腫瘤相關基因檢測方法及研究進展

魏敏

【摘 要】腫瘤是危害人類健康最嚴重的疾病之一，人們與之斗爭了許多年，但收效甚微。目前腫瘤治療中亟待解決得問題就是早期診斷和腫瘤轉移，隨著分子生物學的飛速發(fā)展，腫瘤學研究已進入到基因與分子水平，發(fā)現(xiàn)了許多與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、演變相關的基因變化，包括癌基因、抑癌基因、腫瘤轉移基因、腫瘤轉移抑制基因、腫瘤相關病毒基因等，越來越多的實驗結果表明，許多癌細胞的基因組DNA有癌基因或抑癌基因的缺失或點突變等改變，這些改變可作為某些腫瘤早期檢測的基因標志[1]。另外還發(fā)現(xiàn)與腫瘤轉移過程有關的腫瘤轉移基因、腫瘤轉移抑制基因，也可作為基因檢測的標志物。應用分子生物學技術，對這些基因進行檢測，是目前腫瘤基因診斷的一個重要方式。本文對腫瘤相關的基因和檢測方法進行了綜述。

【關鍵詞】腫瘤 基因 檢測方法

1腫瘤相關基因

1.1癌基因

癌基因是指在自然條件下，具有潛在的誘導細胞惡性轉化的基因。癌基因主要是促進細胞生長和繁殖，并且阻止其發(fā)生終末分化傾向。在研究逆轉錄病毒時發(fā)現(xiàn)，將某些逆轉錄病毒的基因片段潛入細胞基因中，并使這些基因迅速地表達，結果是被嵌入的細胞呈惡性轉變，特別是如果這些逆轉錄病毒進入正常細胞染色體DNA的特定部位，就能很快地改變這些連接部位的基因表達，而使細胞癌變。

1.2抑癌基因

機體中有一類對正常細胞增殖起負調節(jié)作用的基因稱為抑癌基因，當這類基因丟失、失活或變異時，往往會促使細胞失控而呈惡性生長[2]。

1.3腫瘤轉移相關基因和轉移抑制相關基因

近年來，在腫瘤轉移機制研究中的重要進展，就是發(fā)現(xiàn)了一些與腫瘤轉移呈正負相關的腫瘤轉移相關基因和轉移抑制相關基因。在這里，我們把腫瘤轉移相關基因定義為一個廣義的概念，就是指與腫瘤的轉移呈正相關，即其基因的改變和表達能促進或導致腫瘤轉移的基因。我們把對腫瘤轉移起負調控作用，即抑制腫瘤轉移發(fā)生、形成的基因定義為腫瘤轉移抑制相關基因，其主要作用是抑制腫瘤細胞的轉移表型。

2腫瘤相關基因檢測

腫瘤相關基因檢測是指利用現(xiàn)代分子生物學的方法檢測那些和腫瘤相關的基因的突變及表達異常。這些方法有很多，包括Southern印跡雜交、Northern印跡雜交、斑點雜交、印跡雜交、原位雜交，以及各種PCR技術和基于PCR技術的RFLP和SSCP。另外基因診斷中最直接、最準確的方法就是直接測序，由于自動測序技術的發(fā)展及商業(yè)化，DNA測序技術有望應用于臨床。

DNA芯片技術是近年來發(fā)展較為迅速的一種新技術，它是在固定相上合成大量標記的探針，然后和待測基因雜交，通過檢測雜交信號來對基因進行分析，不僅能夠檢測出突變和多態(tài)性，而且具有高效、快速、敏感和自動化等特點將成為最有潛力的新一代基因診斷技術。Hacia等用基因芯片檢測遺傳性乳腺癌和卵巢癌基因BRCA1突變體，檢測了35例患者樣本，發(fā)現(xiàn)其中14例有基因突變，檢測準確率達到99%。Ficarra研制一種基因芯片用于監(jiān)測與腫瘤相關的p53基因全長編碼序列，一般認為50%以上的腫瘤患者該基因會發(fā)生突變。Prix利用芯片研究，發(fā)現(xiàn)結腸癌患者糞便中存在K-ras基因的突變[4]。Ollins研制一種基因芯片來獲取瘤細胞生長相關基因的表達模式，從而為人類對腫瘤疾病的發(fā)病機制及診斷作出重要貢獻[3]。目前已制備有集成p53基因正常序列及幾百個已知突變的特異探針的基因芯片，將在癌癥的診斷、分期、分類中發(fā)揮重要的作用。

3 結語

腫瘤基因的檢測雖然取得了重大進展，但是由于癌癥的發(fā)病是多因素的，基因診斷應用于腫瘤的診斷存在一定的局限性。另外，癌基因和抑癌基因的突變多是后天的，基因的改變只限于腫瘤組織的DNA，因此基因檢測的標本應應取自腫瘤組織，而不能采用外周血或其他組織細胞，但是如果是發(fā)現(xiàn)了腫瘤早期診斷就失去了意義，引人注目的是，Sidransky和Tada已首次從大腸癌患者糞便以及胰腺癌病人胃抽吸液及糞便中成功地檢出了K-ras基因突變。Hardingham等建立了檢測血液中結、直腸癌細胞ras基因突變的方法，陽性率為33%（9/27），其中7人由于復發(fā)、轉移而死亡，血液檢測結果與生存期顯著相關[5]。當然，這種無創(chuàng)傷性基因早期診斷的新途徑還有待于進一步研究。此外，癌基因的活化或抑癌基因的失活，都只是發(fā)生腫瘤的原因之一，而且同一種基因改變在同種腫瘤病例中的檢出率亦有所差別。所以有時僅靠基因檢測是不行的，往往需要結合其他手段檢測。盡管如此，基因檢測對腫瘤的診斷、鑒別診斷、療效檢測、預后判斷等具有重要的參考價值，隨著對腫瘤發(fā)病機制的深入研究，腫瘤的基因檢測必將取得重大突破。

參考文獻：

[1]劉向陽.腫瘤的基因診斷和基因治療[J].中國醫(yī)刊，1999，34（4）：58.

[2]馬文麗，鄭文嶺.分子腫瘤學[M].2003.

[3]劉濤，王春友，張錦輝.胰腺癌患者血漿k-ras基因與腫瘤標志物聯(lián)合檢測及其意義[J]臨床消化病雜志，2002（14）2：54.

[4]劉同華.基因芯片技術及其在腫瘤研究中的應用[J].重慶醫(yī)學，2003，32（9）1266～1267.

[5]喬玉歡，陳瑞川.腫瘤轉移檢測標志基因研究進展[J].國外醫(yī)學腫瘤學分冊，2000.（1）27：56～57.