HPLC 法測(cè)定利桑-12 中羥基紅花黃色素A 的含量

關(guān)玉秋

(內(nèi)蒙古自治區(qū)興安盟人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 烏蘭浩特 137400)

蒙成藥利桑-12 由天竹黃、紅花、肉豆蔻、丁香、豆蔻、草果、信筒子、紫钅丱、檀香、紫檀香、冰片、甘松等12 味藥組成的復(fù)方制劑。有消黏，止痛作用。主要用于頭痛，咽鼻不通。紅花為處方中主藥，文獻(xiàn)報(bào)道［1］其中含有紅花苷、新紅花苷、羥基紅花黃色素A、山柰素、槲皮素，多糖等成分。參照［2］《中國(guó)藥典》2005年版一部“紅花”項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，選擇羥基紅花黃色素A 作為指標(biāo)成分，對(duì)本制劑中的紅花進(jìn)行了HPLC 含量測(cè)定方法研究，經(jīng)分析方法驗(yàn)證，表明該方法重現(xiàn)性好，專(zhuān)屬性強(qiáng)，方中其它組分對(duì)羥基紅花黃色素A 的測(cè)定無(wú)干擾，故收入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：島津LC-10ATVP SPD-10AVP 型檢測(cè)器，SCL-10AVP 色譜工作站，島津UV-1700 型紫外分光光度計(jì)。

1.2 試劑與試藥：羥基紅花黃色素A 對(duì)照品(批號(hào)：111637 -200503)中國(guó)藥品生物制品檢定所;甲醇為色譜純，水為高純水，其它試劑均為分析純。

2 方法學(xué)考察

2.1 色譜條件的選擇：色譜柱：色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，本試驗(yàn)研究采用phennmenexC18 柱(250mm×4.6mm，5μm，流動(dòng)相即甲醇- 乙腈-0.7% 磷酸溶液(26：2：72)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為403nm，采用柱溫：30℃，理論板數(shù)按羥基紅花色素A 計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2 供試品溶液的制備：取本品粗粉約0.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率300W，頻率50kHz)30 分鐘，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用25%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取羥基紅花黃色素A 對(duì)照品適量加25%甲醇制成1mL 中含40ug 的溶液，即得。

2.4 陰性對(duì)照試驗(yàn)：另取按處方比例并以相同工藝制備的缺紅花的陰性對(duì)照，按供試品溶液制備法制得陰性對(duì)照溶液。在上述色譜條件下，分別精密吸取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液、供試品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，測(cè)得結(jié)果為：陰性對(duì)照色譜圖中在與紅花黃色素A 對(duì)照品以及供試品色譜圖中相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明其它組分對(duì)紅花黃色素A 的測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1、圖2、圖3。

2.5 線(xiàn)性關(guān)系考察：取紅花黃色素A 對(duì)照品約5mg，精密稱(chēng)定，置50mL 棕色量瓶中，加25%甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻(相當(dāng)于含羥基紅花黃色素A 0.1002mg/mL)然后精密吸取0.5、1、2、3、4、5mL 溶液分別置10mL 棕色量瓶中，加25%甲醇至刻度，搖勻，各取20μL 進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果羥基紅花黃色素A 在0.01001μg ～0.1002μg 范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系?；貧w方程為Y=54609738X-9333.2575，r=0.9999

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份供試品溶液，分別于0h、2h、4h、8h、12h、24h 進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果羥基紅花黃色素A 在24h內(nèi)的面積積分值基本穩(wěn)定不變，RSD 為0.29%。

2.7 精密度試：精密吸取同一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定羥基紅花黃色素A 峰面積積分值RSD 為1.52%。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)(2006043)供試品6 份，各約0.5g，精密稱(chēng)定，分別按含量測(cè)定項(xiàng)下方法操作，測(cè)定每份含量，RSD 為1.52%。

2.9 準(zhǔn)確度：取本品(批號(hào)20060527，含量1.767mg/g)9份，各約0.25g，精密稱(chēng)定，分別置50mL 容量瓶中再分別在其中3 個(gè)容量瓶中精密加入用濃度為0.2332mg/mL 羥基紅花黃色素A 對(duì)照品25%甲醇溶液1mL(約相當(dāng)于供試品含量的50%)、另3 個(gè)容量瓶中各精密加入上述對(duì)照品溶液2mL(約相當(dāng)于供試品含量的100%)、其余3 個(gè)容量瓶中各精密加入上述對(duì)照品3mL，(約相當(dāng)于供試品含量的150%)分別按含量測(cè)定項(xiàng)下方法操作，測(cè)定每份含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1 。

序號(hào) 樣品量(g)供試品含量(mg)對(duì)照品加入量(mg)測(cè)得總量(mg)回收率(%)平均(%)RSD(%)1 0.2589 1.767 0.2332 0.6978 103.03 2 0.2599 1.767 0.2332 0.6994 103.00 3 0.2578 1.767 0.2332 0.6958 103.04 1 0.2501 1.767 0.4664 0.9112 100.62 2 0.2567 1.767 0.4664 0.9217 100.36 3 0.2500 1.767 0.4664 0.9085 100.06 1 0.2596 1.767 0.6996 1.1716 101.90 2 0.2576 1.767 0.6996 1.1676 101.83 101.66 1.17 3 0.2502 1.767 0.6996 1.1497 101.14images/BZ_171_1092_1578_1094_1579.png

3 供試品含量測(cè)定

取本品按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)【含量測(cè)定】項(xiàng)下的方法處理，三批供試品及模擬樣的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

批號(hào) 取樣量 測(cè)得峰面積值含量(mg/g)平均含量(mg/g)RSD(%)0.5266 963896 1.6741 2006061 0.4902 858816 1.6022 1.6483 2.427 0.5478 1052623 1.7574 2006043 0.5308 1019079 1.756 1.7556 0.11 0.5392 1033825 1.7535 0.5300 1013216 1.7485 2006080 0.5298 1013896 1.7503 1.7469 0.27 0.5274 1013216 1.7418 0.5344 1065222 1.769模擬樣 0.5373 1075350 1.776 1.7823 0.97 0.5493 1115262 1.802

4 討論

樣品制備考察時(shí)，提取時(shí)間等均進(jìn)行了比較試驗(yàn)，最終確定超聲處理30min 效果較穩(wěn)定。

［1］北京中醫(yī)藥大學(xué).中藥鑒定學(xué)(供中藥類(lèi)專(zhuān)業(yè)用)［M］.北京：科學(xué)出版社，2002：290.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］.一部，北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：103.