批供試樣品：精密稱量80mg、5mg，流動(dòng)相稀釋溶解定容至50ml，搖勻，抽濾后作為供試品溶液；吸取1ml供試品溶液，流動(dòng)相稀釋溶解定容至100ml，搖勻，抽濾后作為自身對(duì)照溶液；雜質(zhì)對(duì)照品溶液，對(duì)三批溶液進(jìn)行高效液相色譜儀分析，記錄色譜圖，計(jì)算總雜質(zhì)、最大單個(gè)雜質(zhì)及單個(gè)雜質(zhì)[8]。

2 結(jié)果

2.1 專屬性試驗(yàn)

結(jié)果顯示，各破壞試驗(yàn)下，兩個(gè)主要成分的原料、制劑的降解物峰均可良好的分離于纈沙坦、氨氯地平的主峰，且未知雜質(zhì)與已知雜質(zhì)的分離度也符合要求。

2.2 定量限、檢測(cè)限的測(cè)定

分別記錄各儀器色譜圖，使用定量限：S/N約為10時(shí)的進(jìn)樣量，使用檢測(cè)限：S/N約為3時(shí)的進(jìn)樣量。見表2

2.3 溶液精密度、穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果顯示，溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，RSD=1.37%（n=6）；自身對(duì)照溶液、供試品溶液、纈沙坦雜質(zhì)C對(duì)照品溶液、纈沙坦雜質(zhì)C對(duì)照品溶液及氨氯地平雜質(zhì)D對(duì)照品溶液進(jìn)樣精密度良好，RSD分別為0.68%，1.46%，0.89%，0.78%，0.58%（n=6）。

2.4 樣品測(cè)定

對(duì)三批樣品的測(cè)定，結(jié)果如表3所示。

3 討論

纈沙坦氨氯地平片，生產(chǎn)廠家為瑞士諾華公司，其商品名為倍博特，規(guī)格為纈沙80mg、氨氯地平5mg，在美國于2007年批準(zhǔn)上市，在中國于2009年批準(zhǔn)進(jìn)口并上市，主要用于抗高血壓病癥[9]。纈沙坦為血管緊張素ⅡAT1受體拮抗劑、氨氯地平為鈣離子拮抗劑，二者合用作為抗高血壓藥物，具有較好的治療效果。纈沙坦氨氯地平片合用療效比單獨(dú)使用療效顯著，且耐藥性、安全性也同樣優(yōu)于單獨(dú)使用，擬開發(fā)的產(chǎn)品規(guī)格、劑型與市售品相同，具有很好的市場(chǎng)前景。所以，建立對(duì)于纈沙坦氨氯地平片有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法來對(duì)纈沙坦氨氯地平片質(zhì)量進(jìn)行控制是十分重要[10]。

本文采用高效液相色譜法檢測(cè)纈沙坦氨氯地平片有關(guān)物質(zhì)，可準(zhǔn)確的檢測(cè)出纈沙坦氨氯地平片有關(guān)物質(zhì)，對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量加以監(jiān)督。該測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確性高、專屬性強(qiáng)，值得推廣應(yīng)用。

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