多藥耐藥基因1和P糖蛋白及谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶在難治性癲癇中的表達(dá)研究

于云莉，史夢(mèng)婷，楚蘭

多藥耐藥基因1和P糖蛋白及谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶在難治性癲癇中的表達(dá)研究

于云莉，史夢(mèng)婷，楚蘭

目的通過(guò)對(duì)難治性癲癇患者外周血中多藥耐藥基因1(MDR1)、P糖蛋白(P－gp)及谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST－pi)的檢測(cè)探討難治性癲癇的發(fā)病機(jī)制;檢測(cè)在不同發(fā)作類型、V－EEG中癲癇樣放電部位及用藥方式的患者中此3項(xiàng)指標(biāo)的水平。方法選取2012年3月—2013年3月貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院臨床確診的散發(fā)性的難治性癲癇患者31例(難治性癲癇組)，另選擇同期在本院接受抗癲癇藥物控制良好的癲癇患者33例(治療有效組)，熒光定量法檢測(cè)外周血MDR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血MDR1的表達(dá)產(chǎn)物P－gp的表達(dá)。結(jié)合臨床特點(diǎn)與長(zhǎng)程視頻腦電圖研究癲癇患者的發(fā)作類型、異常放電部位及用藥方式，比較不同類型癲癇患者以上3項(xiàng)指標(biāo)的表達(dá)情況。結(jié)果難治性癲癇組MDR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量和白細(xì)胞P－gp高于治療有效組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。無(wú)論是治療有效組還是難治性癲癇組，不同發(fā)作類型患者M(jìn)DR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量及白細(xì)胞P－gp比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。不同V－EEG異常放電患者M(jìn)DR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量及白細(xì)胞P－gp比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。不同用藥方式患者M(jìn)DR1基因相對(duì)表達(dá)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);不同用藥方式患者GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量和白細(xì)胞P－gp比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中2種和3種用藥方式GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量均高于1種用藥方式，3種用藥方式白細(xì)胞P－gp高于1種和2種用藥方式，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論癲癇患者外周血中GST－pi、P－gp或可成為難治性癲癇聯(lián)合用藥的耐藥指標(biāo)之一;癲癇患者外周血中MDR1、GST－pi及P－gp與癲癇發(fā)作類型、癲癇樣放電在V－EEG中的各種分布情況無(wú)明顯相關(guān)性。

難治性癲癇;基因，MDR;P糖蛋白;谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶

于云莉，史夢(mèng)婷，楚蘭．多藥耐藥基因1和P糖蛋白及谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶在難治性癲癇中的表達(dá)研究［J］．中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2015，18(32):3944－3947．［www.chinagp.net］

Yu YL，ShiMT，Chu L．Expression of MDR1，P－gp and GST－pi in patients with refractory epilepsy［J］．Chinese General Practice，2015，18(32):3944－3947．

癲癇是神經(jīng)科疾病中一類常見病，據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前我國(guó)約有癲癇患者900余萬(wàn)人，且每年新增病例50萬(wàn)人。大多數(shù)癲癇患者的發(fā)作經(jīng)正規(guī)治療得到有效控制，但仍有30%～40%的患者經(jīng)抗癲癇藥物(antiepileptic drugs，AEDs)治療無(wú)效，稱為難治性癲癇或耐藥性癲癇(intractable epilepsy，IE)［1］。國(guó)際抗癲癇聯(lián)盟(ILAE)專項(xiàng)小組達(dá)成了對(duì)難治性癲癇的核心定義:2種正確選擇、可耐受的AEDs經(jīng)足夠療程及劑量的單藥或聯(lián)合用藥仍未能控制發(fā)作的癲癇［2］。而其發(fā)生機(jī)制尚不清楚，并且缺乏明確的生物學(xué)標(biāo)志物，給其早期診斷帶來(lái)一定困難。多藥耐藥基因(multidrug resistance，MDR)是與IE有關(guān)的耐藥基因，其中MDR1［3］起主要作用。研究發(fā)現(xiàn)IE患者腦組織中有MDR1過(guò)度表達(dá)的現(xiàn)象［4］。P糖蛋白(P－gp)的高表達(dá)被認(rèn)為是IE耐藥非常關(guān)鍵的因素［5］，在研究IE患者大腦中發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞/星形膠質(zhì)細(xì)胞中高水平的谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST－pi)，提示GST－pi可抵抗AEDs治療［6］。GST－pi在匹魯卡品誘導(dǎo)的癲癇大鼠腦組織及外周血中表達(dá)的相關(guān)研究，表明GST－pi在外周血表達(dá)方面的變化與在腦組織中有相同模式［7］。本課題選取了貴州地區(qū)散發(fā)性難治性癲癇患者和應(yīng)用抗癲癇藥物治療有效的癲癇患者進(jìn)行外周血中MDR1、MDR1的表達(dá)產(chǎn)物P－gp及GST－pi的檢測(cè)，研究難治性癲癇的發(fā)病機(jī)制及其相關(guān)性，并結(jié)合癲癇患者的異常放電部位、發(fā)作類型和用藥方式，比較以上3個(gè)指標(biāo)的表達(dá)情況。

1　對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象在知情同意的原則基礎(chǔ)上，選取2012年3月—2013年3月貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院臨床確診的散發(fā)性的難治性癲癇患者31例(難治性癲癇組)，其中男15例，女16例;年齡4～48歲，平均年齡(23.2 ±16.4)歲?；颊叻想y治性癲癇的診斷標(biāo)準(zhǔn)，即規(guī)范使用2種及以上抗癲癇藥物2年以上仍不能終止發(fā)作，并由神經(jīng)內(nèi)科副主任醫(yī)師及以上專家進(jìn)行病史詢問及詳細(xì)的體格檢查。排除診斷錯(cuò)誤、發(fā)作分型不確切、選藥不當(dāng)、用藥量不足、依從性差者。另選擇同期在本院接受AEDs控制良好的癲癇患者33例(治療有效組)，其中男16例，女17例;年齡4～32歲，平均年齡(20.4 ±10.4)歲。兩組患者彼此間無(wú)血緣關(guān)系，均為貴州本地居民。兩組性別、年齡間比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2＜0.001，P＞0.05;t=0.821，P＞0.05)。

1.2分組方法發(fā)作形式按照1981年ILAE分類和名詞委員會(huì)推薦的癲癇發(fā)作的分類方案進(jìn)行發(fā)作癥狀的分類，主要表現(xiàn)為簡(jiǎn)單部分性發(fā)作、復(fù)雜部分性發(fā)作、部分性繼發(fā)強(qiáng)直陣攣性發(fā)作、失神發(fā)作及肌陣攣發(fā)作。根據(jù)患者發(fā)作間期的V－EEG中癲癇樣放電部位的不同，又分半球性、兩側(cè)對(duì)稱性、局灶性、孤立多發(fā)性及廣泛性分布?；颊叻肁EDs(苯妥英鈉、丙戊酸鈉、卡馬西平、奧卡西平、拉莫三嗪、托吡酯、左乙拉西坦等)的方式分單藥治療、2種或3種藥物聯(lián)合治療，聯(lián)合用藥選用作用機(jī)制不同、很少或沒有藥物間相互作用的藥物進(jìn)行配伍。

1.3熒光定量法檢測(cè)外周血MDR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量抽取患者清晨空腹靜脈血4 m l，于EDTA抗凝管中，置－70℃保存，以備用。提取RNA。實(shí)驗(yàn)過(guò)程: GST－pi上游引物:5'－GGACGGAGACCTCACCCTG－3';GST－pi下游引物:5'－TTGCCCGCCTCATAGTTGG－3';擴(kuò)增片段大小:177 bp。MDR1上游引物:5'－TATTCAACTATCCCACCCGAC－3';MDR1下游引物:5'－ATGCCCAGGTGTGCTCGGA－3';擴(kuò)增片段大小:204 bp。目的基因Real Time－PCR檢測(cè)引物序列由康為世紀(jì)生物科技有限公司設(shè)計(jì)合成。用HiFi－MMLV cDNA第一鏈合成試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，實(shí)驗(yàn)操作按產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行。用LC－480Ⅱ型熒光定量PCR儀，采用2－ΔΔCt法進(jìn)行數(shù)據(jù)的相對(duì)定量分析。根據(jù)Real Time－PCR原始檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算出各樣品的目的基因相對(duì)定量結(jié)果。

1.4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血MDR1的表達(dá)產(chǎn)物P－gp的表達(dá)在檢測(cè)管和同型對(duì)照管中加入肝素抗凝血100 μl，檢測(cè)管中加入P－gp單克隆抗體CD243－PE20，對(duì)照管中加入lgG2a－PE20，混合后室溫下避光孵育15 min。加入溶血素溶血10 min。磷酸鹽緩沖液洗滌2次。用FACSCANTOⅡ型流式細(xì)胞儀以淋巴細(xì)胞設(shè)門，收集1萬(wàn)個(gè)白細(xì)胞，用CELL QUEST統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算P－gp表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以(±s)表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析，組間兩兩比較LSD－t法;計(jì)數(shù)資料的分析采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組MDR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量和白細(xì)胞P－gp比較難治性癲癇組MDR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量和白細(xì)胞P－gp高于治療有效組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01，見表1)。

表1　難治性癲癇組和治療有效組MDR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量及白細(xì)胞P－gp比較(±s)Table 1 Comparison ofMDR1，GST－piand P－gp ofwhite cellsbetweenthe two groups

表1　難治性癲癇組和治療有效組MDR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量及白細(xì)胞P－gp比較(±s)Table 1 Comparison ofMDR1，GST－piand P－gp ofwhite cellsbetweenthe two groups

組別例數(shù)MDR1基因相對(duì)表達(dá)量GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量白細(xì)胞P－gp (%) 33 0.82±0.15 0.31±0.22 0.06±0.03難治性癲癇組31 1.36±0.14 0.58±0.26 0.10±0.08 t治療有效組688.404 16.364 5.091 P值值＜0.001＜0.001 0.009

2.2不同發(fā)作類型患者M(jìn)DR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量及白細(xì)胞P－gp比較無(wú)論是治療有效組，還是難治性癲癇組，不同發(fā)作類型患者M(jìn)DR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量及白細(xì)胞P－gp比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05，見表2、3)。

表2　治療有效組中不同發(fā)作類型患者M(jìn)DR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量及白細(xì)胞P－gp比較(±s)Table 2 Comparison of MDR1，GST－pi and P－gp of white cells among patients with different epilepsy seizure types in the effective group

表2　治療有效組中不同發(fā)作類型患者M(jìn)DR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量及白細(xì)胞P－gp比較(±s)Table 2 Comparison of MDR1，GST－pi and P－gp of white cells among patients with different epilepsy seizure types in the effective group

發(fā)作類型例數(shù)aMDR1基因相對(duì)表達(dá)量GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量白細(xì)胞P－gp (%) 5 0.87±0.30 0.35±0.16 0.10±0.01復(fù)雜部分性6 0.81±0.13 0.42±0.15 0.06±0.04簡(jiǎn)單部分性部分性繼發(fā)強(qiáng)直陣攣性17 0.82±0.14 0.40±0.19 0.06±0.03 F 0.817 0.862 0.469注:a為余5例患者中4例為失神發(fā)作，1例為肌陣攣發(fā)作0.385 0.321 0.914 P值值

表3　難治性癲癇組中不同發(fā)作類型患者M(jìn)DR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量及白細(xì)胞P－gp比較(±s)Table 3 Comparison of MDR1，GST－pi and P－gp of white cells among patientswith different epilepsy seizure types in the refactory group

表3　難治性癲癇組中不同發(fā)作類型患者M(jìn)DR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量及白細(xì)胞P－gp比較(±s)Table 3 Comparison of MDR1，GST－pi and P－gp of white cells among patientswith different epilepsy seizure types in the refactory group

發(fā)作類型例數(shù)MDR1基因相對(duì)表達(dá)量GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量白細(xì)胞P－gp (%) 2 1.29±0.11 0.74±0.01 0.13±0.06復(fù)雜部分性6 1.36±0.17 0.74±0.16 0.11±0.03簡(jiǎn)單部分性部分性繼發(fā)強(qiáng)直陣攣性23 1.38±0.15 0.66±0.17 0.10±0.04 F 0.141 0.668 1.525 P值值0.869 0.521 0.253

2.3不同V－EEG異常放電患者M(jìn)DR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量及白細(xì)胞P－gp比較不同V－EEG異常放電患者M(jìn)DR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量及白細(xì)胞P－gp比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05，見表4)。

表4　不同V－EEG異常放電患者M(jìn)DR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量及白細(xì)胞P－gp比較(±s)Table 4 Comparison of MDR1，GST－pi and P－gp of white cells amongpatients with different V－EEG abnormal discharge areas

表4　不同V－EEG異常放電患者M(jìn)DR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量及白細(xì)胞P－gp比較(±s)Table 4 Comparison of MDR1，GST－pi and P－gp of white cells amongpatients with different V－EEG abnormal discharge areas

V－EEG異常放電例數(shù)MDR1基因相對(duì)表達(dá)量GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量白細(xì)胞P－gp (%) 6 0.85±0.13 0.24±0.22 0.10±0.05孤立多發(fā)性2 0.78±0.13 0.46±0.13 0.04±0.01廣泛性13 0.83±0.22 0.39±0.27 0.07±0.03局灶性20 0.62±0.12 0.45±0.29 0.09±0.04兩側(cè)對(duì)稱性23 0.84±0.14 0.39±0.29 0.08±0.04 F半球性0.827 0.667 0.471 P值值0.520 0.617 0.757

2.4不同用藥方式患者M(jìn)DR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量及白細(xì)胞P－gp比較不同用藥方式患者M(jìn)DR1基因相對(duì)表達(dá)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);不同用藥方式患者GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量和白細(xì)胞P－gp比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中2種和3種用藥方式GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量均高于1種用藥方式，3種用藥方式白細(xì)胞P－gp高于1種和2種用藥方式，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，見表5)。

表5　不同用藥方式患者M(jìn)DR1、GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量及白細(xì)胞P－gp比較Table 5 Comparison of MDR1，GST－pi and P－gp of white cells among patients taking different kinds ofmedicine

3　討論

MDR是20世紀(jì)70年代最早被Biedler等［8］發(fā)現(xiàn)的與IE有關(guān)的耐藥基因。外周血MDR1基因mRNA表達(dá)水平的監(jiān)測(cè)可以作為評(píng)價(jià)癲癇耐藥的一項(xiàng)指標(biāo)［9－10］。P－gp由MDR1編碼，是一種細(xì)胞膜上固有的一類跨膜磷脂糖蛋白［11］。P－gp是能量依賴性外排泵，可將親脂性藥物泵出細(xì)胞外，與細(xì)胞的分泌和胞吐作用有關(guān)［12］。張玉琴等［13］通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)得出外周血P－gp在IE患兒中表達(dá)增強(qiáng)，可作為IE患兒耐藥性的客觀指標(biāo); P－gp表達(dá)陽(yáng)性的初診癲癇患兒多轉(zhuǎn)為IE，P－gp可作為預(yù)測(cè)IE患兒的客觀指標(biāo)。

GST－pi可與多種親脂性物質(zhì)直接結(jié)合，轉(zhuǎn)化為極性更高的親水物質(zhì)，以利排出體外。國(guó)內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)GST－pi表達(dá)增高會(huì)導(dǎo)致IE的發(fā)生，GST－pi在組織和血清中均能檢測(cè)，且血清中GST－pi對(duì)機(jī)體沒有侵襲性，大大方便臨床的應(yīng)用［14］。龔玉來(lái)等［15］通過(guò)研究GST－pi在IE患者術(shù)后腦組織的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)量明顯高于對(duì)照組。

筆者在前期研究中發(fā)現(xiàn)IE患者與AEDs治療有效組及健康組比較，MDR1、P－gp以及GST－pi在外周血中存在高表達(dá)的情況，從而證實(shí)以上指標(biāo)可以作為癲癇患者預(yù)測(cè)IE的外周生物學(xué)指標(biāo)。但是針對(duì)不同發(fā)作形式、不同放電模式癲癇患者而言以上指標(biāo)表達(dá)有無(wú)區(qū)別，以及能否作為不同用藥方式的指導(dǎo)指標(biāo)目前國(guó)內(nèi)外尚未見相關(guān)報(bào)道。

本研究將MDR1基因、P－gp及GST－pi基因結(jié)合臨床與V－EEG，研究不同癲癇發(fā)作類型、異常放電部位這3個(gè)指標(biāo)的表達(dá)情況，結(jié)果提示以上3個(gè)指標(biāo)與癲癇發(fā)作類型及癲癇樣放電在V－EEG中的各種分布情況無(wú)差異。提示不同發(fā)作形式及異常放電的分布形式不能作為預(yù)測(cè)癲癇是否難治的指標(biāo)。

癲癇的藥物治療原則中很重要的一條就是首選單藥治療。但對(duì)于IE患者，癲癇?？漆t(yī)師會(huì)謹(jǐn)慎考慮聯(lián)合用藥。聯(lián)合用藥也同樣有相應(yīng)的原則:需選用不同作用機(jī)制的藥物;選用很少或沒有相互作用的藥物;具有相對(duì)少的不良反應(yīng)。聯(lián)合用藥的數(shù)量越多，藥物之間的相互作用就越多，也會(huì)越復(fù)雜，更多的不良反應(yīng)也就隨之而來(lái)，如果藥物添加不當(dāng)，甚至?xí)斐蒊E的結(jié)局。本研究通過(guò)比較AEDs的聯(lián)合治療與單藥治療，發(fā)現(xiàn)服用3種AEDs與服用2種AEDs治療的癲癇患者外周血中GST－pi基因相對(duì)表達(dá)量均高于只服用1種AEDs治療的癲癇患者。服用3種AEDs治療的癲癇患者外周血中白細(xì)胞P－gp高于服用2種和1種AEDs治療的癲癇患者。針對(duì)IE患者常常是2種及以上的AEDs治療，因此如果在聯(lián)合用藥過(guò)程中出現(xiàn)P－gp及GST－pi基因的高表達(dá)，需要及時(shí)調(diào)整用藥方案，防止因?yàn)槁?lián)合用藥本身誘導(dǎo)的IE產(chǎn)生。

本研究樣本量較小，且沒有將不同的AEDs分類，沒有嚴(yán)格劃分不同的用藥時(shí)間等，所以仍需繼續(xù)改進(jìn)，擴(kuò)大樣本量，按藥物種類不同組合方式進(jìn)行分組，進(jìn)一步檢測(cè)何種聯(lián)合用藥方式治療更為合理，從而指導(dǎo)臨床。

［1］Kwan P，Sander JW．The natural history of epilepsy:an epidemiological view［J］．J Neurol Neurosurg Psychiatry，2004，75(10):1376－1381．

［2］洪楨，洪震，周東．耐藥性癲癇的定義:國(guó)際抗癲癇聯(lián)盟治療策略委員會(huì)專項(xiàng)工作組統(tǒng)一提案［J］．中華神經(jīng)科雜志，2010，43 (7):487－492．

［3］Biedler JL．Genetic aspects of multidrug resistance［J］．Cancer，1992，70(6 Suppl):1799－1809．

［4］Dombrowski SM，Desai SY，Marroni M，et al．Overexpression of multiple drug resistance genes in endothelial cells from patients with refractory epilepsy［J］．Epilepsia，2001，42(12):1501－1506．

［5］夏敏，武士京．原發(fā)性癲癇耐藥的細(xì)胞和分子機(jī)制研究進(jìn)展［J］．臨床神經(jīng)病學(xué)雜志，2008，21(3):238－239．

［6］Fukushima Y，Seo T，Hashimoto N，et al．Glutathione－S－transferase(GST)M1 null genotype and combined GSTM1 and GSTT1 null genotypes are risk factors for increased serum gammaglutamyltransferase in valproic acid－treated patients［J］．Clin Chim Acta，2008，389(1/2):98－102．

［7］Ueda K，Ishitsu T，Seo T，etal．Glutathione S－transferase M1 null genotype as a risk factor for carbamazepine－induced mild hepatotoxicity［J］．Pharmacogenomics，2007，8(5):435－442．

［8］Biedler JL，Riehm H．Cellular resistance to actinomycin D in Chinese hamster cells in vitro:cross－resistance，radioautographic，and cytogenetic studies［J］．Cancer Res，1970，30(4):1174－1184．

［9］鄭雪平，譚蘭，宋敬卉．難治性癲癇患者外周血中MDR1基因的表達(dá)及臨床意義［J］．中國(guó)神經(jīng)精神疾病雜志，2006，32(5): 454－456．

［10］龐保東，董琰，張潤(rùn)春．難治性癲癇患兒多藥耐藥基因的表達(dá)及意義［J］．臨床兒科雜志，2009，27(11):1023－1025．

［11］Potschka H，F(xiàn)edrowitz M，L?scher W．P－glycoprotein and multidrug resistance－associated protein are involved in the regulation of extracellular levels of the major antiepileptic drug carbamazepine in the brain［J］．Neuroreport，2001，12(16): 3557－3560．

［12］L?scher W，Potschka H．Role of multidrug transporters in pharmacoresistance to antiepileptic drugs［J］．J Pharmacol Exp Ther，2002，301(1):7－14．

［13］張玉琴，許俐，李東．兒童難治性癲癇外周血P糖蛋白的表達(dá)及藥物干預(yù)［J］．臨床兒科雜志，2009，27(11):1026－1029．

［14］Deng X，Jia H，Yang Z，et al．Correlation study on expression of GST－πprotein in brain tissue and peripheral blood of epilepsy rats induced by pilocarpine［J］．JHuazhong Univ Sci Technolog Med Sci，2011，31(5):701－704．

［15］龔玉來(lái)，王學(xué)峰，龔云，等．谷胱苷肽硫轉(zhuǎn)移酶在耐藥性癲癇腦組織中的表達(dá)［J］．中華神經(jīng)外科雜志，2006，22(8): 510－512．

(本文編輯:賈萌萌)

Expression of MDR1，P－gp and GST－pi in Patients W ith Refractory Epilepsy

YU Yun－li，SH IMeng－ting，CHULan．Department of Neurology，the Affiliated Hospital of Guizhou Medical University，Guiyang 550001，China

Objective To investigate the pathogenesis of refractory epilepsy by detecting the expression of MDR1，P－gp and GST－pi in peripheral blood of patientswith refractory epilepsy and to detect the expression levels of the three indexes in patientswith different types of epilepsy seizure，different epileptic discharge areas shown by V－EEG and different types of medication．M ethods We enrolled 31 patientswho were definitely diagnosed with sporadic refractory epilepsy in the Affiliated Hospital of Guizhou Medical University from March 2012 to March 2013 as the refractory group.Another 33 epilepsy patientswho were treated well by antiepileptic drug in the same period were also enrolled as the effective group.Fluorescentquantitationmethod was employed to detect the change of relative gene expression ofMDR1 and GST－pi in peripheralblood，and flow cytometry was employed to detect the expression of P－gp，an expression product of MDR1 in peripheral blood.Comparison wasmade in the expression of the three indexes among patients with different types of epilepsy in combination with clinical features，types of epilepsy seizure and abnormal discharge areas shown by long－term video EEG and differentmedications．Results Refractory group washigher(P＜0.01)than effective group in the gene relative expression ofMDR1 and GST－piand P－gp levelofwhitecells．The patients with different epilepsy seizure types in two groups were no significantly different(P＞0.05)in the gene relative expression of MDR1 and GST－pi and P－gp level of white cells.Patients with different abnormal discharge areas shown by V－EEG were not significantly different(P＞0.05)in the gene relative expression ofMDR1 and GST－piand P－gp level of white cells.Patients with different medications were not significantly different(P＞0.05)in the gene relative expression of MDR1;patients with differentmedications were significantly different(P＜0.05)in the gene relative expression of GST－pi and P－gp level ofwhite cells，with patients taking 2 or 3 kinds ofmedicine higher(P＜0.05)than patients taking 1 kind of medicine in the gene relative expression of GST－pi and patients taking 3 kinds ofmedicine higher(P＜0.05)than patients taking 1 or2 kindsofmedicine in expression of P－gp ofwhite cells．Conclusion GST－piand P－gp in the peripheral blood of epilepsy patientsmay have the potential to become drug resistance indexes of the combined drug therapy for refractory epilepsy; the levels of MDR1，GST－pi and P－gp in the peripheral blood of epilepsy patients have no obvious relevancy with the type of epilepsy seizure and the various distribution of epilepsy discharge areas shown by V－EEG．

Intractable epilepsy;Genes，MDR;P－glycoprotein;Glutathione transferase

R 742.1

A

10.3969/j.issn.1007－9572.2015.32.012

貴州省科學(xué)技術(shù)基金資助項(xiàng)目(黔科合J字［2009］2193)

550001貴州省貴陽(yáng)市，貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科

于云莉，550001貴州省貴陽(yáng)市，貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;E－mail:yuyunli@126.com

2014－07－08;

2015－09－15)