酶聯(lián)免疫吸附試驗與中和抗體試驗檢測麻疹抗體比較研究

李海燕

【摘 要】 目的：對酶聯(lián)免疫吸附試驗和中和抗體試驗在麻疹抗體檢測中的應用價值進行分析探討。方法：將酶聯(lián)免疫吸附試驗作為麻疹抗體檢測中最為可靠和準確的治療標準，然后將酶聯(lián)免疫吸附試驗的試劑盒對300份麻疹抗體滴度進行檢測，對兩種檢測方法進行分析和比較。結(jié)果：酶聯(lián)免疫吸附試驗的陽性率明顯低于中和抗體試驗，酶聯(lián)免疫吸附試驗的陽性率隨著滴度的增加呈現(xiàn)出明顯的增高趨勢，抗體活性值與中和抗體試驗的滴度呈現(xiàn)出明顯的正相關，兩組數(shù)據(jù)對比均差異顯著，具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論：酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒在檢測滴度麻疹抗體時出現(xiàn)假陰性的幾率較高，檢測高滴度麻疹抗體時，兩種方法敏感性接近，可用于麻疹人群的抗體水平檢測。

【關鍵詞】 酶聯(lián)免疫吸附試驗 中和抗體試驗 麻疹抗體

酶聯(lián)免疫吸附試驗是酶免疫測定技術中應用非常廣泛的一項專業(yè)技術，其基本原理是酶分子與抗體或抗體分子之間的共價結(jié)合，將已知的抗體吸附在固相載體的表面，使得酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分清理掉[1]。而中和抗體試驗則是病毒或毒素與相應的抗體結(jié)合之后，失去對易感動物的致病力的試驗方法，但由于需要組織培養(yǎng)，耗時費力而受到限制[2]。本文用上述兩種不同方法檢測300份麻疹疫苗免疫前患者血清中的麻疹抗體水平，進而對其臨床應用效果進行分析和評價，具體內(nèi)容如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取未患過麻疹的患者作為本次的研究對象，年齡階段分別為3、5、7、8、9月齡，每組60例，3、5、7、8月齡的患者均未接受過麻疹疫苗的治療，9月齡的患者是指按免疫程序及時接種麻疹疫苗后一個月的患者。

1.2 檢測方法

1.2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗法與抗體的檢測

使用酶聯(lián)免疫吸附試驗的試劑盒按照操作說明對抗體進行檢測，血清按照1：100的比例進行稀釋后與之發(fā)生反應，以200IU/L位判斷標準，≥200IU/L為陽性，<200IU/L則為陰性，本次試驗過程中同時設置空白、陽性和陰性對照。

1.2.2 中和抗體的檢測

將準備檢測的55℃血清在30分鐘內(nèi)進行滅活，稀釋比例從1：2到1：1024，在96孔細胞版中，25各稀釋度血清分別與25麻疹病毒液進行混合，在37℃中中和1個小時，然后將100的細胞放置在同等溫度、且濃度為5%的二氧化碳中進行培養(yǎng)，觀察時間為一周左右，觀察內(nèi)容主要為細胞產(chǎn)生病變的程度，至一周半時可停止觀察，此時對其中和結(jié)果進行記錄和分析，如果抗體滴度在1：2以上時，則顯示為陽性，要確保每次試驗都能做到陽性、陰性血清對照和病毒滴度回滴，確定攻擊病毒的范圍為32-320TCID50。

1.3 統(tǒng)計學方法

對以上收集到的兩組研究數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行分析，酶聯(lián)免疫吸附試驗抗體與中和試驗抗體的結(jié)果比較采用秩相關，采用Fisher精確概率對兩種試驗方法的陽性符合率進行檢驗，檢驗的標準為=0.05。

2 結(jié)果

2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗和中和抗體試驗對麻疹抗體定性檢測的結(jié)果分析

酶聯(lián)免疫吸附試驗的陽性率明顯低于中和抗體試驗，酶聯(lián)免疫吸附試驗的陽性率隨著滴度的增加呈現(xiàn)出明顯的增高趨勢，抗體活性值與中和抗體試驗的滴度呈現(xiàn)出明顯的正相關。

2.2 中和試驗抗體下不同滴度的酶聯(lián)免疫吸附試驗抗體的定量結(jié)果

在300份血清檢測樣本中，酶聯(lián)免疫吸附試驗抗體的活性值在0.1-8130.2IU/L之間，平均值為47.54IU/L；中和試驗抗體的活性值在<1：2～>1：1024之間，平均值為1：5.52。將酶聯(lián)免疫吸附試驗的定量結(jié)果分為3個等級，<200IU/L為陰性、200-800IU/L為低抗體保護水平，800IU/L以上則為中高抗體保護水平。確保中和試驗抗體和酶聯(lián)免疫吸附試驗抗體在檢測結(jié)果上具有相關性。如表1：

2.3 不同滴度的中和抗體下兩種檢測方法的陽性符合率分析

按照不同的滴度標準對中和抗體進行分組，同時對酶聯(lián)免疫吸附試驗的結(jié)果進行定性分析，通過檢測可發(fā)現(xiàn)兩種方式下陽性符合率與滴度之間成正比例，滴度的增加會導致陽性符合率不斷上升，在中和抗體的不同組別中，1：2和1：4組與其他各組的陽性符合率呈現(xiàn)出明顯的差異性特征，其對比具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），此外，1：8組和1：64以上組的陽性符合率差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），其余各組則無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表2：

3 討論

麻疹的主要發(fā)病人群多為兒童，由于他們的免疫系統(tǒng)并不十分成熟，所以在面臨此病時抵抗力較弱，導致死亡率比較高，而且麻疹的傳染性又較強，因此發(fā)病率整體較高[3]。隨著醫(yī)學技術手段的不斷發(fā)展和進步，在治療麻疹方面已經(jīng)不再像過去那樣談之色變，麻疹疫苗的出現(xiàn)使得患病兒童的死亡率逐漸降低，在臨床治療上有著比較理想的效果。

盡管麻疹的較大范圍傳染已經(jīng)得到基本控制，但目前我國的麻疹治療形勢依然相當嚴峻，麻疹疫苗只能在短時間內(nèi)起到預防和控制的作用，并無法從源頭上徹底治療。而且成人也會患此病，雖然幾率較小，但一旦出現(xiàn)，則說明癥狀比較嚴重，通常情況下表現(xiàn)為患者的體溫維持在40℃左右，有麻疹粘膜斑，半數(shù)患者的皮疹有出血傾向，并伴有嗜睡等一系列癥狀。比較樂觀的是患者的并發(fā)癥的發(fā)生率較低，接受醫(yī)護人員的治療后效果較為理想。

就現(xiàn)階段有關麻疹的臨床研究來看，已經(jīng)取得了諸多方面的進步，例如現(xiàn)在已經(jīng)有中和抗體試驗、血凝抑制試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗等多種方法對麻疹抗體水平的血清進行檢測，其中酶聯(lián)免疫吸附試驗為麻疹抗體檢測中最為可靠和準確的治療方法，但也存在一些弊端和缺陷，例如在檢測低水平的抗體時容易出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象[6]。因此，即便檢測出了酶聯(lián)免疫吸附試驗的結(jié)果，也要對其中的相關數(shù)據(jù)進行認真、詳細地分析和研究，以確保檢測結(jié)果的真實性和可靠性。只有經(jīng)過反復的檢驗，酶聯(lián)免疫吸附試驗才能廣泛的應用于麻疹流行病的研究當中，對具體患者的身體的免疫狀況進行細致地觀察和分析，然后對檢測出的結(jié)果進行評估和記錄，進而為制定消除麻疹的有效措施提供強有力的科學依據(jù)。

本研究結(jié)果表明，酶聯(lián)免疫吸附試驗的陽性率明顯低于中和抗體試驗，酶聯(lián)免疫吸附試驗的陽性率隨著滴度的增加呈現(xiàn)出明顯的增高趨勢，抗體活性值與中和抗體試驗的滴度呈現(xiàn)出明顯的正相關，兩組數(shù)據(jù)對比均差異顯著，具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。由此可見，酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒在檢測滴度麻疹抗體時出現(xiàn)假陰性的幾率較高，檢測高滴度麻疹抗體時，兩種方法敏感性接近，可用于麻疹人群的抗體水平檢測。因此，在面臨患者不同生命體征時，酶聯(lián)免疫吸附試驗和中和抗體實驗都有著不同的優(yōu)勢和缺陷，應根據(jù)具體的實際情況進行比較和分析。

參考文獻

[1]傅燕，許國章，董紅軍等.酶聯(lián)免疫吸附試驗與中和抗體試驗檢測麻疹抗體比較研究[J].中國預防醫(yī)學雜志，2011，12（07）：1024-1026.

[2]張金芳，丁曉光，王建國等.酶聯(lián)免疫吸附試驗和血球凝集抑制試驗檢測健康人群麻疹抗體比較[J].中國計劃免疫，2010，02（05）：6-8.

[3]張晉琳，王保生，許曉國等.血凝抑制試驗與酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測麻疹抗體兩方法的比較[J].疾病監(jiān)測，2014，12（10）：472-473.