蜀葵花中二氫黃酮類成分的分離與結(jié)構(gòu)鑒定*

晁利平，陳　秋，石萍萍，李曉霞，王濤，張　祎

（天津市中藥化學(xué)與分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300193）

蜀葵花中二氫黃酮類成分的分離與結(jié)構(gòu)鑒定*

晁利平，陳秋，石萍萍，李曉霞，王濤，張祎

（天津市中藥化學(xué)與分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300193）

［目的］繼續(xù)研究蜀葵花［Althaea rosea（Linn.）Cavan.］中的化學(xué)成分。［方法］采用硅膠、ODS等柱色譜及高效液相色譜（HPLC）手段對(duì)蜀葵花中的二氫黃酮類成分進(jìn)行分離純化，并通過波譜分析方法鑒定單體成分的結(jié)構(gòu)。［結(jié)果］從蜀葵花的95%乙醇提取物中分離鑒定了8個(gè)二氫黃酮類成分，分別為（2R，3R）-二氫山柰酚-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、（2R，3R）-（+）-花旗松素（2）、（2R，3R）-花旗松素-3′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3）、（2R，3R）-花旗松素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）、（2R，3R）-二氫楊梅素-3′-O-葡萄糖苷（5）、（2R，3R）-3，5，6，7，4′-pentahydroxyflavanonol（6）、（2S）-4′，5，7-三羥基黃烷酮（7）、南酸棗苷（8）。［結(jié)論］3～6為首次從蜀葵屬中分離得到的化合物，并利用圓二色光譜確定了所有化合物的絕對(duì)構(gòu)型。

蜀葵花；化學(xué)成分；二氫黃酮；結(jié)構(gòu)鑒定；絕對(duì)構(gòu)型

DOI：10.11656/j.issn.1673-9043.2015.04.11

蜀葵花［Althaea rosea（Linn.）Cavan.］是錦葵科蜀葵屬植物［1］。其花性涼，味甘甜，具有和血潤燥、通利二便、發(fā)汗透疹之功，用于治療吐血、衄血、燒燙傷、月經(jīng)過多、赤白帶下、痔瘡及小兒風(fēng)疹等癥［2］。臨床上用于治療心血管及血栓性疾病，同時(shí)也可用于降壓、鎮(zhèn)痛抗炎、抑菌等［3-5］。筆者在繼續(xù)對(duì)維藥蜀葵花95%乙醇提取物的化學(xué)成分研究的過程中，又分離鑒定了8個(gè)二氫黃酮類單體成分，參考文獻(xiàn)［6-11］，利用多種波譜學(xué)方法對(duì)它們進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定。其中，3～6為首次從蜀葵屬中分離得到的化合物。見圖1。

1　儀器與材料

Bruker 500 MHz NMR超導(dǎo)核磁共振波譜儀（瑞士Bruker公司，AvanceⅢ500MR）。正相柱色譜用硅膠（48～74 μm）及薄層色譜用硅膠H（10～40 μm）產(chǎn)自青島海洋化工廠；ODS（Chromatorex ODS MB，40～75μm）產(chǎn)自日本Fuji SilisiaChemical公司；HPLC用分析柱［Cosmosil 5C18-MS-II（250 mm×4.6 mm，5 μm）］及制備柱［Cosmosil 5C18-MS-II（250 mm× 20 mm，5 μm）］均產(chǎn)自日本Nacalai Tesque公司。分析純、色譜純?cè)噭┤缂状?、乙腈、丙酮、氯仿等購自天津康科德科技有限公司。蜀葵花采自新疆吉木薩爾（人工種植），由天津中醫(yī)藥大學(xué)李天祥副教授鑒定為蜀葵（A.rosea L.）的干燥花。

圖1　從蜀葵花中分離得到的二氫黃酮

2　提取與分離

取干燥蜀葵花（5.0 kg），粉碎，經(jīng)95%乙醇加熱回流提取，減壓回收得到的浸膏經(jīng)D101大孔吸附樹脂，用H2O、70%乙醇、95%乙醇依次洗脫，得到3者洗脫物分別為171、169、12 g。70%乙醇洗脫物經(jīng)硅膠柱層析［CHCl3-MeOH（100∶0→100∶5，v/v）→CHCl3-MeOH-H2O（10∶3∶1→6∶4∶1，v/v/v，下層）］，得到12個(gè)組分（Fr.1～12）。Fr.2（8.6 g）經(jīng)硅膠柱層析及高效液相制備，得到（2R，3R）-花旗松素（2，176.1 mg）和（2S）－4′，5，7-三羥基黃烷酮（7，10.6 mg）。Fr.4（10.0 g）經(jīng)高效液相反復(fù)制備，得到（2R，3R）-3，5，6，7，4′-pentahydroxyflavanonol（6，13.5 mg）和南酸棗甙（8，42.6 mg）。Fr.7（4.9 g）經(jīng)ODS柱層析及高效液相制備，得到（2R，3R）－二氫山奈酚－4′－O－β－D－吡喃葡萄糖苷（1，36.0 mg）和（2R，3R）-花旗松素-3′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3，5.6 mg）。Fr.10（5.0 g）經(jīng)Sephadex LH-20柱層析及高效液相制備，得到（2R，3R）-花旗松素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4，13.2 mg）和（2R，3R）－二氫楊梅素-3′-O-葡萄糖苷（5，18.1 mg）。

3　結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色粉末。低分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z473［M+Na］+。CD［MeOH，nm，（Δε）］：290（-12.3）、328（+7.3）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）譜中δ 4.61（1H，d，J=11.0 Hz，H-3）、5.13（1H，d，J=11.0 Hz，H-2）、5.87（1H，d，J=2.0 Hz，H-8）、5.92（1H，d，J=2.0 Hz，H-6）、7.07（2H，d，J= 8.5 Hz，H-3′，5′）、7.44（2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′）及11.90（1H，s，5-OH）等氫信號(hào)提示其母核為二氫山柰酚。由1H-NMR譜中δ 4.91（1H，d，J=7.5 Hz）與13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）譜中一組數(shù)據(jù)（δC：60.6、69.8、73.1、76.5、76.9、100.2）相結(jié)合，推知結(jié)構(gòu)中含有1個(gè)β-D-葡萄糖。其1H、13C-NMR（表1）譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］相對(duì)照，確定其平面結(jié)構(gòu)為二氫山柰酚-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。結(jié)合CD譜數(shù)據(jù)［13］，首次鑒定該化合物為（2R，3R）-二氫山柰酚-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷［（2R，3R）-dihydrokaempferol-4′-O-β-D-glucopyranoside）］。

化合物2：淡黃色粉末。低分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z303［M+H］-。CD［MeOH，nm，（Δε）］：301（-17.9）、330（+8.5）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）譜：1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）：δ 4.51（1H，d，J=11.0 Hz，H-3）及4.99（1H，d，J=11.0 Hz，H-2）、5.87（1H，br.s，H-8）、5.92（1H，br.s，H-6）、6.77（2H，m，H-5′and 6′）、6.90（1H，br.s，H-2′）、11.70（1H，br.s，5-OH）。綜上所述，并與文獻(xiàn)［13］作對(duì)照，鑒定該化合物為（2R，3R）-（＋）-花旗松素［（2R，3R）－（＋）－taxifolin］。

化合物3：淡黃色粉末。低分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z465［M-H］-。CD［MeOH，nm，（Δε）］：300（-14.9）、329（+5.8）。1H-NMR（500 MHz， DMSO-d6）譜中δ 4.58（1H，d，J=11.0 Hz，H-3）、5.02（1H，d，J=11.0 Hz，H-2）、5.87（1H，br.s，H-8）、5.91（1H，br.s，H-6）、6.84（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′）、7.03（1H，br.d，ca.J=9 Hz，H-6′）、7.26（1H，br.s，H-2′）、11.91（1H，br.s，5-OH）等質(zhì)子信號(hào)提示其母核為二氫槲皮素。δ 4.71（1H，d，J=7.0 Hz）結(jié)合13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）譜中δ 60.6、69.7、73.2、75.9、77.1及102.1碳信號(hào)，提示結(jié)構(gòu)中含有1個(gè)β-D-葡萄糖基片段。在HMBC譜中可以觀測(cè)到δH7.26（H-2′）與δC144.8（C-3′）及147.2（C-4′）；δH7.03（H-6′）與δC147.2（C-4′）；δH4.71（H-1″）與δC144.8（C-3′）之間的遠(yuǎn)程相關(guān)信號(hào)。其1H、13C-NMR（表1）譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］相對(duì)照，并結(jié)合CD譜數(shù)據(jù)［13］，鑒定該化合物為（2R，3R）-花旗松素-3′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷［（2R，3R）-taxifolin-3′-O-β-D-glucopyranoside］。

化合物4：淡黃色粉末。低分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 467.119 6［M+H］+。CD［MeOH，nm，（Δε）］：306（-16.9）、339（+5.4）。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）譜中，δ 4.55（1H，d，J=11.5 Hz，H-3）、4.95（1H，d，J=11.5 Hz，H-2）、6.20（1H，br.s，H-6）、6.22（1H，br.s，H-8）、6.80（1H，d，J=8.0 Hz，H-5′）、6.85（1H，br.d，ca.J=8 Hz，H-6′）、6.97（1H，br.s，H-2′）等質(zhì)子信號(hào)提示其母核為二氫槲皮素。此外，結(jié)構(gòu)中還含有1個(gè)β-D-葡萄糖基［δ 4.97（1H，d，J=7.5 Hz，H-1"）］。在HMBC譜中可以觀測(cè)到δH4.97（H-1"）與δC167.4（C-7）之間存在遠(yuǎn)程信號(hào)，提示該葡萄糖與母核的7位相連。其1H、13C-NMR（表1）譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］相對(duì)照，并結(jié)合CD譜數(shù)據(jù)［13］，鑒定該化合物為（2R，3R）-花旗松素-7－O－β－D－吡喃葡萄糖苷［（2R，3R）－taxifolin－7－O－β－D-glucopyranoside］。

化合物5：淡黃色粉末。低分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z505［M+H］+。CD［MeOH，nm，（Δε）］：290（-18.1）、328（+5.9）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）譜：δ 4.49（1H，d，J=11.5 Hz，H-3）、4.64（1H，d，J=7.0 Hz，H-1"）、4.94（1H，d，J=11.5 Hz，H-2）、5.86（1H，br.s，H-8），5.90（1H，br.s，H-6），6.64（1H，d，J=1.5 Hz，H-6′），6.76（1H，d，J=1.5 Hz，H-2′），11.90（1H，br.s，5-OH）。其1H、13C-NMR（表1）譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］相對(duì)照，并結(jié)合CD譜數(shù)據(jù)［13］，鑒定化合物為（2R，3R）-二氫楊梅素-3′-O-葡萄糖苷［（2R，3R）-dihydromyricetin-3′-O-glucoside］。

化合物6：淡黃色粉末。低分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z305［M+H］+。CD［MeOH，nm，（Δε）］：293（-16.8）、328（+5.1）。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）譜：δ 4.53（1H，d，J=11.5 Hz，H-3）、4.97（1H，d，J=11.5 Hz，H-2）、5.87（1H，s，H-8）、6.83（2H，d，J=8.0 Hz，H-3′，5′）、7.35（2H，d，J=8.0 Hz，H-2′，6′）。其1H、13C-NMR（表1）譜結(jié)合2D NMR譜中的相關(guān)信號(hào)及CD譜數(shù)據(jù)［13］，鑒定該化合物為（2R，3R）－3，5，6，7，4′－pentahydroxyflavanonol。

化合物7：淡黃色粉末。低分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z273［M+H］+。CD［MeOH，nm，（Δε）］：289（-28.1）、326（+8.6）。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）譜：δ［2.75（1H，dd，J=2.0、17.0 Hz），3.12（1H，dd，J=13.0、17.0 Hz），H2-3］，5.33（1H，dd，J= 2.0、13.0 Hz，H-2），5.90（1H，br.s，H-8），5.91（1H，br.s，H-6），6.84（2H，d，J=8.0 Hz，H-3′，5′），7.32（2H，d，J=8.0 Hz，H-2′，6′）。綜上所述，并與文獻(xiàn)［13］相對(duì)照，鑒定該化合物為與（2S）-4′，5，7-三羥基黃烷酮［（2S）-4′，5，7-trihydroxy flavanone］。

化合物8：淡黃色粉末。低分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z435［M+H］+。CD［MeOH，nm，（Δε）］：285（-27.4）、328（+8.8）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）譜中δ［2.73（1H，dd，J=3.0、17.0 Hz）、3.23（1H，m），H2-3］，5.52（1H，dd，J=3.0、12.5 Hz，H-2）、5.89（1H，d，J=2.0 Hz，H-8）、5.91（1H，d，J=2.0 Hz，H-6）、7.08（2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′）、7.45（2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′）、12.13（1H，br.s，5-OH）等信號(hào)提示該化合物母核為二氫芹菜素。δ 4.90（1H，d，J=7.5 Hz，H-1"），結(jié)合13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）譜中δ 60.6、69.6、73.1、76.5、77.0、100.2等一組碳信號(hào)，提示結(jié)構(gòu)中含有1個(gè)β-D-葡萄糖基。在HMBC譜中，可以觀測(cè)到δH4.90（1H，H-1′）、7.08（H-3′，5′）及7.45（H-2′，6′）均與δC157.5（C-4′）之間的氫碳遠(yuǎn)程相關(guān)信號(hào)，提示該葡萄糖與二氫芹菜素母核的4′位相連。其1H、13C-NMR（表1）譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］相對(duì)照，并結(jié)合CD譜數(shù)據(jù)［13］，鑒定該化合物為南酸棗苷（choerospondin）。

化合物1～8中13C-NMR數(shù)據(jù)見表1。

表1　化合物1～8中13C-NMR數(shù)據(jù)

4　結(jié)果與討論

近幾年來，國內(nèi)外學(xué)者對(duì)蜀葵花的研究依然比較少?；瘜W(xué)方面，張祎等［18］采用正相硅膠、反相ODS、Sephadex LH-20等柱色譜及高效液相色譜等方法從中首次分離出3，5，7-三羥基色原酮、4-hydroxy-3-methoxycinnamyl-β-D-glucopyranoside、3，4-dime-thoxycinnamyl-β-D-glucopyranoside、對(duì)羥基苯甲醛、反式咖啡酸、對(duì)羥基苯甲酸-β-D-吡喃葡萄糖酯苷、4-O-β-D-吡喃葡萄糖氧基苯甲酸、4-methoxybenzyl-β-D-glucopyranoside、原兒茶酸、腺苷及1H-吲哚-3-羧酸11個(gè)化合物。分析方面，陳秋等［19］通過正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以總黃酮苷的提取率為指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)利用60%乙醇在90℃條件下對(duì)蜀葵花提取2 h時(shí)，總黃酮苷的提取率最高。其中料液比為1∶12。藥理方面，李東霞等［5］采用流式細(xì)胞術(shù)的方法得出蜀葵花具有良好的抑制金黃色葡萄球菌作用。

為了擴(kuò)大對(duì)蜀葵花的資源開發(fā)與利用，筆者結(jié)合色譜法與光譜法，在繼續(xù)對(duì)蜀葵花95%乙醇提取物的化學(xué)成分研究的過程中，又分離鑒定出8個(gè)二氫黃酮類單體成分，分別為（2R，3R）-二氫山柰酚-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、（2R，3R）-（＋）-花旗松素（2）、（2R，3R）-花旗松素-3′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3）、（2R，3R）-花旗松素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）、（2R，3R）-二氫楊梅素-3′-O-葡萄糖苷（5）、（2R，3R）-3，5，6，7，4′-pentahydroxyflavanonol（6）、（2S）-4′，5，7-三羥基黃烷酮（7）、南酸棗甙（8）。其中3～6為首次從蜀葵屬中分離得到的化合物。據(jù)報(bào)道，二氫黃酮類化合物通常具有調(diào)節(jié)血糖血脂及平滑肌、護(hù)肝、抗菌、抗腫瘤、抗氧化、延緩衰老等藥理作用［20］，因此，蜀葵花是否也具有以上藥理作用，還需要進(jìn)行進(jìn)一步的研究與探索。

［1］中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會(huì).中國植物志（第四十九卷·第二分冊(cè)）［M］.北京：科學(xué)出版社，1979：11.

［2］江蘇省植物研究所，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，中國科學(xué)院昆明研究所.新華本草綱要（第2冊(cè)）［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1991：284.

［3］王東風(fēng)，尚久余，于慶海.蜀葵花對(duì)心血管系統(tǒng)的作用研究［J］.沈陽藥學(xué)院學(xué)報(bào)，1988，5（4）：272-274.

［4］王東風(fēng)，尚久余，于慶海.蜀葵花鎮(zhèn)痛杭炎作用研究［J］.中國中藥雜志，1989，14（1）：4648.

［5］李東霞，曾祥吉，楊麗敏.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)蜀葵花抑菌作用的初步研究［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，22（36）：3991-3993.

［6］劉麗麗，李曉霞，陳玥，等，槐米化學(xué)成分研究Ⅰ［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，33（4）：230-233.

［7］鄧屾，劉麗麗，陳玥，等.益母草化學(xué)成分研究Ⅲ［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，33（6）：362-365.

［8］劉麗麗，李曉霞，陳玥，等，槐米中酚酸類化學(xué)成分研究Ⅰ［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào).2014，33（1）：39-41.

［9］吳克磊，康利平，熊呈琦，等.蒺藜全草中甾體皂苷類化學(xué)成分研究［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，31（4）：225-228.

［10］吳帥，劉二偉，張祎，等.川續(xù)斷中化學(xué)成分的研究［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，29（3）：147-150.

［11］王強(qiáng)，張祎，韓立峰，等.中藥川續(xù)斷化學(xué)成分的研究Ⅲ［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，33（2）：108-111.

［12］Irena M，Maria S.Flavonoid compounds in the flowers of Urena lobata L.（Malvaceae）［J］.Acta Pol Pharm，1999，56（1）：69-71.

［13］楊書慧，田萱.秀雅杜鵑化學(xué)成分的研究［J］.西北植物學(xué)報(bào)，2007，27（2）：364-370.

［14］袁久志，竇德強(qiáng)，陳英杰，等.土茯苓二氫黃酮醇類成分研究［J］.中國中藥雜志，2004，29（9）：867-870.

［15］Slimestad R，Andersen OM，F(xiàn)rancis GW.Ampelopsin 7-glucoside and other dihydroflavonol 7-glucosides from needles of Picea abies［J］.Phytochemistry，1994，35（2）：550-552.

［16］Bennini B，Chulia AJ，Kaouadji M，et al.Phytochemistry of the Ericaceae.4.（2R，3R）-dihydroflavonol aglycone and glycosides from Erica cinerea［J］.Phytochemistry，1993，33（5）：1233-1236.

［17］劉勤，劉永漋.黃甘草的化學(xué)成分（Ⅱ）［J］.植物學(xué)報(bào)，1991，33（4）：314-322.

［18］張祎，陳秋，劉麗麗，等.維藥蜀葵花化學(xué)成分的分離與結(jié)構(gòu)鑒定（1）［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，30（5）：335-341.

［19］陳秋，吳春華，葛丹丹，等.蜀葵花總黃酮正交提取工藝研究［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，14（8）：35-37.

［20］張冬松，高慧媛，吳立軍.橙皮苷的藥理活性研究進(jìn)展［J］.中國現(xiàn)代中藥，2006，8（7）：25-27.

Isolation and structural identification of Flavonones from Althaea rosea flowers

CHAO Li-ping，CHEN Qiu，SHI Ping-ping，LI Xiao-xia，WANG Tao，ZHANG Yi
（Key Laboratory of Traditional Chinese Medicinal Chemistry and Analytical Chemistry of Tianjin，Tianjin 300193，China）

［Objective］Continue to study the constituents of Althaea rosea.［Methods］The chemical constituents were obtained through ODS，Silica gel column chromatorgraphies and PHPLC chromatorgraphy and identified by chemical and kinds of spectral analysis.［Results］Eight flavonones were obtained and determined as（2R，3R）-dihydrokaempferol-4′-O-β-D-glucopyranoside（1），（2R，3R）-（+）-taxifolin（2），（2R，3R）-taxifolin-3′-O-β-D-glucopyranoside（3），（2R，3R）-taxifolin-7-O-β-D-glucopyranoside（4），（2R，3R）-dihydromyricetin-3′-O-glucoside（5），（2R，3R）-3，5，6，7，4′-pentahydroxyflavanonol（6），（2S）-4'，5，7-trihydroxy flavanone（7），choerospondin（8），respectively.［Conclusion］Compounds 3-6 are obtained from Althaea genus firstly.On the other hand，the absolute configurations of all isolates are determined by CD spectrum.

Althaea Rosea；constituents；flavonones；structural identification；absolute configuration

R284.2

A

1673-9043（2015）04-0233-04

國家自然基金項(xiàng)目（81202995）；新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃資助（NCET-12-1069）；天津市高等學(xué)校創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)培養(yǎng)計(jì)劃資助項(xiàng)目（TD12-5033）。

晁利平（1989-），女，碩士研究生，主要從事中藥化學(xué)研究。

張祎，E-mail：zhwwxzh@263.net。

（2015-04-15）