卡介菌多糖核酸增進雞體免疫水平試驗

摘要：200只AA肉雞，平均分為4組：卡介菌多糖核酸高、中、低劑量組和生理鹽水對照組。試驗雞分別于給藥前1天、停藥后第4天、停藥后第7天以及第10天采血，進行細胞免疫（外周T淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗），以研究卡介菌多糖核酸對雞體免疫功能的影響。結(jié)果表明，卡介菌多糖核酸可以提高雞體的免疫功能，其中以中劑量組效果最好。

關(guān)鍵詞：卡介菌多糖核酸；免疫調(diào)節(jié)；雞

中圖分類號： R979.5 文獻標識碼： A DOI編號： 10.14025/j.cnki.jlny.2015.12.031

適時利用疫苗進行預(yù)防接種是目前世界范圍內(nèi)防治畜禽主要疫病的重要手段，但有效的免疫效果受眾多因子的影響，除了疫苗的質(zhì)量、正確的使用等情況外，畜禽免疫接種時所處的環(huán)境和畜禽本身所處的狀態(tài)等因素在畜禽獲取良好的免疫力方面也是一項不容忽視的因素。因此，在不斷提高疫苗質(zhì)量、正確合理地施以免疫接種外，探索能促使畜禽提高對疫苗免疫應(yīng)答的手段和方法，也是體現(xiàn)預(yù)防為主原則的一項新課題?？ń榫嗵呛怂幔˙CG-PSN）是從卡介菌中提取的菌體成分，能提高機體細胞免疫功能，調(diào)節(jié)體液免疫水平，具有抗感染、抗變態(tài)反應(yīng)、抗腫瘤等作用。

1 材料和方法

1.1 主要試驗材料

1.1.1 試驗動物 1日齡AA肉雞，由南京市邁皋橋雞場提供。

1.1.2 卡介菌多糖核酸 由瑞普（天津）動物藥業(yè)有限公司藥物研究中心提供。

1.1.3 RPMI 1640培養(yǎng)基 GIBCO BRL公司產(chǎn)品。

1.1.4 SP2/0骨髓瘤細胞株 山東醫(yī)科院提供。

1.2 試驗設(shè)計

隨機將200羽1日齡AA肉雛雞分為BCG-PSN高（0.5毫升/羽）、中（0.25毫升/羽）、低（0.125毫升/羽）劑量組和生理鹽水對照組，共4組，每組50羽。各試驗組于7日齡時開始飲水給藥，連用3天。各組均于10日齡首次免疫接種雞新城疫 （ND）疫苗。

各試驗組雞施以相同的飼養(yǎng)管理，并分別于給藥前1天、停藥后第4天、停藥后第7天以及第10天采血，進行細胞免疫（外周T淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗）。

1.3 試驗方法

采用李祥瑞介紹的MTT法。雞心臟無菌采血4毫升，肝素抗凝，用淋巴細胞分離液分離淋巴細胞，用RPMI 1640培養(yǎng)液調(diào)整細胞數(shù)至2.0 ×106個/毫升；將100微升上述外周血淋巴細胞接種于96孔平底細胞培養(yǎng)板，加入20微升 PHA，并設(shè)有不加PHA的對照，每個樣品4個重復。同時設(shè)無細胞的RPMI 1640孔，用于調(diào)零。37 ℃，培養(yǎng)44小時后，加入20微升MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4小時，吸去孔內(nèi)液體，每孔加入100 微升DMSO，振蕩器上振蕩10分鐘，使結(jié)晶充分溶解。用酶聯(lián)免疫檢測儀檢測OD570納米值。以PHA刺激孔OD570納米平均值減無PHA刺激孔OD570納米平均值表示淋巴細胞的增殖。

2 試驗結(jié)果

混飲不同劑量BCG-PSN的試驗組和相應(yīng)對照組肉雛雞外周血中T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率見表1。

由表1可見，給藥前1天，各組間差異不顯著；停藥后第4天，不同劑量BCG-PSN給藥組與對照組相比，雞外周血中T淋巴細胞活性均有明顯提高，統(tǒng)計學分析表明差異顯著（P<0.05）；停藥后第7天，不同劑量BCG-PSN組雞外周T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率均比對照組雞的T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率高，差異極顯著（P<0.01），中、低劑量組雞的T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率又顯著高于高劑量組雞（P<0.05），中劑量組雞和低劑量組雞的T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率則沒有明顯差異。停藥后第10天，BCG-PSN高、中、低劑量組雞T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率又極顯著地高于對照組雞T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率（P<0.01），中劑量組雞T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率又繼續(xù)維持高水平，顯著地高于低劑量組（P<0.01）。

給藥前、后不同時期內(nèi)，各BCG-PSN給藥組雞和對照組雞外周T淋巴細胞轉(zhuǎn)化的動態(tài)變化見圖1。

由圖1可見，對照組雞外周T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率盡管隨雞日齡的增長略有增高，但3個BCG-PSN給藥組T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率隨給藥后日齡的增長均表現(xiàn)出明顯的增高，其中又以中劑量組明顯高于高劑量組。

3 討論

試驗結(jié)果顯示，BCG-PSN具有一定的生物活性，可以促進機體產(chǎn)生良好的免疫效果，增強機體的免疫功能。BCG-PSN給藥組雞T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率呈快速上升趨勢，其中中劑量組尤為明顯。本試驗說明BCG-PSN能夠提高雞體免疫，能加速雞體免疫功能的發(fā)育完善，從而增強雛雞免疫應(yīng)答能力，提高免疫效果，并且這種免疫增強作用與給藥劑量密切相關(guān)，臨床上建議采用中劑量的BCG-PSN溶液進行免疫。

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作者簡介：呂英然，碩士，廣東科貿(mào)職業(yè)學院，講師，研究方向：獸醫(yī)微生物與免疫。