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    蒙藥忠倫阿湯的長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)研究△

    2015-07-13 02:13:42湛春波董秋梅劉春慧屈愛桃邢雅儒
    中國(guó)民族醫(yī)藥雜志 2015年8期
    關(guān)鍵詞:蒙藥臟器內(nèi)蒙古

    湛春波 董秋梅 郝 華 劉春慧 王 琦 屈愛桃 邢雅儒 陳 琨

    (1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)2011 級(jí)研究生,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110;2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院,內(nèi)蒙古 呼和浩特010110;3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)2012 級(jí)研究生,內(nèi)蒙古 呼和浩特010110;4.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,內(nèi)蒙古 呼和浩特010110 5.赤峰市第二蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院,內(nèi)蒙古 赤峰 024000;)

    蒙藥忠倫阿湯由梔子、訶子、川楝子、苦參和地格達(dá)(蒙藥又名當(dāng)藥、紫花地丁)5 味藥組成,具有清熱、涼血、舒筋、止痛功效,是傳統(tǒng)蒙醫(yī)治療熱性黃水病,游痛證、痛風(fēng)等的常用方劑[1],其癥狀病程相當(dāng)西醫(yī)學(xué)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、急性風(fēng)濕熱等,目前國(guó)內(nèi)已有報(bào)道,在臨床上使用忠倫阿湯原方及加減類方在治療風(fēng)濕免疫病、骨關(guān)節(jié)炎等方面具有一定療效[2]。既往的基礎(chǔ)研究已表明蒙藥忠倫阿湯抗炎鎮(zhèn)痛作用明確,并能抑制膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型的足腫脹,具有較好的抑制腫瘤壞死因子、白介素等免疫炎癥的作用[3]。本研究旨在觀察藥物實(shí)驗(yàn)大鼠的長(zhǎng)期毒性,為進(jìn)一步指導(dǎo)臨床合理用藥提供依據(jù),現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

    1 材 料

    1.1 實(shí)驗(yàn)藥物:忠倫阿湯散,蒙藥復(fù)方制劑,黃色粉末,味苦,由內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)院提供,生產(chǎn)批號(hào):20121216 規(guī)格:3g/袋,每袋含生藥3g,臨床成人用藥劑量為:1 袋/次(3g/次),2 次/日。

    1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:Wistar 大鼠80 只,雌雄各半,由內(nèi)蒙古大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,許可證號(hào):SCXK(蒙)2002-0001,清潔級(jí)。

    2 方 法

    2.1 動(dòng)物飼養(yǎng)室環(huán)境:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察室溫度為(18 ±2)℃,相對(duì)濕度為40% ~60%,動(dòng)物飼養(yǎng)于獨(dú)立通風(fēng)隔離籠具中。

    2.2 實(shí)驗(yàn)過程

    2.2.1 動(dòng)物分組:Wistar 大鼠80 只,雌雄各半,按體重隨機(jī)分組,分高劑量組、中劑量組、低劑量組、空白對(duì)照組共4組,每組雌鼠10 只,雄鼠10 只,雌雄分籠飼養(yǎng),每籠5 只。

    2.2.2 實(shí)驗(yàn)藥物煎煮配置方法、藥物濃度及給藥劑量的確定:忠倫阿湯散劑分別按大鼠臨床等效給藥劑量的50 倍、25 倍、12.5 倍作為高、中、低各組的給藥劑量,耐藥倍數(shù)取近似值6,每星期稱體重1 次,按體重調(diào)節(jié)給藥劑量,實(shí)驗(yàn)藥物輕煎冷卻至室溫后萃取上清液,按實(shí)驗(yàn)要求蒸發(fā)掉多余水分,至所需體積后放入4℃冰箱備用,每日定時(shí)灌胃2次。

    2.2.3 實(shí)驗(yàn)方法:研究方法參考彭城[5]《中醫(yī)藥動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)方法》,及陳奇《中藥藥理研究方法學(xué)》[6]。長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)給藥15 周后停藥,每組隨機(jī)抽取10 只大鼠做血常規(guī),血液生化指標(biāo)分析,并解剖,相關(guān)臟器稱重,計(jì)算臟器系數(shù),將所取臟器進(jìn)行固定,準(zhǔn)備進(jìn)行病理組織學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察,余下大鼠停止灌胃給藥,正常飼養(yǎng)2 周進(jìn)行解剖觀察。

    2.2.4 觀測(cè)指標(biāo):一般情況:每天2 次灌胃后觀察大鼠的反應(yīng),包括自主活動(dòng),精神狀態(tài)、飲水、攝食、尿液糞便等情況,進(jìn)行記錄。血液學(xué)檢查:白細(xì)胞總數(shù)及其分類、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、血小板等。血液生化學(xué)檢查:AST、ALP、ALT、BUN、TP、ALB、Cr、TC、T-BIL、GLU 等十項(xiàng)指標(biāo)。大鼠病理組織學(xué)檢查:大鼠乙醚吸入麻醉后心臟取血,解剖,取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、卵巢、睪丸、胸腺、甲狀腺、腦組織,經(jīng)10%中性福爾馬林溶液浸泡固定,常規(guī)石蠟切片,HE染色。

    2.3 統(tǒng)計(jì)方法:統(tǒng)計(jì)資料用±s 表示,用SPSS17.0 醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,結(jié)果取α=0.05,P<0.05 認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    3 結(jié) 果

    3.1 一般情況:忠倫阿湯給藥組尿量明顯多于對(duì)照組,高劑量組大鼠尿量高于中劑量組,中劑量組高于低劑量組(鼠籠托盤內(nèi)尿液可見),且高劑量組有藍(lán)綠色尿液,停藥后各組小便情況無差別。給藥期間各組大鼠偶有大便稀,可自行緩解。行為活動(dòng)和毛色各組無顯著差異。

    3.2 體重:由表1、表2 可知,對(duì)照組與高、中、低各組比較,蒙藥忠倫阿湯灌胃給藥15 周,停藥恢復(fù)性觀察2 周,各組大鼠體重遞增,P>0.05,沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    表1 給藥期各組忠倫阿湯對(duì)大鼠體重的影響(±S,單位g ,n=20)

    表2 停藥2 周后各組蒙藥忠倫阿湯對(duì)大鼠體重的影響(±S,單位g,n=10)

    表3 給藥期各組忠倫阿湯對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響(±S,n=10)

    表4 停藥后忠倫阿湯停藥后對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響(±S,n=10)

    3.3 血常規(guī):給藥期血常規(guī),各項(xiàng)指標(biāo)對(duì)照組和高、中、低各組均無顯著差異,即P>0.05,沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。恢復(fù)期各組血常規(guī)各組間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

    3.4 生化指標(biāo):表3、表4 所示,與對(duì)照組比較,忠倫阿湯高、中、低劑量組給藥15 周和恢復(fù)性觀察2 周各組之間沒有顯著性差異,P>0.05。

    3.5 臟器系數(shù):忠倫阿湯給藥15 周,肝、脾、腎、肺、卵/睪對(duì)照組和高、中、低各組比較無差異,P>0.05。腎上腺、胸腺、心臟、甲狀腺、腦的臟器系數(shù)經(jīng)分析,P<0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,經(jīng)兩組間比較,各組的對(duì)照組和高劑量組、中劑量組之間沒有差異,P>0.05。

    忠倫阿湯恢復(fù)期臟器系數(shù),肝、脾、腎、卵/睪對(duì)照組和高中低各組比較無差異,P>0.05。腎上腺、胸腺、心、肺、甲狀腺、腦,經(jīng)兩組間比較,對(duì)照組和高劑量組、中劑量組沒有顯著差異,P>0.05。

    3.6 病理變化:長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)中給藥組和對(duì)照組各組大鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、卵巢、睪丸、胸腺、甲狀腺、腦組織未見明顯的增生和壞死,未見其他異常病理改變。

    4 討 論

    對(duì)天然藥物的安全性評(píng)價(jià)及毒理學(xué)研究目前越來越受到重視,對(duì)于指導(dǎo)臨床合理用藥,降低藥物的毒副作用及減少因毒性導(dǎo)致的新藥研發(fā)失敗具有重要意義[7]。天然藥中包括大量在少數(shù)民族地區(qū)使用的民族藥物,蒙藥在內(nèi)蒙古地區(qū)應(yīng)用廣泛,臨床療效顯著,雖然在大多數(shù)情況下使用安全有效,副作用相對(duì)較小,但是對(duì)于某些特殊疾病或人群,需長(zhǎng)期用藥者,是否存在毒性反應(yīng)等,要深入研究,通過實(shí)驗(yàn)研究客觀科學(xué)評(píng)價(jià)藥物的毒性作用。

    目前,關(guān)于忠倫湯散劑的臨床毒副作用反應(yīng),急慢性毒性實(shí)驗(yàn)研究國(guó)內(nèi)尚未見報(bào)道,由于缺乏臨床的安全性評(píng)價(jià),及毒理學(xué)方面的實(shí)驗(yàn)研究,嚴(yán)重限制了該藥物的推廣應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,給藥期間大鼠行為活動(dòng)和毛色各組無顯著差異,飲水、攝食未見異常,體重均呈增長(zhǎng)趨勢(shì),血液學(xué)及血液生化學(xué)指標(biāo)未見異常改變,各組臟器系數(shù)未見明顯差異,病理組織學(xué)檢查相關(guān)組織和臟器未見異常改變,停藥2周進(jìn)行恢復(fù)性觀察,未見藥物有延遲毒性反應(yīng),因此,該實(shí)驗(yàn)表明蒙藥忠倫阿湯在實(shí)驗(yàn)階段內(nèi)未見明顯毒性反應(yīng),提示該藥臨床給藥途徑和給藥劑量是基本安全的。

    值得注意的是,在既往的研究中雖有報(bào)道指出川楝子在體內(nèi)有蓄積作用,長(zhǎng)期服用可引起蓄積中毒,苦參提取物也對(duì)肝腎細(xì)胞活力有明顯的抑制作用[8-10],但本實(shí)驗(yàn)中,并未發(fā)現(xiàn)蒙藥復(fù)方忠倫阿湯的肝腎病理損傷,推測(cè)是否由于組成蒙藥復(fù)方后,通過藥物之間的相互配伍,起到了減毒增效作用,需要在今后的實(shí)驗(yàn)中,進(jìn)一步深入探討。

    另外,在實(shí)驗(yàn)中由于大鼠臟器較小,取材時(shí)有可能附帶周圍結(jié)締組織、脂肪組織,空腔臟器中附帶的體液或血液,稱重時(shí)尚不能徹底剝離或清除,可能對(duì)臟器重量產(chǎn)生影響,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表現(xiàn)臟器系數(shù)組內(nèi)差異較小,在今后的實(shí)驗(yàn)中應(yīng)盡量避免這些影響因素造成的誤差。

    [1]李艷春,胡志忠,羅素琴,等.蒙藥三子散中還原糖的含量測(cè)定[J]. 內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,32(16):551 ~553.

    [2]斯琴高娃,董秋梅.甲氨蝶呤聯(lián)合蒙藥忠倫阿湯治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的療效觀察[J]. 環(huán)球中醫(yī)藥,2014,(5):385 ~387.

    [3]李林,高自立,屈愛桃,等.蒙藥忠倫阿湯的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究及對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠足腫脹的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志.2011,17(3):184 ~186.

    [4]高自立,董秋梅,松林,等. 蒙藥忠倫阿湯對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清IL-1、IL-6 及TNF-α 的影響[J].中醫(yī)雜志,2012,53(7):1816 ~1817.

    [5]彭城.中醫(yī)藥動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)方法[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:119.

    [6]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)(第二版)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:31 ~32.

    [7]徐蓓,杜冠華. 藥物安全評(píng)價(jià)及藥物毒理學(xué)研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊,2006,8(5):326 ~327.

    [8]唐大軒,熊靜悅,梁婭君,等.川楝子對(duì)大鼠完全急性毒性作用研究[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2011,22(10):2387 ~2389.

    [9]張茜,金若敏,祝曉雯,等.用肝腎共培養(yǎng)體系研究細(xì)胞毒性的方法學(xué)考察[J]. 中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2011,18(11):36 ~58.

    [10]王小鶯,李麟,韓嘵萍,等.復(fù)方苦參注射液的體外抗菌作用及急性毒性試驗(yàn)[J]. 中獸醫(yī)學(xué)雜志,2011(5):13~14.

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