高效液相色譜法測定蒙藥巴木湯中梔子苷的含量

郭 君

(內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010017)

蒙藥巴木湯(原名：巴瑪音茶湯)，處方來自《蒙藥驗(yàn)方》［1］，由訶子、毛訶子、梔子、紫草茸、茜草、紫草、香青蘭、苦參、玫瑰花等9 味蒙藥材組成，具有降琪素、協(xié)日，協(xié)日烏素，止痛效果的經(jīng)典處方，尤其對下肢巴木病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等療效顯著。本文采用高效液相色譜法(HPLC 法)，參照中國藥典2010 版一部［2］中梔子項(xiàng)下的含量測定方法，對本品中梔子苷的含量進(jìn)行了測定，結(jié)果如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：Alltech 426 泵uvis-200 檢測器;電子天平。

1.2 試劑與試藥：梔子苷對照品(110749-200410 供含量測定用)中國藥品生物制品檢定所提供;巴木湯(4 批樣品)烏海市醫(yī)院制劑室提供，批號分別為(20120708，20120712，20120715，20120718);乙腈、甲醇為色譜純，水為高純水，其它試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果

2.1 色譜條件：采用Luna VP-ODS(250 ×4.6mm)柱，流動相：乙腈-水(12：88v/v)，檢測波長為238nm，流速：1.0mL.min-1，柱溫40℃，理論板數(shù)按梔子苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2 對照品溶液制備：精密稱取梔子苷對照品適量，加甲醇制成每1mL 含30μg 的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備：取本品粉末約1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率100W，頻率40KHZ)20min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10mL，置25mL 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 線性關(guān)系考察：濃度為0.15mg. mL-1的梔子苷精密量取0.5、1、2、3、4 和5mL，用甲醇定容至10mL 后測定。面積對濃度進(jìn)行回歸分析?；貧w方程為：y =1437888.87x-41297.57，r=1.00，梔子苷在0.1496 ～1.4960μg 范圍內(nèi)與峰面積值之間呈良好線性關(guān)系，結(jié)果見表1。

表1 梔子苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)值表

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密量取同一批供試品溶液(批號：20120708)，分別于0h、2h、4h、6h、8h、12h、24h 各進(jìn)樣10μL，進(jìn)行測定峰面積積分值，數(shù)據(jù)分析結(jié)果表明，梔子苷RSD 值為0.61%，說明梔子苷在24h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 精密度試驗(yàn)：精密量取同一批供試品溶液(批號：20120708)各10μL，重復(fù)進(jìn)樣6 次，測定梔子苷的峰面積積分值，結(jié)果表明，梔子苷RSD 值為0.47%，說明供試品精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批號樣品(批號：20120708)6 份，精密量取樣品各1.5g，按“供試品溶液制備方法”進(jìn)行操作，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣，結(jié)果表明，梔子苷RSD 值為1.67%，表明供試品的重現(xiàn)性良好。

表2 梔子苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.8 回收率試驗(yàn)：加樣回收試驗(yàn)取供試品含9 份(各約0.75g)精密稱定，分別精密加入濃度為0.169 mg. mL-1的梔子苷對照品3、6、9mL 用甲醇定容至25mL。測定峰面積積分值，數(shù)據(jù)分析結(jié)果表明，梔子苷回收率為101.95%，RSD值為1.14%，表明回收率很好。詳見表2。

3 樣品含量測定

取樣品4 批(批號：20120708，20120712，20120715，20120718)，每個批號取3 份樣品約1.5g，按2.3 供試品制備方法制備，分別按上述色譜條件測定含量，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定表

4 討 論

4.1 線性關(guān)系考察中(r 值1.00)，梔子苷在0.1496 ～1.4960μg 范圍內(nèi)與峰面積值之間呈良好線性關(guān)系;精密度試驗(yàn)供試品峰面積積分值的RSD 為0.47%，表明供試品精密度良好;穩(wěn)定性試驗(yàn)0、2、4、6、8、12、24h 峰面積積分值RSD 為0.61%，說明沒食子酸在24h 內(nèi)穩(wěn)定性良好;重現(xiàn)性試驗(yàn)供試品峰面積積分值RSD 為1.67(n =6)，說明供試品重現(xiàn)性良好;加樣回收試驗(yàn)9 份樣品平均回收率為101.95%，RSD 值為1.14%，說明回收率很好。

4.2 此含量測定方法簡便、快捷、準(zhǔn)確度效、重現(xiàn)性好、回收率高，因此可以在各研究機(jī)構(gòu)以后的蒙藥標(biāo)準(zhǔn)化研究中廣泛推廣應(yīng)用。

［1］內(nèi)蒙古醫(yī)藥委員會. 蒙藥驗(yàn)方［M］. 呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社，1971：253.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：231.