三種不同方法提取吳茱萸果實(shí)揮發(fā)油成分的GC-MS分析

劉應(yīng)蛟，徐貝，喻亞飛，龔力民，曾曉艷，劉塔斯*（湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南長沙410208）

三種不同方法提取吳茱萸果實(shí)揮發(fā)油成分的GC-MS分析

劉應(yīng)蛟，徐貝，喻亞飛，龔力民，曾曉艷，劉塔斯*
（湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南長沙410208）

目的用GC-MS法分析吳茱萸果實(shí)中揮發(fā)油的化學(xué)成分，為其不同方法提取提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法采用水蒸氣蒸餾法、索氏提取法和超聲提取法對吳茱萸果實(shí)揮發(fā)油進(jìn)行提取，用GC-MS法測定，結(jié)合NIST05數(shù)據(jù)庫對分離的化合物進(jìn)行鑒定，并采用歸一法計(jì)算各組分的相對峰面積。結(jié)果3種不同方法提取吳茱萸果實(shí)揮發(fā)油的化學(xué)成分有差異，分別分離鑒定出57、51和38個(gè)組分，共有成分25個(gè)，其中主要成分為β-月桂烯、β-羅勒烯、α-蒎烯、β-芳樟醇、［1S-（1α，2β，4β）］-1-乙烯基-1-甲基-2，4-二（1-甲基乙烯基）-環(huán)己烷、石竹烯、吉馬烯、α-布藜烯和氧化石竹烯等。結(jié)論采用水蒸氣蒸餾法和索氏提取法得到具有一定藥理活性的石竹烯、α-蒎烯、欖香烯及β-羅勒烯等成分時(shí)，能夠達(dá)到同樣的提取效果。因此可以綜合考慮所需要的組分而選擇合適的提取方法。

吳茱萸；水蒸氣蒸餾法；索氏提取法；超聲提取法；揮發(fā)油；GC-MS

〔Abstract〕Objective To analyze the chemical components of the essential oil of from Evodiae Fructus with GC-MS and provide experimental basis for its different exaction methods.Methods The volatile oils of Evodiae Fructus were extracted by steam distillation，Soxhlet extraction and ultrasonic extraction methods.The chemical compounds were identified by GCMS method and NIST05 database.The relative content of each component was calculated by area normalization.Results There are some differences in chemical compounds of the essential oil from Evodiae Fructus by three different methods.57，51 and 38 components of volatile oil were identified separately，and there were 25 same components.The main components are β-Myrcene，β-ocimene，α-pinene，β-Linalool，［1S-（1α，2β，4β）］-1-ethenyl-1-methyl-2，4-bis（1-methylethenyl）-cyclohexane，caryophyllene，germacrene D，α-bulnesene and caryophyllene oxide etc.Conclusion The steam distillation and Soxhlet extractionmethods showed the same effectin extracting of chemical compounds with some pharmacological activities，such as caryophyllene，α-pinene，elemene and β-ocimene etc.So the needs of components should be taken into consideration for the right extraction method.

〔Keywords〕Evodiae Fructus；steam distillation；Soxhlet extraction；ultrasonic extraction；volatile oil；GC-MS

吳茱萸為蕓香科（Rutaceae）植物吳茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.、石虎Evodia rutaecarpa （Juss.）Benth.Var.officinalis（Dode）Huang或疏毛吳茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.Var.bodinieri（Dode）Huang的干燥近成熟的果實(shí)［1］。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，味辛、苦，性大熱，有小毒。具有散寒止痛、降逆止嘔、助陽止瀉等功效，用于厥陰頭痛、寒疝冷痛、腳氣疼痛、五更泄瀉等癥［2］。近代研究證明，其具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗菌、降壓、耐缺氧等藥理作用［3］。本文采用三種不同的提取方法，探討其異同，為吳茱萸果實(shí)揮發(fā)油成分的優(yōu)化提取提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1藥材

吳茱萸果實(shí)采自于湖南省沅汨科技種植有限公司。經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定教研室劉塔斯教授鑒定為吳茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.的干燥近成熟的果實(shí)。

1.2儀器

日本島津GC-MSQP2010型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀。GC-MS Solution色譜工作站。標(biāo)準(zhǔn)譜庫為美國NIST質(zhì)譜檢索數(shù)據(jù)庫。

1.3試劑

乙酸乙酯、無水硫酸鈉、石油醚（60～90℃）和乙醚均為分析純。

表1　吳茱萸果實(shí)揮發(fā)油的化學(xué)成分分析結(jié)果

2　方法

采用水蒸氣蒸餾法、索氏提取法和超聲提取法對吳茱萸果實(shí)揮發(fā)油進(jìn)行提取，用GC-MS法測定，結(jié)合NIST05數(shù)據(jù)庫，人工圖譜解析，按各色譜峰的質(zhì)譜裂片圖與文獻(xiàn)核對，確定吳茱萸果實(shí)揮發(fā)油成分，并用歸一法計(jì)算各組分的相對峰面積［4-5］。

2.1提取方法

2.1.1水蒸氣蒸餾法取吳茱萸果實(shí)參照2010年版《中華人民共和國藥典》一部附錄XD揮發(fā)油提取法甲法進(jìn)行提取，蒸餾6 h，收集油層，用無水硫酸鈉脫水，此揮發(fā)油為黃色透明油狀物，以乙酸乙酯為溶劑稀釋，即得樣品1。

續(xù)表1

2.1.2索式提取法取吳茱萸果實(shí)粗粉25 g，置于索式提取器中，加入石油醚250 mL，60℃回流1 h，合并提取液，即得樣品2。

2.1.3超聲提取法取吳茱萸果實(shí)粗粉25 g，加入石油醚250 mL，稱質(zhì)量，超聲1 h，放冷至常溫補(bǔ)重，過濾，取續(xù)濾液得樣品3。

2.2色譜及質(zhì)譜條件

2.2.1色譜條件色譜柱：Rtx-5 MS（30 m× 0.25 mm×0.25 μm）；載氣He；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣口溫度250℃；程序升溫：初始溫度80℃，以4℃/min升溫到160℃，2℃/min升溫到200℃，8℃/min升溫到240℃，保持8 min；進(jìn)樣量1 μL，分流比20∶1。離子源溫度230℃。

2.2.2質(zhì)譜條件離子源EI；電子能量70 eV；溶劑延遲時(shí)間3 min；質(zhì)量掃描范圍50～500 amu。

圖1　吳茱萸果實(shí)揮發(fā)油總離子流圖

3　結(jié)果與討論

從吳茱萸果實(shí)揮發(fā)油總離子流圖（見圖1）可以看出三種不同方法提取吳茱萸果實(shí)揮發(fā)油的化學(xué)成分有些差異，分別分離鑒定出57、51和38個(gè)組分，分別占揮發(fā)油總相對峰面積的98.36%、 92.55%和80.09%。共有成分25個(gè)，其中主要成分為β-月桂烯、α-水芹烯、β-羅勒烯、α-蒎烯、β-芳樟醇、石竹烯、吉馬烯、α-愈創(chuàng)烯和氧化石竹烯等。3種方法提取吳茱萸果實(shí)揮發(fā)油分析結(jié)果見表1。

水蒸氣蒸餾法提取的揮發(fā)油顏色為淡黃色，具有特殊刺激的濃郁香味，耗時(shí)較長，但揮發(fā)油成分被檢測最多，而其它兩種方法得到揮發(fā)油的顏色較深，耗時(shí)較短。不同提取方法對吳茱萸果實(shí)揮發(fā)油成分的影響較大。水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油中莰烯、α-品烯、（+）-歐松油烯、海茴香烯、異松油烯、紫蘇烯、大根香葉烯B等成分在索氏提取法和超聲法中未被檢出。4（10）-側(cè)柏烯、2-乙烷基-6-甲基-1，5-庚二烯、α-檸檬醛、檀香三烯、法尼醇、欖香醇等只在索氏提取法中被檢出；葎草烯、綠葉烯、9-炔十八酸、亞麻酸、二十烷等只在超聲提取法中被檢出。主要成分β-月桂烯、β-羅勒烯、石竹烯、α-蒎烯、欖香烯、β-芳樟醇等均可用索氏提取法和水蒸氣蒸餾法提取。

據(jù)研究報(bào)道，石竹烯具有一定的平喘作用且具抗菌活性，可用于治療老年慢性支氣管炎［6］；α-蒎烯對白色念珠菌有明顯的抑菌和殺菌作用［7］；對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌有一定的抑制作用，可能與其所含的石竹烯、欖香烯、α-蒎烯、及β-羅勒烯等主要成分密切相關(guān)［8］。在提取得到石竹烯、α-蒎烯、欖香烯及β-羅勒烯等時(shí)，索氏提取法可以取代水蒸氣蒸餾法。因此可以綜合考慮所需要的化學(xué)組分而選擇合適的提取方法。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：160.

［2］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典（上冊）［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1977：1 120.

［3］蓋玲.吳茱萸對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的治療作用［J］.中成藥，2001，23 （1）：807.

［4］江寧，龔力民，劉塔斯，等.吳茱萸葉揮發(fā)油成分的GC-MS分析［J］.湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，30（1）：43-45.

［5］李吉來，陳飛龍，賀豐，等.石菖蒲揮發(fā)油成分的GC-MS分析及不同提取方法的比較研究［J］.中藥材，2001，24（7）：494-495.

［6］國家醫(yī)藥管理局中草藥情報(bào)中心站.植物藥有效成分手冊［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1986.

［7］夏忠弟，余俊龍.α-蒎烯對白色念珠菌生物合成的影響［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2000，10（1）：44-46.

［8］趙晨曦，梁逸曾，李曉寧.香揮發(fā)油化學(xué)成分與抗菌活性研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2006（18）：381-385.

（本文編輯楊瑛）

Determination of the Constituents of Volatile oil from Evodiae Fructus Extracted with Three Different Exaction Methods by GC-MS

LIU Yingjiao，XU Bei，YU Yafei，GONG Limin，ZENG Xiaoyan，LIU Tasi*
（Pharnacy College，Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，Hunan 410208，China）

R284.2；R917

B

10.3969/j.issn.1674-070X.2015.02.009.027.04

2014-07-07

湖南省中藥鑒定學(xué)精品課程項(xiàng)目；國家中醫(yī)藥管理局中藥鑒定與資源三級科研實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目。

劉應(yīng)蛟，男，在讀碩士研究生，研究方向：中藥質(zhì)量與資源。

*劉塔斯，女，教授，博士研究生導(dǎo)師，E-mail：liutasi@126.com。