不同分子亞型青年乳腺癌表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)及其臨床病理分析

李榮崗 孫麗霞 劉瓊?cè)?廖悅?cè)A 余衛(wèi)東 周 偉

中山大學(xué)附屬江門(mén)醫(yī)院 廣東省江門(mén)市中心醫(yī)院病理科，廣東 江門(mén) 529030

乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，多發(fā)生于絕經(jīng)前后女性，但近年來(lái)其發(fā)病率呈明顯年輕化趨勢(shì)，青年乳腺癌患者所占的比例也明顯增加。目前對(duì)于青年乳腺癌的年齡界定尚未界定，而國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)大多定義為35歲以下的乳腺癌患者。一般認(rèn)為，青年乳腺癌患者在生物學(xué)行為和預(yù)后方面與其他年齡組患者不同[1-2]。乳腺癌可依據(jù)其分子表達(dá)特點(diǎn)分為不同的亞型。目前臨床上常根據(jù)雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）和人表皮生長(zhǎng)因子受體2（human epidemlalgrowth factor receptor-2，HER2）的表達(dá)狀況，將乳腺癌分為管腔上皮型（包括 Luminal A 和 B）、HER2過(guò)表達(dá)型 （ER、PR 陰性，HER2陽(yáng)性過(guò)表達(dá)）和基底樣型（ER、PR和HER2均陰性表達(dá)）[3]。表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）在多種實(shí)體腫瘤中異常表達(dá)或高表達(dá)，與腫瘤治療和預(yù)后密切相關(guān)，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)其與乳腺癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移等不良預(yù)后相關(guān)[4]。本研究分析EGFR在不同亞型青年乳腺癌中的表達(dá)情況，并探討其與臨床病理的關(guān)系，以期對(duì)臨床的個(gè)體化治療及預(yù)后提供參考價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

收集廣東省江門(mén)市中心醫(yī)院2003年5月～2014年7月經(jīng)手術(shù)切除及病理證實(shí)的青年浸潤(rùn)性乳腺癌182例的手術(shù)切除標(biāo)本?；颊呔鶠榕?，年齡18～35歲，平均（28.5±0.1）歲，占同期乳腺癌的 9.52%（182/1912），雙側(cè)罹患率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（左側(cè)∶右側(cè)為1.05∶1.00，P＞0.05），與文獻(xiàn)報(bào)道一致[5]。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)研究通過(guò)，所有患者均同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 制片 所有手術(shù)切除標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，固定時(shí)間為12～24 h，常規(guī)脫水、石蠟包埋，4 μm 連續(xù)切片，Leica（型號(hào) ST5020）全自動(dòng) HE染色儀染色，Leica（型號(hào)CV5030）全自動(dòng)封片機(jī)封片；同時(shí)，連續(xù)切取10張硅化白片備用。

1.2.2 檢測(cè)方法 應(yīng)用BenchMARK XT全自動(dòng)免疫組化儀，采用Envision二步法檢測(cè)腫瘤組織中ER、PR、HER2及 EGFR 表達(dá)情況；ER（克隆號(hào) EP1）、PR（克隆號(hào)EP2）和EGFR（克隆號(hào)UMAB96）購(gòu)自北京中杉金橋生物科技有限公司，HER2購(gòu)自Ventana（克隆號(hào)4B5）。所有組織均設(shè)陽(yáng)性及陰性對(duì)照。

1.2.3 結(jié)果判讀 ER和PR均定位于細(xì)胞核，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)采用ASCO/CAP發(fā)布的檢測(cè)指南[6]，以檢測(cè)樣本中至少1%的腫瘤細(xì)胞核陽(yáng)性即判定為陽(yáng)性。HER2定位于細(xì)胞膜，判讀標(biāo)準(zhǔn)按照《乳腺癌HER2檢測(cè)指南（2014版）》[7]，以＞10%的浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜染色判讀為陽(yáng)性。EGFR定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿，應(yīng)用雙評(píng)分半定量法判斷陽(yáng)性細(xì)胞染色深度和陽(yáng)性細(xì)胞百分率，具體標(biāo)準(zhǔn)[8]：細(xì)胞無(wú)著色計(jì)0分，輕度著色計(jì)1分，中度著色計(jì)2分，深度著色計(jì)3分；然后在高倍鏡下隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野（400×）計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞中染色陽(yáng)性的細(xì)胞，計(jì)算其占總細(xì)胞數(shù)的百分比，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞的比例計(jì)分：0～5%細(xì)胞著色計(jì)0分，6%～25%細(xì)胞著色計(jì)1分，26%～50%細(xì)胞著色計(jì)2分，51%～75%細(xì)胞著色計(jì)3分，＞75%細(xì)胞著色計(jì)4分。以上兩種計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)之和≥4分者為陽(yáng)性，＜4分為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS l7.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 15.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。采用COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析相對(duì)危險(xiǎn)度。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 182例青年乳腺癌分子分型及各型EGFR陽(yáng)性情況

依據(jù)分子表達(dá)特點(diǎn)，按照文獻(xiàn)[9-10]標(biāo)準(zhǔn)，青年乳腺癌分為4個(gè)亞型，即Luminal A型（108例）、Luminal B 型（9例）、HER2過(guò)表達(dá)型（47例）和 Basal-like型 （26例）。182例青年乳腺癌中EGFR陽(yáng)性率為62.1%（113例）， 其中為 Luminal A型為 43.5%（48例），Luminal B 型為 22.2%（2例），HER2過(guò)表達(dá)型為93.6%（44例），Basal-like型為 73.1%（19例）。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示：不同分子亞型青年乳腺癌中EGFR陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （χ2=35.154，P＜0.05）；HER2過(guò)表達(dá)型EGFR陽(yáng)性表達(dá)率最高，明顯高于Basal-like型 （χ2=5.974，P＜0.05），Luminal B 型 （χ2=26.248，P＜0.05）；但 Luminal A 型和 Luminal B 型比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.676，P ＞ 0.05）。

2.2 EGFR陽(yáng)性不同分子亞型青年乳腺癌與臨床病理的關(guān)系

EGFR陽(yáng)性不同分子亞型青年乳腺癌與腫瘤大小和組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)（P＞0.05），但與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)及是否有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.3 COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果

結(jié)果顯示：患者TNM分期和HER2表達(dá)是影響該組患者預(yù)后的獨(dú)立因素，且TNM分期對(duì)預(yù)后影響最大，相對(duì)危險(xiǎn)度為6.013（P＜0.05），其次為HER2表達(dá)，相對(duì)危險(xiǎn)度分別為2.612（P＜0.05）。

3 討論

乳腺癌越來(lái)越成為影響女性健康的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈現(xiàn)年輕化趨勢(shì)。文獻(xiàn)報(bào)道認(rèn)為青年乳腺癌具有較強(qiáng)的侵襲性，預(yù)后不良[8-9]。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)和基因組學(xué)的迅猛發(fā)展，雖然乳腺癌的個(gè)體化治療取得較大突破，但對(duì)于青年乳腺癌患者的治療及預(yù)后不能令人滿(mǎn)意。腫瘤分子分型最早在1999年由美國(guó)國(guó)立癌癥研究所提出，通過(guò)綜合的分子分析技術(shù)使腫瘤的分類(lèi)基礎(chǔ)由形態(tài)學(xué)轉(zhuǎn)向以分子特征為基礎(chǔ)的新的腫瘤分類(lèi)系統(tǒng)。目前，臨床廣泛應(yīng)用的是Perou和Sorlie的分型方法[9-10]。EGFR是表皮生長(zhǎng)因子（EGF）受體，屬于酪氨酸受體家族的一種，廣泛分布于哺乳動(dòng)物的上皮細(xì)胞級(jí)膠質(zhì)細(xì)胞，與細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖及分化密切相關(guān)。EGFR在多種腫瘤中異常高表達(dá)，與腫瘤如乳腺癌、結(jié)直腸癌、胃癌和卵巢癌的不良預(yù)后有關(guān)[12-15]。近來(lái)，針對(duì)EGFR過(guò)表達(dá)的靶向藥物拉帕替尼已應(yīng)用到臨床，因青年乳腺癌中EGFR存在高表達(dá)，故篩選并檢測(cè)乳腺癌EGFR對(duì)于指導(dǎo)治療和判斷預(yù)后具有重要意義。本研究分析182例不同分子亞型青年乳腺患者EGFR表達(dá)情況，研究結(jié)果顯示不同分子亞型青年乳腺癌中EGFR陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=35.154，P＜0.05），其中 HER2過(guò)表達(dá)型EGFR陽(yáng)性表達(dá)率最高（93.6%），提示EGFR和HER2在青年乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展中可能具有協(xié)同機(jī)制。

表1 EGFR陽(yáng)性不同分子亞型青年乳腺癌與臨床病理的關(guān)系（例）

本研究同時(shí)分析EGFR陽(yáng)性不同分子亞型青年乳腺癌與臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示：EGFR陽(yáng)性不同分子亞型青年乳腺癌與腫瘤大小和組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)（P＞0.05），但與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)及是否有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。研究結(jié)果表明腫瘤大小和組織學(xué)分級(jí)對(duì)于EGFR陽(yáng)性不同分子亞型青年乳腺癌患者并不是目前的預(yù)后因素，而是和臨床高分期呈正相關(guān)。COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果顯示：患者TNM分期是影響該組患者預(yù)后的獨(dú)立因素，TNM分期對(duì)預(yù)后影響最大，相對(duì)危險(xiǎn)度為6.013（P＜0.05），其次為 HER2，相對(duì)危險(xiǎn)度分別為 2.612（P＜0.05）。因EGFR、HER2均屬于I型跨膜酪氨酸激酶生長(zhǎng)因子受體成員，具有酪氨酸激酶活性，它們與配體結(jié)合后導(dǎo)致DNA合成增加，引起細(xì)胞的過(guò)度分裂與增殖，同時(shí)對(duì)腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有促進(jìn)作用，本研究結(jié)果顯示EGFR陽(yáng)性的腫瘤細(xì)胞更具有早期浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的趨勢(shì)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[17]。

一般認(rèn)為，腫瘤分級(jí)及分期越高，預(yù)后越差。不同分子亞型青年乳腺癌中EGFR表達(dá)與臨床分期呈明顯正相關(guān)，提示該組患者預(yù)后差與其他亞型。隨著抗EGFR靶向藥物拉帕替尼的應(yīng)用，為該組患者帶來(lái)新的希望，同時(shí)也為精準(zhǔn)檢測(cè)乳腺癌中EHFR表達(dá)情況提出挑戰(zhàn)。本研究基于免疫組化方法，由全自動(dòng)免疫組化儀完成，結(jié)果相對(duì)可靠。

綜上所述，不同分子亞型青年乳腺癌中EGFR陽(yáng)性表達(dá)率不同，檢測(cè)青年乳腺癌EGFR對(duì)于指導(dǎo)臨床制訂合理的個(gè)體化治療方案及準(zhǔn)確評(píng)估預(yù)后具有重要意義。

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