益氣化瘀方干預子宮復舊不全大鼠激素水平的研究

曾晶，談珍瑜*，湯潔，付水冰（湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，湖南長沙410007）

益氣化瘀方干預子宮復舊不全大鼠激素水平的研究

曾晶，談珍瑜*，湯潔，付水冰
（湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，湖南長沙410007）

目的研究益氣化瘀方對產(chǎn)后子宮復舊不全大鼠血清中催乳素（PRL）、雌二醇（E2）、孕酮（P）的影響，探討其部分作用機制。方法選取50只SD級妊娠后雌性大鼠，抽取10只為空白組，其余40只給予大腸桿菌陰道內(nèi)注射制備子宮復舊不全模型，造模成功后隨機分為模型組、新生化組、益氣化瘀方低劑量組（下稱益氣低組）和高劑量組（下稱益氣高組）。各組分別給藥7 d，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測定大鼠血清中E2、P、PRL的含量。結(jié)果與模型組比較，益氣低組、益氣高組和新生化組能明顯升高E2、P水平（P＜0.01或P＜0.05），益氣高組與新生化組差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），益氣低組低于新生化組（P＜0.01）；益氣低組、益氣高組和新生化組均能提高PRL水平（P＜0.01），且益氣高組優(yōu)于新生化組（P＜0.01）。結(jié)論益氣化瘀方能調(diào)節(jié)血清E2、P同步增長，促進子宮內(nèi)膜增生修復；升高PRL水平，抑制產(chǎn)后不良情緒產(chǎn)生，加強子宮收縮，促進產(chǎn)后子宮復舊，并且益氣高組療效顯著。

子宮復舊不全；益氣化瘀方；催乳素；雌二醇；孕酮

〔Abstract〕Objective To study of Yiqi Huayu Prescription on PRL，E2and P in subinvolution of uterus rat models rats and to explore the pathological mechanisms.Methods 50 SD female rats after pregnancy were selected.10 rats were as the blank group and other 40 rats were injected Escherichia coli into vagina to build subinvolution of uterus rat models. After modeling，the rats were randomly divided into model group，Xinshenghua group and low-dose of Yiqi Huayu group （LYQHY group）and high-dose of Yiqi Huayu group（HYQHY group）.Every group was given drugs for 7 days，the contents of E2，P and PRL were respectively detected by ELISA.Results Compared with model group，the contents of E2and P significantly increased in LYQHY group，HYQHY group and Xinshenghua group（P＜0.01 or P＜0.05），there was no statistical significance between HYQHY group and Xinshenghua group（P＞0.05），LYQHY group was lower than Xinshenghua group（P＜0.01）；LYQHY，HYQHY and Xinshenghua groups could also elevate levels of PRL（P＜0.01），and the HYQHY group better than the Xinshenghua group（P＜0.01）.Conclusion The Yiqi Huayu Prescription could regulate the serum E2and P to promote the repair of endometrial hyperplasia；increase the level of PRL to inhibit the postnatal negative emotions，enhance uterine contraction and promote the involution of uterus.The HYQHY group showed a more significant curative effect.

〔Keywords〕subinvolution of uterus；Yiqi Huayu Prescription；prolactin；estradiol；progesterone

產(chǎn)后子宮復舊是內(nèi)膜修復和血管再生的過程，受甾體激素及其受體、細胞凋亡、血管活性因子等諸多因素共同調(diào)控。根據(jù)產(chǎn)后出血、腹痛的病證特點，中醫(yī)認為其病機為氣虛血瘀。本研究通過構(gòu)建子宮復舊不全大鼠動物模型，檢測益氣化瘀方干預后的大鼠血清中雌二醇（estradiol，E2）、孕酮（progesterone，P）、催乳素（prolactin，PRL）水平，挖掘其在產(chǎn)后子宮復舊中的可能作用機制，現(xiàn)報道如下。

1　實驗材料及方法

1.1實驗材料

1.1.1研究對象清潔級SD雌性大鼠50只，雄性大鼠20只（湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號：SCXK（湘）2011-0003，體質(zhì)量（200±8）g，鼠齡小于3月，飼養(yǎng)于SPF實驗室。

1.1.2實驗藥物益氣化瘀方（黨參、蒲黃、黃芪、馬鞭草、茜草、鹿銜草、狗脊、續(xù)斷、烏藥、甘草），成人臨床日用量為：52 g/d。大鼠按照體表面積計算：低劑量組相當于臨床用量（52×0.018/0.2=4.68 g/kg），高劑量組（9.36 g/kg）用量相當于臨床用量2倍。湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院藥劑科提供。新生化顆粒：云南白藥集團股份有限公司生產(chǎn)，臨床用量24 g/d，相當于大鼠用量（24×0.018/0.2=2.16 g/kg）。生產(chǎn)批號：ZLB1304。

1.1.3主要儀器MK3型酶標儀，熱電（上海）儀器有限公司；LEICA DMLB2型雙目顯微鏡，德國LEICA公司；Shandon325型石蠟切片機，英國Shandon公司；MIAS醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)，北航公司。

1.1.4主要試劑大鼠雌二醇ELISA試劑盒（DRE20698）、大鼠孕酮ELISA試劑盒（DRE20697）、大鼠催乳素ELISA試劑盒（DRE20788）均購于武漢貝茵萊生物科技有限公司，批號為：201405。

1.1.5細菌菌種致病性大腸桿菌（X25922），臨床分離菌，由湖南中醫(yī)藥大學微生物研究室提供。

1.2實驗方法

1.2.1模型建立大鼠常規(guī)喂養(yǎng)1周后，晚20∶00將雌、雄鼠以2∶1的比例合籠，第2日清晨陰道口找陰道栓。如發(fā)現(xiàn)陰道栓確定妊娠第1天。若未見陰道栓，則取陰道沖洗液涂片，顯微鏡下找精子，明確看到精子確認為妊娠第1天。妊娠后，大鼠分籠飼養(yǎng)待其自然分娩。分娩后第1天，將培養(yǎng)后的大腸桿菌稀釋成1.0×107個/mL后，進行宮腔內(nèi)接種，每只大鼠接種量為0.2 mL［1］。接種后大鼠子宮HE染色結(jié)果示：模型大鼠有炎性細胞浸潤，間質(zhì)疏松水腫，部分上皮細胞壞死脫落，內(nèi)膜連續(xù)性部分中斷，內(nèi)膜下小血管擴張、充血、出血，提示造模成功。

1.2.2分組及給藥除10只雌鼠分為空白組，其余40只造模成功后大鼠隨機分為模型組、新生化組（2.16 g/kg）、益氣化瘀方低劑量組（4.68 g/kg，下稱益氣低組）、益氣化瘀方高劑量組（9.36 g/kg，下稱益氣高組），每組10只。造模后第1天開始各組每天分別灌胃給藥1次，灌胃體積為8 mL/（kg·d），連續(xù)7 d。模型組和空白組灌胃白開水8 mL/（kg·d）。

1.3指標檢測

1.3.1HE染色觀察子宮內(nèi)膜形態(tài)各組動物于末次灌胃后2 h用20%烏拉坦腹腔注射麻醉，腹主動脈采血后，大鼠死亡。取出單側(cè)子宮長約2 cm，福爾馬林（4%）固定24 h，乙醇依次脫水，二甲苯透明，軟蠟中浸泡，石蠟包埋，冷凍12 h后，連續(xù)冠狀切片（4 mm），常規(guī)HE染色，封片，光鏡下觀察子宮形態(tài)學變化，照相。

1.3.2ELISA法檢測血清中E2、P、PRL的含量腹主動脈采血，室溫下靜置60 min，離心10 min，留取上層血清，在湖南中醫(yī)藥大學病理實驗室采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定E2、P、PRL。

1.4統(tǒng)計學分析

2　結(jié)果

2.1各組大鼠子宮內(nèi)膜形態(tài)

空白組大鼠子宮內(nèi)膜上皮細胞輕度脫落，偶見內(nèi)膜連續(xù)性部分中斷，腺體數(shù)目少；模型組與空白組對照，有炎性細胞浸潤，間質(zhì)疏松水腫，部分上皮細胞壞死脫落，內(nèi)膜連續(xù)性部分中斷，內(nèi)膜下小血管擴張、充血、出血；新生化組及益氣高組內(nèi)膜上皮損傷較輕，少見炎細胞，內(nèi)膜連續(xù)性好，腺體數(shù)目多，血管未見明顯擴張，間質(zhì)較致密，宮腔中滲液不明顯；益氣低組上皮損傷介于模型組與益氣化瘀高劑量組之間。具體見圖1（72頁彩圖）。

2.2各組大鼠血清中E2、P、PRL含量的比較

模型組產(chǎn)后子宮復舊不全大鼠血清中E2、P、PRL含量與空白組比較均降低，差異有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。與模型組比較：益氣低組、益氣高組和新生化組能明顯升高E2、P水平（P＜0.01或P＜0.05），益氣高組與新生化組差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），益氣低組低于新生化組（P＜0.01）；益氣低組、益氣高組和新生化組均能提高PRL水平（P＜0.01），且益氣低組與新生化組差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），益氣高組優(yōu)于新生化組（P＜0.01）。見表1。

3　討論

產(chǎn)后子宮復舊是個多因素調(diào)控的過程，大約需要6周時間，子宮收縮、內(nèi)膜增生，血管修復貫穿始終，甾體激素及其受體、血管活性物質(zhì)、炎癥因子等共同調(diào)控這一過程。子宮肌層的收縮受多種因素調(diào)控，如卵巢激素、金屬鈣離子、前列腺素、催乳素、降鈣素基因相關肽、松弛素等，其中以雌激素、孕激素最為明顯［2-4］。臨床研究發(fā)現(xiàn)，陰道分娩、健康教育、母乳喂養(yǎng)、產(chǎn)后恢復治療可促進產(chǎn)后子宮復舊［5］。田敏等［6］研究發(fā)現(xiàn)產(chǎn)后抑郁癥與血清E2、P、PRL水平變化的相關性，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)后體內(nèi)激素水平的急劇變化容易導致產(chǎn)后抑郁癥的發(fā)生，產(chǎn)后情緒變化可能影響產(chǎn)后子宮復舊。分娩后，體內(nèi)雌激素、孕激素水平迅速下降，子宮內(nèi)膜需要通過增生得以修復，進而達到止血的目的。陰道分娩時孕婦處于應激狀態(tài)，體內(nèi)一種能產(chǎn)生愉悅情緒的神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺分泌增多，刺激PRL和催產(chǎn)素分泌。增多的催產(chǎn)素進一步刺激PRL的釋放，同時與子宮受體結(jié)合，前列腺素水平升高，進而誘發(fā)子宮收縮和乳汁分泌，促進產(chǎn)后子宮復舊［7］。婦女在妊娠晚期E2水平最高，整個孕期P處于高水平。分娩后，E2、P水平急速下降。迅速下降的雌激素刺激腦內(nèi)多巴胺D2受體呈超敏狀態(tài)，提高多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白表達，導致抑郁等負面情緒的產(chǎn)生和行為異常改變。孕激素水平的下降，抑制興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，影響高級神經(jīng)中樞活動，最終導致抑郁癥的發(fā)生。產(chǎn)后PRL的變化可能是產(chǎn)后抑郁的病因之一［8］。PRL促進乳腺發(fā)育生長，引起并維持泌乳，在子宮復舊中對PRL的研究較少，因而，我們研究的目的是探討在子宮內(nèi)膜炎導致產(chǎn)后子宮復舊不全大鼠模型中，益氣化瘀方是否通過調(diào)節(jié)E2、P、PRL的水平達到促進子宮復舊的目的，推測其可能的調(diào)節(jié)機制。

表1　各組大鼠血清中E2、P、PRL含量的比較（n=10，±s）

表1　各組大鼠血清中E2、P、PRL含量的比較（n=10，±s）

注：與空白組比較**P＜0.01；與模型組比較★P＜0.05，★★P＜0.01；與新生化組比較●●P＜0.01。

組別空白組模型組新生化組益氣低組益氣高組給藥劑量（g/kg）——2.16 4.68 9.36 E2（ng/L）48.80±4.79 34.65±3.58** 46.72±6.46★★38.22±3.32★●●49.45±3.55★★P（pmol/L）1 370.20±76.69 806.40±73.52** 1 349.85±157.95★★1 069.88±87.88★★●●1 387.83±111.15★★PRL（pg/mL）674.73±48.68 398.25±48.22** 587.39±53.96★★615.52±80.59★★699.87±61.19★★●●

產(chǎn)后子宮復舊不全主要是因產(chǎn)耗損和產(chǎn)后失攝，病機主要是氣虛失攝，瘀阻沖任、血不循經(jīng)，治療應補氣攝血，佐以化瘀止血。益氣化瘀方以生化湯方為基礎加減而成，此方益氣和化瘀并重。益氣可促進內(nèi)膜修復而扶正，化瘀促進膠原降解、細胞凋亡而祛邪。方中以黨參補中益氣，生津和胃、蒲黃活血化瘀止血為君。蒲黃為婦科止血化瘀良藥，有止血而不留瘀的特點，用于產(chǎn)后惡露不絕。二藥配伍，補中有行，行中有止。方中以黃芪、馬鞭草、茜草為臣。黃芪大補元氣，與黨參相須配對，一走一守，補氣之力倍增。馬鞭草，活血散瘀，破血通經(jīng)，茜草既能涼血止血，又能活血行血，祛瘀血生新。馬鞭草、茜草與蒲黃為伍，相輔相成，相得益彰，于出血而兼瘀阻者尤宜。三藥合用益氣化瘀止血。方中以狗脊、鹿銜草、續(xù)斷、臺烏藥為佐。產(chǎn)后損傷胞宮脈絡，傷及肝腎。狗脊能補肝腎，強腰膝，祛風濕，溫補固攝。鹿街草補肝腎、強筋骨，能收斂止血，為止血之良藥。續(xù)斷能補肝腎，強筋骨，續(xù)折傷，止崩漏。三藥合用，既能補肝腎強筋骨，又能收續(xù)傷止血。臺烏藥通理上下諸氣，治療少腹血海疼痛。四藥合用能達到抗菌止血鎮(zhèn)痛的作用。方中以甘草和中調(diào)藥為使。

本研究證實：益氣化瘀方可能通過調(diào)節(jié)雌孕激素同步發(fā)展，促進內(nèi)膜迅速增生，修復剝脫的子宮內(nèi)膜創(chuàng)面止血。同時，益氣化瘀方還能增加催乳素分泌，抑制產(chǎn)后抑郁情緒的產(chǎn)生，促進產(chǎn)婦情志的調(diào)暢，加強子宮收縮，促進產(chǎn)后子宮復舊，為臨床研究提供了部分實驗依據(jù)。

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（本文編輯匡靜之）

Effect of Yiqi Huayu Prescription on Hormone Levels in Subinvolution of Uterus Rat Models

ZENG Jing，TAN Genyu*，TANG Jie，F(xiàn)U Shuibing
（The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，Hunan 410007，China）

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-070X.2015.02.004.011.03

2014-11-21

國家自然科學青年基金項目資助（81202848）；湖南省自然科學基金項目資助（14JJ3121）。

曾晶，女，主治醫(yī)師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合婦產(chǎn)科疾病研究工作。

*談珍瑜，女，教授，碩士研究生導師，E-mial：2350591364@qq.com。