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    人IL-29的定點(diǎn)突變及抗腫瘤活性初步分析

    2015-07-19 13:05:24陳偉朱榮葛春蕾陸源李利云李菲鄔敏辰
    生物工程學(xué)報(bào) 2015年5期
    關(guān)鍵詞:緩沖液定點(diǎn)酵母

    陳偉,朱榮,葛春蕾,陸源,李利云,李菲,鄔敏辰

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    人IL-29的定點(diǎn)突變及抗腫瘤活性初步分析

    陳偉1,朱榮2,葛春蕾2,陸源3,李利云2,李菲1,鄔敏辰1

    1 江南大學(xué)無錫醫(yī)學(xué)院,江蘇無錫 214122 2 江南大學(xué)生物工程學(xué)院,江蘇無錫 214122 3 江南大學(xué)藥學(xué)院,江蘇無錫 214122

    陳偉, 朱榮, 葛春蕾, 等. 人IL-29的定點(diǎn)突變及抗腫瘤活性初步分析. 生物工程學(xué)報(bào), 2015, 31(5): 702–710.Chen W, Zhu R, Ge CL, et al.Site-directed mutagenesis of human IL-29 and antineoplastic activity of the recombinant human IL-29 variant. Chin J Biotech, 2015, 31(5): 702–710.

    為探討人白細(xì)胞介素-29 (hIL-29) 變異體的抗腫瘤活性,根據(jù)hIL-29成熟肽的生物信息學(xué)分析數(shù)據(jù),采用大引物PCR方法對(duì)其肽鏈第33位賴氨酸、35位精氨酸的編碼基因進(jìn)行定點(diǎn)突變,獲得的hIL-29變異體基因構(gòu)建重組真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化畢赤酵母 () GS115進(jìn)行發(fā)酵表達(dá),經(jīng)純化得到重組人白細(xì)胞介素-29變異體蛋白 (rhIL-29mut33,35)。經(jīng)CCK-8法檢測抗腫瘤細(xì)胞增殖的數(shù)據(jù)顯示,rhIL-29mut33,35對(duì)肝癌細(xì)胞BEL7402、結(jié)腸癌細(xì)胞HCT8和胃癌細(xì)胞SGC7901的增殖均具有抑制作用,高劑量組對(duì)這3種腫瘤細(xì)胞的增殖抑制率分別為 (30.99 ± 1.58)%、(22.47 ± 1.37)% 和 (32.05 ± 2.02)%,而且抗增殖作用比野生型rhIL-29的更強(qiáng) (< 0.01),表明變異體rhIL-29mut33,35具有潛在的醫(yī)藥開發(fā)價(jià)值。

    白細(xì)胞介素-29,定點(diǎn)突變,變異體,抗腫瘤活性

    人IL-29是2003年初發(fā)現(xiàn)的一種新的細(xì)胞因子[1-2]。研究發(fā)現(xiàn),IL-29和IL-28的靶細(xì)胞膜受體相同,是由IL-28R1和IL-10R2組成的異二聚體受體復(fù)合物,其中IL-28R1為結(jié)合亞基,對(duì)IL-29的細(xì)胞應(yīng)答具有特異性,IL-10R2為輔助亞基,對(duì)IL-29的細(xì)胞應(yīng)答無特異性[3]。而IL-29的胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與Ⅰ型干擾素 (Interferon,IFN) 相同,通過激活Jak-STAT (Janus kinase-signal transducer of transcription) 信號(hào)通路而產(chǎn)生效應(yīng)[4-7],因此IL-29表現(xiàn)出與Ⅰ型IFN相似的生物學(xué)性質(zhì),如抗病毒、抗增殖、免疫調(diào)節(jié)、體內(nèi)抗腫瘤等生物學(xué)活性[8-12]。由此,IL-29、IL-28A和IL-28B又被稱為IFN-λ家族,它們分別稱為IFN-λ1、IFN-λ2和IFN-λ3[13-14]。

    Gad等[3]研究發(fā)現(xiàn),對(duì)IFN-λ3肽鏈中的 34 Arg、36 Lys和44 Leu等位點(diǎn)的氨基酸進(jìn)行定點(diǎn)突變,可明顯改變其抗病毒活性。本實(shí)驗(yàn)室鄭海軍等[15]應(yīng)用生物信息學(xué)分析工具對(duì)人IL-29與IL-28B的三級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析比對(duì),發(fā)現(xiàn)兩者的受體結(jié)合區(qū)域的A、F螺旋中僅4個(gè)氨基酸殘基不同,即IL-29/IL-28B肽鏈中的33 Lys/34 Arg、35 Arg/36 Lys、43 Lys/44 Leu和143 Ala/144 Pro,對(duì)這些氨基酸殘基進(jìn)行誘變可能影響IL-29與其受體結(jié)合的親和力,進(jìn)而改變IL-29的生物學(xué)活性。

    基于上述研究發(fā)現(xiàn)和本實(shí)驗(yàn)室前期研究基礎(chǔ)[16-17],本文采用定點(diǎn)突變方法將IL-29成熟肽受體結(jié)合區(qū)域的33 Lys、35 Arg分別突變?yōu)?3 Arg、35 Lys,從而改變其與受體結(jié)合的親和力,以期獲得抗腫瘤活性更高的IL-29變異體。

    1 材料與方法

    1.1 菌種、質(zhì)粒和腫瘤細(xì)胞株

    大腸桿菌JM109、畢赤酵母GS115由本實(shí)驗(yàn)室保存;質(zhì)粒pUCm-T購自生工生物工程 (上海) 股份有限公司;質(zhì)粒pPIC9KM購自Invitrogen公司;含hIL-29成熟肽基因的重組質(zhì)粒pPIC9KM由本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建[17];人肝癌細(xì)胞BEL7402、人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT8及人胃癌細(xì)胞SGC7901由江南大學(xué)藥學(xué)院金堅(jiān)教授惠贈(zèng)。

    1.2 工具酶、培養(yǎng)基和生化試劑

    plus DNA聚合酶、各種限制性內(nèi)切酶、T4 DNA連接酶、DNA ladder marker、低分子量蛋白質(zhì)marker、EZ-10柱式DNA回收試劑盒和硝酸纖維素膜 (NC膜) 均為BBI公司產(chǎn)品;胰蛋白胨、酵母提取物為英國OXOID公司產(chǎn)品;YPD、MD、BMGY、BMMY、DAB、SDS、G418和RPMI-1640培養(yǎng)基等均為生工生物工程 (上海) 股份有限公司產(chǎn)品,培養(yǎng)基的配制按Invitrogen公司操作手冊;羊抗人IL-29多克隆抗體為美國R&D公司產(chǎn)品;HRP標(biāo)記兔抗羊IgG為上海明睿公司產(chǎn)品;新生小牛血清為浙江天杭生物科技有限公司產(chǎn)品;胰酶細(xì)胞消化液、青霉素-鏈霉素溶液(100×)、Cell Counting Kit-8試劑購自碧云天生物技術(shù)研究所;重組人干擾素α2b注射液為北京凱因科技股份有限公司產(chǎn)品;其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

    1.3 定點(diǎn)突變

    根據(jù)NCBI公布的hIL-29的編碼基因序列 (GenBank登錄號(hào):AY336716.1),結(jié)合生物信息學(xué)分析數(shù)據(jù),設(shè)計(jì)1對(duì)PCR引物及1條突變引物,擴(kuò)增產(chǎn)物為編碼hIL-29成熟肽的cDNA,其堿基序列中第98位堿基T定點(diǎn)突變?yōu)镃,第104位堿基C定點(diǎn)突變?yōu)門,引物序列見表1。

    表1 引物及其序列

    The underlined sequences are the mutated sites.

    hIL-29成熟肽基因的定點(diǎn)突變采用大引物PCR方法,以pPIC9KM-質(zhì)粒為模板、hIL-29-F和hIL-29-M為引物,進(jìn)行第一輪PCR,反應(yīng)條件:94 ℃預(yù)變性2 min;94 ℃ 30 s,57 ℃ 30 s,72 ℃15 s,30個(gè)循環(huán);最后72 ℃延伸10 min。再進(jìn)行第二輪大引物PCR,以pPIC9KM-質(zhì)粒為模板、第一輪PCR產(chǎn)物和hIL-29-R為引物,反應(yīng)條件:94 ℃ 2 min;94 ℃ 30 s,45 ℃ 30 s,72 ℃ 1 min,2個(gè)循環(huán);94 ℃ 30 s,55 ℃ 30 s,72℃ 1 min,28個(gè)循環(huán);最后72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物用EZ-10 Spin Column DNA Extraction Kit回收目的基因,按說明書操作?;厥盏哪康幕蚺cpUCm-T連接,轉(zhuǎn)化JM109感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)藍(lán)白斑篩選陽性轉(zhuǎn)化子,送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司測序鑒定。

    1.4 重組畢赤酵母工程菌的構(gòu)建與誘導(dǎo)表達(dá)

    pPIC9KM質(zhì)粒和測序正確的重組質(zhì)粒pUCm-T-mut33,35同時(shí)用Ⅰ和Ⅰ雙酶切,回收酶切后的目的基因和pPIC9KM質(zhì)粒,用T4 DNA連接酶于10 ℃連接過夜,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化JM109感受態(tài)細(xì)胞,提取質(zhì)粒用PCR進(jìn)行篩選,獲得重組表達(dá)質(zhì)粒pPIC9KM-mut33,35,送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司測序鑒定。

    經(jīng)測序鑒定的pPIC9KM-mut33,35用Ⅰ線性化,電轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115,轉(zhuǎn)化液涂布MD平板,挑選在MD平板上生長良好的菌落點(diǎn)種至含不同濃度G418的YPD平板,篩選出高拷貝整合的重組畢赤酵母,命名為mut33,35/GS115,電轉(zhuǎn)化及篩選按Invitrogen公司操作手冊。提取工程菌株mut33,35/GS115的基因組DNA,以通用引物5¢-AOX和3¢-AOX進(jìn)行PCR,鑒定目的基因是否整合入GS115基因組內(nèi),重組工程菌的誘導(dǎo)表達(dá)按Invitrogen公司操作手冊進(jìn)行。

    1.5 rhIL-29mut33,35的分離純化及鑒定

    誘導(dǎo)表達(dá)的發(fā)酵液8 000 r/min離心10 min,收集上清液用超濾管 (截留相對(duì)分子量為10 kDa,Millipore公司) 超濾濃縮后,用檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液 (10 mmol/L,pH 6.0) 透析,然后加至預(yù)先用上述緩沖液平衡的SP-Sepharose Fast Flow陽離子交換柱 (16 mm×200 mm),以同樣緩沖液洗柱;以含NaCl的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液 (NaCl 濃度為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mol/L,pH 6.0) 進(jìn)行梯度洗脫,流速1.0 mL/min,收集各洗脫峰經(jīng)SDS-PAGE分析,將含有rhIL-29mut33,35的洗脫液超濾濃縮后冷凍干燥。

    rhIL-29mut33,35的活性用Western blotting鑒定,取少量純化的重組蛋白凍干粉,以適量無菌超純水溶解,經(jīng)SDS-PAGE后將蛋白電轉(zhuǎn)移至NC膜上,轉(zhuǎn)移的NC膜用TBST緩沖液 (10 mmol/L Tris-HCl,15 mmol/L NaCl,0.05% 吐溫–20,pH 7.2) 漂洗5次,用含10%健康兔血清的TBST緩沖液4 ℃封閉過夜,次日用TBST漂洗5次,加入羊抗人IL-29抗體 (1∶1 000)37 ℃孵育2 h,TBST漂洗5次,加入HRP標(biāo)記的兔抗羊IgG (1∶2 500) 37℃孵育1 h,TBST漂洗5次,用DAB試劑顯色。

    1.6 rhIL-29mut33,35的抗腫瘤活性分析

    將野生型rhIL-29、rhIL-29mut33,35、IFN-α2b (陽性對(duì)照) 分別設(shè)置50、500和1 000 ng/mL 3個(gè)劑量組,同時(shí)設(shè)置空白和陰性對(duì)照組(腫瘤細(xì)胞自然生長組),每組設(shè)5個(gè)平行孔。

    液氮凍存的BEL7402、HCT8和SGC7901細(xì)胞復(fù)蘇后,用RPMI 1640完全培養(yǎng)液 (含10%小牛血清) 培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期,經(jīng)0.25%胰蛋白酶消化和RPMI 1640培養(yǎng)液洗滌后,用RPMI 1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度至1×108個(gè)/mL,接種96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,100 μL/孔 (空白孔不接種),置37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后,吸去上清液;取上述樣品用RPMI 1640完全培養(yǎng)液稀釋,分別按劑量組每孔加入100 μL,空白和陰性對(duì)照組加入等體積的完全培養(yǎng)液,置37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后,每孔加入10 μL CCK-8試劑繼續(xù)培養(yǎng)1 h,用酶標(biāo)儀測定450,計(jì)算各組樣品對(duì)3株腫瘤細(xì)胞的增殖抑制率,結(jié)果用SPSS軟件22.0進(jìn)行單因素方差分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

    增值抑制率 (Inhibition ratio,IR)=(1-樣品組450值/陰性對(duì)照組450值) ×100%。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 hIL-29成熟肽基因的定點(diǎn)突變

    用大引物PCR方法對(duì)hIL-29基因進(jìn)行定點(diǎn)突變,第一輪PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分離,回收約130 bp的產(chǎn)物作為第二輪PCR的大引物,進(jìn)行第二輪PCR,擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示,在約560 bp處有一條PCR產(chǎn)物條帶 (圖1,泳道1),其大小與預(yù)期相符?;厥债a(chǎn)物與pUCm-T連接的重組質(zhì)粒pUCm-T-mut33,35,經(jīng)測序結(jié)果顯示,基因大小為563 bp,編碼181個(gè)氨基酸,將測定的mut33,35序列與hIL-29的編碼基因序列 (GenBank登錄號(hào):AY336716.1) 比對(duì)顯示:第98位堿基T突變?yōu)镃,三聯(lián)體密碼由CTT突變?yōu)镃CT,編碼產(chǎn)物由Lys突變?yōu)锳rg;第104位堿基C突變?yōu)門,三聯(lián)體密碼由CCT突變?yōu)镃TT,編碼產(chǎn)物由Arg突變?yōu)長ys。將mut33,35與pPIC9KM連接構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒pPIC9KM-mut33,35經(jīng)測序鑒定,mut33,35的序列與在pUCm-T-mut33,35中的一致,且讀碼框完全正確。

    圖1 hIL-29mut33,35的PCR擴(kuò)增

    2.2 重組畢赤酵母工程菌的構(gòu)建與誘導(dǎo)表達(dá)

    按1.4的方法,線性化的pPIC9KM-mut33,35質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化酵母GS115感受態(tài)細(xì)胞后,經(jīng)G418篩選獲得高拷貝的重組工程菌株mut33,35/GS115。提取的工程菌株基因組DNA以通用引物5¢-AOX和3¢-AOX進(jìn)行PCR鑒定的結(jié)果顯示,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為約2 200 bp和1 100 bp的DNA條帶,約2 100 bp的產(chǎn)物為酵母GS115的AOX1基因,約1 100 bp的產(chǎn)物包括目的基因 (563 bp) 和pPIC9KM質(zhì)粒上的5¢-AOX和3¢-AOX引物序列之間的片段(500 bp),表明mut33,35基因已成功整合入酵母GS115基因組中(圖2)。

    工程菌株mut33,35/GS115用1.5%的甲醇誘導(dǎo)表達(dá)96 h的發(fā)酵上清液,經(jīng)超濾和SP-Sepharose Fast Flow陽離子交換層析純化的產(chǎn)物,經(jīng)SDS-PAGE分析的圖譜顯示,在約23 kDa處有一明顯目的蛋白條帶 (圖3,泳道3),而pPIC9KM/GS115的發(fā)酵液在該處無相同條帶 (圖3,泳道2)。經(jīng)測定rhIL-29mut33,35的表觀分子量高于理論計(jì)算的相對(duì)分子量 (約20 kDa),可能是rhIL-29mut33,35在酵母GS115表達(dá)過程中發(fā)生了糖基化修飾[18]所致。

    圖2 重組畢赤酵母hIL-29mut33,35/GS115的PCR鑒定

    圖3 工程菌株hIL-29mut33,35/GS115發(fā)酵液的SDS-PAGE分析

    2.3 rhIL-29mut33,35的純化和鑒定

    發(fā)酵上清的超濾濃縮液用SP-Sepharose Fast Flow層析純化,收集的NaCl梯度洗脫液經(jīng)SDS-PAGE分析顯示,目的蛋白主要在0.4 mol/L和0.6 mol/L NaCl梯度被洗脫,而流穿峰和0.2 mol/LNaCl緩沖液洗脫的主要是色素和雜蛋白。從PAGE圖譜分析,以0.4 mol/L NaCl緩沖液洗脫的目的蛋白純度較高,而0.6 mol/L NaCl緩沖液的洗脫峰還含有少量雜蛋白 (圖4)。如需獲得純度更高的目的蛋白,可將0.4 mol/L和0.6 mol/L NaCl的洗脫峰合并后,進(jìn)一步用分子篩層析純化。

    純化的rhIL-29mut33,35經(jīng)Western blotting分析結(jié)果顯示,rhIL-29mut33,35與羊抗人IL-29抗體反應(yīng)后,在NC膜上呈現(xiàn)特異性反應(yīng)條帶,其大小約為23 kDa (圖5),與SDS-PAGE圖譜的條帶大小相同,但反應(yīng)條帶彌散,這可能是電泳轉(zhuǎn)移過程中電極緩沖液溫度升高和Western blotting的放大效應(yīng)所致。

    2.4 rhIL-29mut33,35的抗腫瘤活性分析

    用CCK-8試劑檢測rhIL-29mut33,35對(duì)腫瘤細(xì)胞BEL7402、HCT8和SGC7901的增殖抑制結(jié)果表明,各劑量組均顯示增殖抑制效應(yīng),且細(xì)胞增殖抑制率隨著rhIL-29mut33,35劑量的增加而增大,具有較明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系 (圖6?8)。

    圖4 rhIL-29mut33,35的SP Sepharose Fast Flow層析純化圖譜與洗脫峰的SDS-PAGE分析

    單因素方差分析結(jié)果顯示,rhIL-29mut33,35、野生型rhIL-29及商品化的IFN-α2b對(duì)3株腫瘤細(xì)胞的增殖均具有抑制效應(yīng),但對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的增殖抑制率各有差異。rhIL-29mut33,35的低、中、高劑量組對(duì)肝癌細(xì)胞BEL7402增殖表現(xiàn)出明顯的抑制作用 (圖6),尤其高劑量組的抑制率達(dá)(30.99±1.58)% (<0.01)。對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HCT8,僅高、中劑量組rhIL-29mut33,35的抑制作用比野生型rhIL-29的更強(qiáng) (< 0.05),低劑量組的抑制效應(yīng)差異不大 (圖7)。rhIL-29mut33,35的高劑量組對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901的抑制率達(dá)32.05 ± 2.02%,顯著高于野生型rhIL-29的作用(< 0.01),提示變異體rhIL-29mut33,35可能對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901具有較好的增殖抑制效應(yīng) (圖8)。

    圖5 rhIL-29mut33,35的Western blotting鑒定

    圖6 rhIL-29mut33,35對(duì)肝癌細(xì)胞BEL7402的增殖抑制效應(yīng)

    圖7 rhIL-29mut33,35對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HCT8的增殖抑制效應(yīng)

    圖8 rhIL-29mut33,35對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901的增殖抑制效應(yīng)

    3 討論

    自IL-29被發(fā)現(xiàn)以來,由于其具有與Ⅰ型干擾素相似的生物學(xué)活性而受到廣泛的關(guān)注,國際上對(duì)IL-29的生物學(xué)功能與醫(yī)藥應(yīng)用的相關(guān)研究日益深入。雖然IL-29與Ⅰ型IFN通過激活相同的 Jak-STAT信號(hào)通路而產(chǎn)生效應(yīng),但人體不同組織器官中IL-29受體 (IL-28R1) 的表達(dá)具有明顯差異[19-20]。本研究獲得的變異體rhIL-29mut33,35對(duì)3株不同腫瘤細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)不同,也可能與這些細(xì)胞表面IL-28R1的表達(dá)差異有關(guān)。IL-28R1在人體不同組織細(xì)胞表達(dá)的差異,使IL-29作用的靶細(xì)胞比Ⅰ型IFN的更局限。因此,IL-29作為潛在的新型干擾素類藥物,其臨床副作用可能比Ⅰ型IFN的更小[21]。

    在抗病毒活性方面,國際上對(duì)IL-29的開發(fā)已進(jìn)入臨床應(yīng)用研究,Ⅰ期臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),用聚乙二醇 (Polyethylene glycol, PEG) 對(duì)IL-29 (IFN-λ1) 進(jìn)行修飾后,PEG-IFN-λ1的半衰期和穩(wěn)定性均得到提高,同時(shí)最大限度地保留了IFN-λ1的生物學(xué)活性[22-23]。目前,PEG-IFN-λ1已進(jìn)入Ⅱ期臨床試驗(yàn),其臨床適應(yīng)癥為丙型病毒性肝炎,給藥劑量為80–240 μg,每周1次,以聚乙二醇化IFN-α2a (PEGASYS) 為對(duì)照。經(jīng)4–12周臨床應(yīng)用顯示PEG-IFN-λ1的療效良好,與PEGASYS的效果基本相同,但不良反應(yīng)更少,藥物作用更溫和,其他IFN常見的不良反應(yīng)如肌痛、疲勞、惡心和頭痛等的發(fā)生率有所下降[24-25]。

    本文采用定點(diǎn)突變方法對(duì)野生型hIL-29進(jìn)行分子改造,獲得的變異體rhIL-29mut33,35經(jīng)初步分析,顯示出較好的體外抗腫瘤細(xì)胞增殖活性,而且抗增殖作用要高于野生型rhIL-29的 (<0.01),表明變異體rhIL-29mut33,35具有潛在的醫(yī)藥開發(fā)價(jià)值,為后續(xù)研制開發(fā)新的干擾素類抗腫瘤藥物奠定了良好的基礎(chǔ)。

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    (本文責(zé)編陳宏宇)

    Site-directed mutagenesis of human IL-29 and antineoplastic activity of the recombinant human IL-29 variant

    Wei Chen1, Rong Zhu2, Chunlei Ge2, Yuan Lu3, Liyun Li2, Fei Li1, and Minchen Wu1

    1,,214122,,2,,214122,,3,,214122,,

    To explore the anti-tumor proliferation activity of human interleukin-29 (hIL-29) variant and based on bioinformatics analyzed data of hIL-29, a mutant gene-29was amplified by site-directed mutagenesis and megaprimer PCR. The-29was inserted into an eukaryotic expression plasmid pPIC9K and successfully expressed inGS115. A recombinant variant protein (rhIL-29mut33,35) was purified from the ferment supernatant of the engineering GS115. To observe the antineoplastic activity of the variant rhIL-29mut33,35, a CCK-8 reagent was used to detect the anti-proliferation effect. Results show that it has strong anti-proliferation effect when acted on liver cancer cell BEL7402, colon cancer cell HCT8 and gastric cancer cell SGC7901. The inhibition ratios of the three tumor cells were (30.99 ± 1.58)%, (22.47 ± 1.37)% and (32.05 ± 2.02)%, respectively. In high dose group, the anti-proliferation effect of the rhIL-29mut33,35was stronger than that of wild type rhIL-29 (< 0.01). This indicates the variant rhIL-29mut33,35has potential development value for medicine.

    interleukin-29, site-directed mutagenesis, variant, antineoplastic activity

    August 29, 2014; Accepted:November 15, 2014

    Wei Chen. Tel: +86-510-85328296; E-mail: chenwei@jiangnan.edu.cn

    Supported by:National Undergraduate Innovative Training Programs (No. 201210295024).

    國家大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目 (No. 201210295024 ) 資助。

    網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間:2015-02-03

    http://www.cnki.net/kcms/doi/10.13345/j.cjb.140429.html

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