電針刺激對Beagle犬展神經(jīng)損傷修復(fù)的研究

張毅，陳霞，周凌云，王旭東，虞昊

實(shí)驗(yàn)研究

電針刺激對Beagle犬展神經(jīng)損傷修復(fù)的研究

張毅1，陳霞1，周凌云2，王旭東3，虞昊1

目的建立展神經(jīng)損傷電針刺激的動物模型，研究電針刺激對展神經(jīng)損傷修復(fù)的療效。方法24只Bea?gle犬隨機(jī)均分為單純損傷組（對照組）及損傷后電針刺激組（實(shí)驗(yàn)組）。行展神經(jīng)腦池段壓榨損傷，展神經(jīng)刺激電極及外直肌記錄電極植入。于術(shù)后1～12周，測量2組瞳孔中心至外眥內(nèi)側(cè)緣距離。結(jié)果所有Beagle犬均能耐受手術(shù)，顱內(nèi)刺激電極和外直肌記錄電極成功植入；術(shù)后1～2周，2組Beagle犬瞳孔中心至外眥內(nèi)側(cè)緣距離比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，術(shù)后4～12周，實(shí)驗(yàn)組Beagle犬瞳孔中心至外眥內(nèi)側(cè)緣距離小于對照組（P＜0.01）。結(jié)論成功建立應(yīng)用于展神經(jīng)損傷電針刺激的動物模型，電針刺激可以明顯促進(jìn)損傷的展神經(jīng)恢復(fù)。

犬科；電針；展神經(jīng)損傷；Beagle犬

展神經(jīng)損傷是顱腦損傷中常見的并發(fā)癥，損傷后可采用神經(jīng)斷端的直接重建、間接重建、整形手術(shù)等方法進(jìn)行修復(fù)，但迄今尚缺乏促進(jìn)其功能修復(fù)的有效措施，相關(guān)的基礎(chǔ)研究目前處于探索階段。電針刺激作為一種有潛力的神經(jīng)再生干預(yù)措施正越來越多地應(yīng)用于神經(jīng)損傷的研究，但電針刺激能否促進(jìn)展神經(jīng)修復(fù)目前鮮見報(bào)道，本研究使用電針刺激Beagle犬損傷的展神經(jīng)，通過測量Beagle犬瞳孔中心至外眥內(nèi)側(cè)緣的距離，以期研究展神經(jīng)損傷后電針刺激在促進(jìn)神經(jīng)功能修復(fù)中的作用。

1　材料與方法

1.1材料健康雄性Beagle犬24只，購自南通大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)場，許可證號SCXK（蘇）:2008-0010，年齡1～2歲，體質(zhì)量10～20 kg，體長70～100 cm。按抽簽法隨機(jī)分為單純損傷

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)器材手術(shù)顯微鏡、吸引器、高速磨鉆（直徑0.3 cm）、顯微咬骨鉗和普通顯微外科器械。

1.2.2模型制備術(shù)前12 h禁食，4 h禁水，腹腔內(nèi)注射3%戊巴比妥鈉（1 mL/kg）麻醉。將Beagle犬置于側(cè)臥位，頭向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)，頭部置于頭圈上，耳緣牽向中線和尾側(cè)。常規(guī)消毒、鋪巾，開顱皮瓣翻向外側(cè)并縫線固定。于顳肌附著處切開顳肌，在顳骨上保留一小片顳肌附著緣，以便關(guān)顱時縫合。顳底入路開顱，骨窗要盡量靠近顱底，用高速梅花鉆和顯微咬骨鉗形成從眶后到顴弓前足夠大骨窗，擴(kuò)大約3.0 cm×3.0 cm，即可沿骨窗下緣切開硬膜并放射狀剪開。通過向內(nèi)、上方牽拉顳葉牽開腦組織，磨除巖骨前部，可見深部的展神經(jīng)，見圖1，穿過腦橋前池，用槍狀鑷完全夾閉展神經(jīng)30 s，切斷全部展神經(jīng)軸突但保持神經(jīng)鞘膜完整，實(shí)驗(yàn)組行展神經(jīng)刺激電極植入，將2個鉑金絲電極（外套5 F導(dǎo)管）植入展神經(jīng)損傷處兩側(cè)，見圖2。末端緊貼顱底走行，出顱后自耳屏前引出固定；牽開上下眼瞼顯示瞼板，拉向外方，暴露瞼板與球結(jié)膜交界處，打開球結(jié)膜顯示外直肌，將兩個鉑金絲電極（外套5 F導(dǎo)管）植入外直肌，深度4.0 mm，間距約4.0 mm，縫合切口并固定電極。游離端在眼眶后下方引出至并固定。術(shù)后連續(xù)2周給予電針刺激，每次持續(xù)15 min，刺激脈沖頻率為5 Hz，時程0.1 ms，刺激強(qiáng)度1.0 V，術(shù)中給予生理鹽水500 mL+慶大霉素16萬U靜脈滴注，術(shù)后連續(xù)肌內(nèi)注射青霉素160 萬U。保證實(shí)驗(yàn)室溫度在25℃左右，術(shù)中注意動物保暖。

Fig.1　Abducens nerve（arrow）圖1　展神經(jīng)（箭頭示）

1.3檢測方法于術(shù)后1～12周，將Beagle犬頭部固定，以瞳孔中央為起點(diǎn)，以目外眥內(nèi)側(cè)緣為終點(diǎn)，觀測兩者之間的距離。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法資料用SPSS 16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料用±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

24只實(shí)驗(yàn)Beagle犬經(jīng)手術(shù)后無一例死亡，該手術(shù)入路和圍手術(shù)期處理方法能清楚地顯露展神經(jīng)腦池段，整個手術(shù)時間約需2 h。所有存活Beagle犬術(shù)后均生存良好，無感染、角膜潰瘍等并發(fā)癥，展神經(jīng)損傷后，所有Beagle犬眼球始終處于內(nèi)斜視，無其他神經(jīng)功能障礙征象。術(shù)前，Beagle犬的瞳孔中心至外眥內(nèi)側(cè)緣的正常距離為（9.86±1.07）mm，術(shù)后1～2周，2組Beagle犬瞳孔中心至外眥內(nèi)側(cè)緣距離比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，術(shù)后4～12周，實(shí)驗(yàn)組的瞳孔中心至外眥內(nèi)側(cè)緣距離小于對照組（P＜0.01），見表1。

Tab.1　Comparison of the distance between the center of the pupil to medial margin of extraocular adjoin from 1 to 12 weeks after operations in two groups表1　術(shù)后1～12周2組瞳孔中心至外眥內(nèi)側(cè)緣距離比較　（n=12，mm，±s）

Tab.1　Comparison of the distance between the center of the pupil to medial margin of extraocular adjoin from 1 to 12 weeks after operations in two groups表1　術(shù)后1～12周2組瞳孔中心至外眥內(nèi)側(cè)緣距離比較?。╪=12，mm，±s）

＊＊P＜0.01

組別實(shí)驗(yàn)組對照組t 1周13.74±1.07 13.89±l.12 0.34 2周13.63±1.28 13.76±1.09 0.27 4周11.94±1.20 13.24±l.16 2.70＊＊6周10.72±1.30 12.96±l.15 4.47＊＊組別實(shí)驗(yàn)組對照組t 8周10.46±0.78 11.86±0.89 4.10＊＊10周10.27±0.75 11.65±0.94 3.98＊＊12周10.04±0.36 11.54±0.89 5.41＊＊

3　討論

展神經(jīng)為眼運(yùn)動神經(jīng)之一，在顱內(nèi)走行復(fù)雜，經(jīng)過并毗鄰許多重要結(jié)構(gòu)，在顱內(nèi)炎癥、腫瘤、外傷、顱內(nèi)高壓時常受到損傷［1-2］。目前國內(nèi)外尚缺乏有效的展神經(jīng)修復(fù)方法，動物實(shí)驗(yàn)研究也僅處于起步階段，故建立展神經(jīng)損傷和修復(fù)的動物模型就顯得十分必要。

Beagle犬展神經(jīng)解剖學(xué)、組織學(xué)特征與人類展神經(jīng)相比基本相似，此外其抵抗力強(qiáng)，條件容易控制，只需較小的生活空間和較低的飼養(yǎng)費(fèi)用，故更適用于建立展神經(jīng)等顱神經(jīng)損傷動物研究模型。在顯露腦池段展神經(jīng)時辨別展神經(jīng)的方法：展神經(jīng)從橋延溝至穿入硬腦膜前，走行于腦池內(nèi)，在斜坡處穿硬腦膜兩層之間進(jìn)入Dorello管，位于巖尖前部，緊貼斜坡外側(cè)壁［3-5］。成功建立Beagle犬展神經(jīng)損傷模型的關(guān)鍵在于：骨窗要盡可能地接近顱底，充分暴露巖骨前部；當(dāng)經(jīng)腦橋前池顯露展神經(jīng)時，需要磨除部分巖骨前部，避免損傷乙狀竇、橫竇、巖上竇等硬膜竇；減少腦組織牽拉；保護(hù)展神經(jīng)腦池段周圍主要的血管，如小腦前下動脈和腦橋下外側(cè)動脈［6］；加強(qiáng)圍手術(shù)期的處置；此外需避免長時間電針刺激可能對大腦造成的損傷。

從術(shù)后第4周開始，實(shí)驗(yàn)組Beagle犬的瞳孔中心至外眥內(nèi)側(cè)緣距離明顯小于對照組同期的Beagle犬，提示展神經(jīng)損傷后早期電針刺激可加快外直肌功能恢復(fù)，提高其最終恢復(fù)水平。電針刺激加速展神經(jīng)恢復(fù)的機(jī)制可能與電針刺激促進(jìn)周圍神經(jīng)損傷后神經(jīng)元存活和芽枝形成，啟動、加快軸突再生速度，減少新生軸突迷行；減輕神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+蓄積，預(yù)防組織Ca2+超載，穩(wěn)定膜結(jié)構(gòu)，增加線粒體酶活性，阻斷神經(jīng)元繼發(fā)性病變；通過軸突反射和節(jié)段反射引起血管擴(kuò)張，擴(kuò)張小動脈改善局部血運(yùn)有關(guān)［7-9］。

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（2014-09-03收稿2014-10-10修回）

（本文編輯閆娟）

Effect of electroacupuncture on abducens nerve injury in Beagle dog

ZHANG Yi1，CHEN Xia1，ZHOU Lingyun2，WANG Xudong3，YU Hao1
1 Department of Neurosurgery，Second Affiliated Hospital of Nantong University，Jiangsu 226001，China；2 Department of Acupuncture，F(xiàn)irst Affiliated Hospital of Harbin Medical University；3 Department of Chinese Traditional Medicine，Second Affiliated Hospital of Nantong University

ObjectiveTo establish Beagle dogs'model of abducens nerves injury and to observe the clinical therapeu?tic effect of electroacupuncture treatment.MethodsTwenty-four Beagle dogs were randomly divided into simple crush group（control group）and crush with electrical stimulation group（experimental group）.Cisternal segment of the abducens nerve was given a crush injury，then electrodes were implanted to stimulate the abducens nerve and lateral rectus muscle. Distance between the center of the pupil to medial margin of extraocular adjoin was measured from 1 to 12 weeks after opera?tions.ResultsAll procedures used in the study were well tolerated by Beagle dogs.Electrode implantation to stimulate the lateral rectus muscle and the abducens nerve behind of cavemous sinus was successful.There was no statistical significance of the distance between the two groups from 1 to 2 weeks after operations，and the distance was shorter in experimental group than that in control group from 4 to 12 weeks after operations（P＜0.01）.ConclusionThe animal models established to study electroacupuncture treatment of the injured abducens nerves was successful.Electroacupuncture can promote the re?covery of the injured abducens nerves obviously.

canidae；electroacupuncture；abducens nerve injury；beagle dogs

R741

ADOI：10.11958/j.issn.0253-9896.2015.02.009

黑龍江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（ZD201211）；南通市社會事業(yè)科技創(chuàng)新與示范計(jì)劃項(xiàng)目（HS2012031）

1江蘇省南通大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)外科（郵編226001）；2哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院針灸科；3南通大學(xué)第二附屬醫(yī)院中醫(yī)科

張毅（1978），男，主治醫(yī)師，主要從事顱底外科基礎(chǔ)與臨床研究組（對照組）及損傷后電針刺激組（實(shí)驗(yàn)組），每組12只，在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)條件下飼養(yǎng)，每只籠內(nèi)飼養(yǎng)1只。