中藥指紋圖譜技術(shù)在中藥炮制中的應(yīng)用

楊海玲　胡昌江　曾春暉等

摘要

近年來(lái)，中藥指紋圖譜技術(shù)在中藥炮制研究中也得到廣泛的應(yīng)用。通過(guò)查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料，介紹中藥指紋圖譜技術(shù)在產(chǎn)地加工及凈制過(guò)程中的應(yīng)用、在中藥切制過(guò)程中的應(yīng)用、在炮制輔料質(zhì)量評(píng)價(jià)研究中的應(yīng)用、在炮制工藝研究中的應(yīng)用、在飲片不同炮制方法比較及質(zhì)量控制研究中的應(yīng)用。

關(guān)鍵詞 指紋圖譜技術(shù)；中藥炮制；應(yīng)用

中圖分類(lèi)號(hào) S859.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2015）15-018-02

中藥炮制是我國(guó)一項(xiàng)傳統(tǒng)制藥技術(shù)。飲片作為中醫(yī)臨床用藥基本形式之一，其質(zhì)量的優(yōu)劣將直接影響中醫(yī)臨床療效。中藥指紋圖譜分為中藥化學(xué)成分指紋圖譜和中藥生物技指紋圖譜兩大類(lèi)[1]，具有“整體性”與“模糊性”的特點(diǎn)。中藥指紋圖譜中潛藏著大量反映中藥及其復(fù)方制劑內(nèi)在化學(xué)物質(zhì)信息的數(shù)據(jù)和變量，可對(duì)樣品的整體輪廓進(jìn)行較直觀地觀察，能較全面地反映所含成分的相對(duì)關(guān)系，還能較好地體現(xiàn)中藥成分的復(fù)雜性和相關(guān)性。因此，能更好地鑒別炮制品種，評(píng)價(jià)、控制炮制品的質(zhì)量，保證中醫(yī)臨床療效，從而有利于中藥的現(xiàn)代化和國(guó)際化。近年來(lái)，中藥指紋圖譜技術(shù)在中藥炮制研究中也得到廣泛的應(yīng)用。

1 在產(chǎn)地加工及凈制過(guò)程中的應(yīng)用

中藥炮制的凈制是指在藥材切制、炮炙或調(diào)配、制劑前，選取規(guī)定的藥用部分，除去非藥用部位、雜質(zhì)及霉變品、蟲(chóng)蛀品、灰屑等，使其達(dá)到藥用的純度標(biāo)準(zhǔn)的方法。將中藥指紋圖譜的技術(shù)運(yùn)用到藥材的凈制處理中，為飲片質(zhì)量提供保證。王莉等[2]利用HPLC法建立了通過(guò)凈制后湖北貝母的指紋圖譜。該方法可以有效地控制湖北貝母飲片的質(zhì)量以及對(duì)炮制工藝的評(píng)價(jià)，為進(jìn)一步研究貝母炮制機(jī)理提供參考。仇立志[3]通過(guò)HPLC法建立不同產(chǎn)地懷牛膝飲片、最佳工藝硫磺熏蒸鮮牛膝飲片的指紋圖譜，為硫磺熏蒸懷牛膝篩選最佳炮制工藝，并且為懷牛膝飲片的質(zhì)量評(píng)價(jià)及安全使用提供依據(jù)。劉艷芳等[4]運(yùn)用多指標(biāo)定量結(jié)合指紋圖譜分析方法對(duì)遠(yuǎn)志根皮、根及木心的化學(xué)成分進(jìn)行分析。該研究為遠(yuǎn)志科學(xué)炮制加工方法的制定提供參考。

2 在中藥切制過(guò)程中的應(yīng)用

飲片切制是指將凈選后的藥物進(jìn)行軟化，切成一定規(guī)格的片、絲、塊、段等炮制工藝。李友等[5]采用正交設(shè)計(jì)，以藥材軟化時(shí)加水量、潤(rùn)制時(shí)間和飲片切制厚度為考察因素，以水溶性浸出物為指標(biāo)，并且采用HPLC指紋圖譜技術(shù)對(duì)板藍(lán)根粗粉和水潤(rùn)切制后的飲片進(jìn)行比較，最終建立板藍(lán)根軟化切制的最佳工藝，建立了板藍(lán)根藥材醋酸乙酯萃取物HPLC指紋圖譜。該研究證實(shí)在板藍(lán)根切制前后指紋圖譜對(duì)照譜圖差異明顯，切制后中等極性部分損失較多。

3 在炮制輔料質(zhì)量評(píng)價(jià)研究中應(yīng)用

加入某些輔料進(jìn)行炮制，可起到增強(qiáng)療效、降低毒性等作用。輔料的質(zhì)量將影響中藥飲片的質(zhì)量、臨床療效，那么可運(yùn)用指紋圖譜技術(shù)對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)控。張麗等[6]對(duì)生姜榨汁、生姜煮汁、干姜煮汁3種不同制法所得炮制輔料姜汁進(jìn)行RPHPLC指紋圖譜的比較研究。該方法較全面地反映不同制法的姜汁間的差異。

4 在炮制工藝研究中應(yīng)用

在中藥炮制工藝過(guò)程中，須講究火候。利用指紋圖譜技術(shù)，控制炮制工藝，大大提高飲片的炮制的質(zhì)量，可為進(jìn)一步的飲片炮制方法及原理研究提供科學(xué)依據(jù)。何曉燕等[7]用 HPLC 指紋圖譜對(duì)檳榔炒制過(guò)程物質(zhì)基礎(chǔ)變化進(jìn)行研究，為揭示檳榔炮制原理提供依據(jù)。張洪利等[8]通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，采用HPLC指紋圖譜技術(shù)結(jié)合抑菌藥效試驗(yàn)優(yōu)選姜黃連飲片最佳工藝。劉艷菊等[9]采用X射線衍射法優(yōu)選水飛朱砂炮制工藝，建立朱砂水飛炮制工藝質(zhì)量控制的新方法。

5 在飲片不同炮制方法比較及質(zhì)量控制研究中應(yīng)用

5.1 薄層色譜指紋圖譜

TCL指紋圖譜多用于中藥飲片各種成分的定性鑒別。徐臘英等[10]采用薄層鑒別方法研究蒼術(shù)麩炒前后的化學(xué)成分變化。該方法可用于蒼術(shù)藥材的定性鑒別和輔料的研究。高曉霞等[11]運(yùn)用薄層色譜指紋圖譜方法，對(duì)10份不同采集地制何首烏樣品進(jìn)行研究。該方法可快速、有效地鑒別制何首烏，并且為評(píng)價(jià)其質(zhì)量及品種整理提供新的證據(jù)。王彥青[12]采用薄層指紋圖譜對(duì)延胡索的醋烘、醋煮、醋炙、酒炙的炮制品進(jìn)行鑒別研究，為醋元胡臨床用藥的有效性奠定基礎(chǔ)。

5.2 高效液相指紋圖譜

HPLC具有分離效能高、分析速度快等優(yōu)點(diǎn)。它在中藥飲片炮制前后比較中有廣泛運(yùn)用。曹建軍等[13]利用HPLC指紋圖譜技術(shù)檢測(cè)生地黃炮制成熟地黃過(guò)程中梓醇等主要活性成分及指紋的變化，確定熟地黃炮制終點(diǎn)。朱明貴等[14]采用 HPLC法建立生、醋五味子指紋圖譜，為五味子飲片的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。孔繁瑤等[15]對(duì)豨薟草生品及炮制一至九制品進(jìn)行HPLC指紋圖譜研究，為豨薟草炮制過(guò)程中化學(xué)成分變化規(guī)律和進(jìn)一步闡明其療效的改變奠定基礎(chǔ)。耿媛媛等[16]采用 HPLC 法建立二神丸不同提取部位的指紋圖譜，采用灰關(guān)聯(lián)分析法建立其譜效關(guān)系，為二神丸的質(zhì)量評(píng)價(jià)及其炮制機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

5.3 氣相色譜指紋圖譜

GC主要運(yùn)用于含揮發(fā)性成分的中藥飲片及其制劑中揮發(fā)油的鑒別與比較。在具體使用時(shí)，它常與質(zhì)譜檢測(cè)器（MS）聯(lián)用。吳國(guó)清等[17]運(yùn)用毛細(xì)管氣相色譜法對(duì)薏苡仁生品及炮制品提取物進(jìn)行分析，為薏苡仁生品及炮制品的質(zhì)量控制提供有效手段。盛菲亞等[18]采用GCMS法，建立了香附生品、參照品和醋制品中揮發(fā)油的指紋圖譜，為揭示香附醋制機(jī)制及其物質(zhì)基礎(chǔ)提供一定的科學(xué)依據(jù)。耿媛媛等[19]采用GCMS分析二神丸中補(bǔ)骨脂和肉豆蔻的炮制對(duì)其4種組合揮發(fā)性成分的影響。該研究證實(shí)補(bǔ)骨脂和肉豆蔻炮制后入藥可降低毒性。王加等[20]利用GCMS聯(lián)用技術(shù)鑒別生川烏和制川烏揮發(fā)性成分，為川烏的進(jìn)一步研究提供科學(xué)依據(jù)。

5.4 高效毛細(xì)管電泳指紋圖譜

目前，高效毛細(xì)管電泳指紋圖譜主要運(yùn)用于中藥炮制品成分分析與比較研究。施婧妮等[21]利用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法，建立了10 批生鱉甲與醋鱉甲有效物質(zhì)部位的指紋圖譜，并且進(jìn)行對(duì)比研究。結(jié)果顯示，鱉甲炮制前后化學(xué)成分發(fā)生“質(zhì)”與“量”的變化。胡瑩[22]采用高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定金櫻子及其炮制品的指紋圖譜。該結(jié)果可作為金櫻子飲片質(zhì)量的評(píng)價(jià)依據(jù)。張英等[23]運(yùn)用高效毛細(xì)管電泳法對(duì)杜仲炮制前后綠原酸的含量進(jìn)行分析。該研究為杜仲炮制具有重要意義提供依據(jù)。

5.5 紅外光譜指紋圖譜

紅外光譜指紋圖譜技術(shù)在飲片炮制前后比較及其制劑中應(yīng)用較多。吳明俠等[24]采用傅里葉變換紅外光譜技術(shù)對(duì)野菊花不同炮制品進(jìn)行研究，獲得二者的紅外譜、二階導(dǎo)數(shù)譜和二維相關(guān)紅外譜。尤淑霞等[25]分別測(cè)定白礬與其炮制品枯礬的紅外光譜圖譜，為白礬與枯礬的鑒別提供紅外光譜的鑒別指標(biāo)。李可藏等[26]比較了山茱萸炮制前后紅外光譜圖差異，為山茱萸生品、酒制品鑒別提供新的方法。畢曉黎等[27]對(duì)補(bǔ)骨脂與鹽補(bǔ)骨脂配方顆粒紅外光譜特征進(jìn)行研究。該方法快速、準(zhǔn)確地鑒別補(bǔ)骨脂與鹽補(bǔ)骨脂配方顆粒。

5.6 紫外光譜指紋圖譜

紫外光譜可分為導(dǎo)數(shù)光譜及紫外譜線組法兩種，可用于中藥炮制品的質(zhì)量監(jiān)控。翁德會(huì)等[28]采用紫外譜線組法，對(duì)厚樸飲片和姜厚樸飲片4種不同極性提取液進(jìn)行紫外掃描，并且應(yīng)用UV測(cè)定厚樸中酚性成分的含量，為厚樸的研究和質(zhì)量監(jiān)控提供參考。鄭玉麗[29]采用紫外分光光度法，比較生乳香、清炒乳香、醋炙乳香中三萜類(lèi)有機(jī)酸含量，其中以醋炙品乳香三萜類(lèi)有機(jī)酸含量最高。

5.7 X射線衍射Fourier指紋圖譜

許臘英[30]等運(yùn)用X射線衍射Fourier指紋圖譜法對(duì)烏梅以及烏梅輕炭、烏梅標(biāo)炭、烏梅重炭粉末進(jìn)行分析，結(jié)果表明烏梅、烏梅炭粉末XRD圖譜重現(xiàn)性好，均具指紋特征，可作為鑒別指標(biāo)。雷雨等[31]采用X射線衍射指紋圖譜分析方法，分析不同產(chǎn)地、批次的自然銅生煅品X射線衍射指紋圖譜。該方法從整體上顯示生煅品的特征，為自然銅生煅品的質(zhì)量控制提供有效手段。

5.8 中藥生物技術(shù)指紋圖譜

中藥生物指紋圖譜又叫DNA指紋圖譜。這種技術(shù)主要有 DNA片段分析技術(shù)（RFLP）、任意引物聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（APPCR）、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性（RAPD）、多聚酶鏈反應(yīng)（PCR）等。目前，該項(xiàng)技術(shù)在炮制研究也有一定的應(yīng)用。許臘英等[32]對(duì)不同產(chǎn)地的茅蒼術(shù)炮制前后進(jìn)行 DNA指紋圖譜研究，結(jié)果表明不同產(chǎn)地的茅蒼術(shù)生品 DNA指紋圖譜一致，幾種麩炒蒼術(shù)的 DNA指紋圖譜與生品有較大差異。該方法可用于鑒別同種藥材的生品。許臘英等[33]采用RAPD技術(shù)對(duì)不同產(chǎn)地烏梅、烏梅炭進(jìn)行研究，結(jié)果表明不同產(chǎn)地的烏梅生品 DNA 指紋圖譜一致；經(jīng)炮制后的烏梅炭 DNA 指紋圖譜與生品有較大的差異。該研究RAPD 技術(shù)可作為烏梅生品道地品種的鑒定的參考方法。

6 結(jié)語(yǔ)

中藥指紋圖譜的建立能全面反映中藥的整體化學(xué)、生物學(xué)特征，體現(xiàn)其內(nèi)在的整體質(zhì)量。該項(xiàng)技術(shù)在中藥炮制研究中的發(fā)展與應(yīng)用，不僅能夠客觀地評(píng)價(jià)炮制過(guò)程對(duì)藥物的影響，而且能進(jìn)一步提高中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)化程度，從而更好地控制炮制品的質(zhì)量，保證和提高臨床療效。這必將在今后實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化及中醫(yī)藥走向世界過(guò)程中發(fā)揮重要的作用。

參考文獻(xiàn)

[1]

周玉新.中藥指紋圖譜研究技術(shù)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：3.

[2] 王莉，許臘英，陳智國(guó)，等.凈制湖北貝母指紋圖譜研究[J].湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，12（4）：27-29.

[3] 仇立志.硫磺熏蒸對(duì)懷牛膝飲片質(zhì)量的相關(guān)性評(píng)價(jià)[D].濟(jì)南：山東中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

[4] 劉艷芳，彭東艷，楊曉娟，等.去心與不去心遠(yuǎn)志藥材的化學(xué)成分和藥效學(xué)比較研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2012，47（24）：1975-1979.

[5] 李友，馬莉，龔慕辛，等.板藍(lán)根切制工藝的優(yōu)選及切制前后指紋圖譜的變化研究[J].中國(guó)中藥雜志，2009，34（19）：2177-2180.

[6] 張麗，王智民，王維皓，等.作炮制輔料用姜汁的HPLC指紋圖譜比較[J].中國(guó)中藥雜志，2008（9）：1010-1013.

[7] 何曉燕，劉玉杰，黃永亮，等.檳榔炒制過(guò)程中不同炮制品的指紋圖譜分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（17）：44-46.

[8] 張洪利，康大力，黃艷萍，等.多指標(biāo)正交試驗(yàn)優(yōu)化姜黃連炮制工藝[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（9）：14-16，18.

[9] 劉艷菊，許康，潘新，等.X射線衍射法優(yōu)選水飛朱砂炮制工藝[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23（1）：184-185.

[10] 許臘英，陳紹文，毛翼，等.蒼術(shù)炮制品及其輔料麥麩的薄層鑒別研究[J].湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006（3）：17-18.

[11] 高曉霞，嚴(yán)寒靜，梁從慶.不同采集地制何首烏薄層色譜指紋圖譜研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2007，13（5）：4-7.

[12] 王彥青.延胡索不同炮制方法的薄層色譜鑒別對(duì)比研究[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2014，12（11）：50-51.

[13] 曹建軍，梁宗鎖，楊東風(fēng)，等.應(yīng)用HPLC指紋圖譜技術(shù)確定熟地黃炮制終點(diǎn)[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35（19）：2556-2560.

[14] 朱明貴，李麗，肖永慶，等.五味子醋制前后指紋圖譜的分析比較[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（21）：100-104.

[15] 孔繁瑤，胡慧華，田志浩，等.炮制前后豨薟草指標(biāo)性成分及指紋圖譜研究[J].中國(guó)中藥雜志，2014，39（15）：2907-2911.

[16] 耿媛媛，胡昌江，潘新，等.二神丸不同提取部位溫脾止瀉的譜效關(guān)系研究[J].中草藥，2014，45（18）：2658-2663.

[17] 吳國(guó)清，曹崗，夏云華.中藥薏苡仁炮制前后 GC 指紋圖譜研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2013，31（7）：1495-1498.

[18] 盛菲亞，盧君蓉，彭偉，等.香附炮制前后揮發(fā)油的GCMS 指紋圖譜對(duì)比研究[J].中草藥，2013，44（23）：3321-3327.

[19] 耿媛媛，胡昌江，潘新，等.GC-MS 分析炮制對(duì)二神丸中揮發(fā)性成分的影響[J].中成藥，2014，36（10）：2148-2151.