參麥與黃芪注射液聯(lián)用治療卡氏肺孢子蟲肺炎

董文杰，于 竟，苗承澍，尹 涵，莎日娜

（包頭醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室，內(nèi)蒙古包頭 014060）

卡氏肺孢子蟲（Pneumocystiscarinii，Pc）是一種常見的機會致病性寄生蟲，它引起的卡氏肺孢子蟲肺炎（Pneumocystiscariniipneumonia，PCP）好發(fā)于免疫功能低下或缺陷人群［1］，其病理損害主要表現(xiàn)為肺組織間質(zhì)性病變［2］。國內(nèi)外防治PCP的主要藥物為戊烷脒和復(fù)方磺胺甲基異惡唑等［3］，但毒副作用明顯，耐藥性的發(fā)生率也明顯增加［4］。因此，尋找新的高效低毒藥物很有必要。

黃芪具有明顯的抗缺氧、抗炎、鎮(zhèn)痛和調(diào)節(jié)免疫的功能［5］，參麥注射液主要具有增強心血管系統(tǒng)功能、抗氧化、抗衰老、增強免疫力等功能［6］。兩藥聯(lián)用具有協(xié)同作用，顯示其益氣扶正功能，對人體各臟器、系統(tǒng)具有良好的保護作用，并可提高療效［7］。本研究通過動物試驗，觀察參麥與黃芪注射液聯(lián)用治療大鼠卡氏肺孢子蟲肺炎的療效，為臨床治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 純系Wistar大鼠45只，健康雌性，體重170g～210g，由包頭醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。

1.1.2 藥品及試劑 地塞米松磷酸鈉注射液為鄭州卓峰制藥有限公司產(chǎn)品（批號：14022838）；鹽酸多西環(huán)素片為江蘇聯(lián)歡藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品（批號：20130701）；復(fù)方磺胺甲惡唑（TMP-SMZ）為山西同達(dá)藥業(yè)有限公司產(chǎn)品（批號：H14022839）；黃芪注射液為神威藥業(yè)有限公司產(chǎn)品（批號：130907）；參麥注射液為吉林省集安益盛股份有限公司產(chǎn)品（批號：131100404）。

1.1.3 卡氏肺孢子蟲的來源 利用糖皮質(zhì)激素（地塞米松磷酸鈉注射液）抑制大鼠免疫系統(tǒng)誘發(fā)PCP模型，取肺組織染色油鏡觀察見卡氏肺孢子蟲包囊及滋養(yǎng)體。

1.2 方法

1.2.1 PCP大鼠模型的建立 大鼠置敞式鼠籠中用普通顆粒飼料喂養(yǎng)，觀察1周后，健康動物列入試驗，45只大鼠隨機選取5只作為健康組（A組）、其余均為試驗組。試驗組大鼠無菌狀態(tài)下大鼠腹股溝皮下注射地塞米松磷酸鈉2mL／只，2次／周，并在飲水中加1g／L鹽酸多西環(huán)素預(yù)防繼發(fā)性細(xì)菌感染。定期更換墊料及消毒，連續(xù)注射地塞米松磷酸鈉6周后，隨機選取2只大鼠處死，取肺組織制作印片，采用姬姆薩染色［8］，油鏡觀察見卡氏肺孢子蟲包囊及滋養(yǎng)體，作為證實PCP大鼠模型建立。健康組不給藥，自由飲食飲水。

1.2.2 試驗組分組與治療 40只試驗組大鼠隨機均分為4組，分別為陽性對照組10只（B組）、SMZTMP治療組10只（C組）、參麥與黃芪高劑量治療組10只（D組）、參麥與黃芪低劑量治療組10只（E組）。在注射地塞米松磷酸鈉6周后，其中C組灌胃SMZ 250mg／（kg·d）和 TMP 50mg／（kg·d），連續(xù)2周；D、E組腹股溝皮下注射黃芪注射液與參麥注射液，劑量分別為 1mL／（kg· d）、2mL／（kg·d），連續(xù)2組，B組不給藥。

1.2.3 觀察指標(biāo)及方法

1.2.3.1 基本情況觀察 觀察各組大鼠的毛色、攝食、呼吸、活動、存活數(shù)等情況。詳細(xì)記錄大鼠治療前后的體重變化，包括試驗開始、造模結(jié)束、治療結(jié)束時體重，并計算各組大鼠的體重回升率。體重回升率計算公式：（治療結(jié)束時體重-造模結(jié)束時體重）／造模結(jié)束時體重×100%。

1.2.3.2 肺臟病原學(xué)觀察 治療前隨機選取PCP大鼠2只處理，取肺組織，切開肺葉，制作直徑1cm的印片，采用Giemsa染色，油鏡下查找Pc包囊。治療組停藥1周后，各組大鼠全部殺后，油鏡下記錄Pc包囊數(shù)，Pc包囊記數(shù)方法［9］：每鼠肺印片計數(shù)100個油鏡視野Pc包囊總數(shù)，最后計算出每組鼠肺印片中Pc包囊的平均數(shù)。

1.2.3.3 肺臟病理學(xué)觀察 取各組大鼠相同部位的肺臟，40mL／L甲醛固定，酒精逆行梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋后行連續(xù)切片（切片厚度6μm），制成病理切片蘇木素-伊紅（HE）染色后，光鏡觀察肺組織病理學(xué)變化［10］。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)分析 使用SPSS13.0軟件處理，采用方差分析方法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)比較。

2 結(jié)果

2.1 基本情況觀察

觀察期間健康組大鼠飲食進(jìn)水如常，體重略有增加，體重回升率為4.40%。試驗組大鼠于第3周開始，活動能力減弱，毛色變暗，飲水和進(jìn)食量開始減少；第6周，體毛直立缺少光澤，有少量脫毛，呼吸急促，精神萎靡，平均體重明顯降低，造模結(jié)束時各組體重與健康組比較均差異顯著（P＜0.05）。停用地塞米松磷酸鈉注射并進(jìn)行治療后，治療組大鼠毛色逐漸恢復(fù)光澤、食欲增加、活躍程度恢復(fù)。治療結(jié)束時，藥物治療各組大鼠有不同程度的體重增加，與陽性對照組比較均差異顯著（P＜0.05）。大鼠治療前后的體重變化見表1，各組大鼠均沒有死亡。

2.2 肺組織印片檢查

治療前隨機處死PCP大鼠肺組織印片上可見Pc包囊，包囊呈圓形或橢圓形，大小略小于紅細(xì)胞，Giemsa染色囊壁不著色，內(nèi)含圓形或新月形的囊內(nèi)小體，多數(shù)為8個，散在一圈排列或成團排列。滋養(yǎng)體形態(tài)多變，大小不一，蟲體數(shù)量較多常成簇分布（圖1F），大鼠感染嚴(yán)重。各組大鼠全部處死后，肺印片Pc包囊記數(shù)統(tǒng)計（表2）。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，與陽性對照組比較，治療組C組、D組、E組Pc包囊數(shù)均明顯減少，差異有顯著性（P＜0.05）；與SMZ-TMP治療組（C組）比較，D組無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），E組差異顯著（P＜0.05）；參麥與黃芪治療后D組與E組之間比較，差異顯著（P＜0.05）。說明參麥與黃芪高劑量治療和SMZ-TMP治療相近；參麥與黃芪低劑量治療效果雖然不如SMZ-TMP組，但是與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義，說明參麥與黃芪注射液對大鼠卡氏肺孢子蟲肺炎有治療作用。

表1 大鼠治療前后的體重變化Table 1 Rat weight changes before and after treatment

表2 藥物對大鼠肺組織印片Pc包囊數(shù)量的影響Table 2 Effects of drugs on rat lung tissue printing Pc cyst number

2.3 肺組織病理學(xué)檢查

陽性對照組（B組）：中—重度間質(zhì)性肺炎，肺泡間隔變寬，肺泡腔變小，間質(zhì)內(nèi)有以淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞為主的細(xì)胞浸潤，部分肺泡腔內(nèi)充滿淡紅色泡沫樣滲出物（圖1B）。參麥與黃芪高劑量組 （D組）：肺間質(zhì)組織形態(tài)及結(jié)構(gòu)開始回復(fù)，炎癥反應(yīng)明顯減輕，肺泡中漿液性滲出物顯著減少 （圖1D）；SMZTMP治療組炎癥反應(yīng)明顯減輕，大多數(shù)肺泡及其間質(zhì)修復(fù)完整（圖1C）。參麥與黃芪低劑量治療（E組）：中度間質(zhì)性肺炎，肺間質(zhì)充血及水腫，肺泡內(nèi)可見嗜酸性物及泡沫細(xì)胞 （圖1E）。健康組（A組）：肺組織無炎癥，未見異常（圖1A）。

圖1 肺組織病理學(xué)觀察及PCP大鼠肺印片Pc包囊Fig.1 Histopathological lesions and lung imprint Pc cyst in PCP rat

3 討論

目前，國內(nèi)外建立PCP動物模型方法最常用的是利用糖皮質(zhì)激素抑制大鼠免疫系統(tǒng)誘發(fā)PCP模型［8］。本試驗采用此方法造模成功，在肺組織印片中發(fā)現(xiàn)形態(tài)較好的Pc包囊，并且發(fā)現(xiàn)大量的滋養(yǎng)體。進(jìn)一步證明此法的可行性。

黃芪注射液、參麥注射液對特異性免疫、體液免疫、細(xì)胞免疫均有明顯增強作用，可明顯提高T細(xì)胞增殖能力，促使巨噬細(xì)胞活化［6-11］。參麥注射液主要含有人參皂苷、人參多糖、甾苷、有機酸等成分，這些有效成分能加強機體器官抗應(yīng)激能力，調(diào)節(jié)和促進(jìn)機體免疫功能［7］。本試驗將參麥與黃芪注射液聯(lián)用治療卡氏肺孢子蟲肺炎，應(yīng)用參麥與黃芪注射治療后，PCP大鼠毛色逐漸恢復(fù)光澤、食欲增加、活躍程度恢復(fù)，體重明顯增加；與陽性對照組比較，肺組織印片中Pc包囊的數(shù)量明顯減少，低、高劑量組均差異顯著，肺組織病理檢查炎癥輕于陽性對照組；和已經(jīng)明確具有治療作用的復(fù)方磺胺甲惡唑治療組比較，經(jīng)檢驗高劑量組大鼠肺印片中Pc包囊數(shù)無明顯差異。

試驗結(jié)果表明，黃芪和參麥可以減輕PCP大鼠的肺部炎癥反應(yīng)，并可以減少肺組織內(nèi)包囊的數(shù)量，高劑量組接近復(fù)方磺胺甲惡唑治療效果，參麥與黃芪注射液聯(lián)用有望用于臨床肺孢子蟲肺炎的治療，然而其作用機制，還需要進(jìn)一步深入研究。

［1］Coelho L，Veloso V G，Grinsztejn B，et al.Trends in overall opportunistic illnesses，Pneumocystiscariniipneumonia，cerebral toxoplasmosis andMycobacteriumaviumcomplex incidence rates over the 30years of the HIV epidemic：a systematic review［J］.Brazil J Infect Dis，2014，18（2）：196-210.

［2］王鳳梅，趙愛陽，金敬順.肺孢子蟲肺炎臨床研究進(jìn)展［J］.肺孢子蟲肺炎臨床研究進(jìn)展，2014，19（7）：1315-1317.

［3］Miller R F，Huang L，Walzer P D.Pneumocystispneumoniaassociated with human immunodeficiency virus［J］.Clin Chest Med，2013，34（2）：229-241.

［4］Hughes W T .卡氏肺囊蟲性肺炎的治療和預(yù)防［J］.國外醫(yī)學(xué)：寄生蟲分冊，1988（4）：205.

［5］王墅塾，王梓楠，趙自明，等.黃芪注射液對免疫功能低下小鼠脾淋巴細(xì)胞的影響［J］.動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014，35（4）：63-66.

［6］曹旭東，丁志山，陳建真，等.參麥注射液藥理及臨床研究進(jìn)展［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2010，17（3）：104-106.

［7］?？∶?，張東杰.黃芪聯(lián)合參麥注射液輔助治療活動性肺結(jié)核療效觀察［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2011，7（7）：65-66.

［8］任一鑫，秦元華，戴曉冬，等.不同方法建立卡氏肺孢子蟲大、小鼠動物模型的比較［J］.中國病原生物學(xué)雜志，2012，7（5）：369-370.

［9］葉 彬，陳雅棠，劉成偉，等.雙氫青蒿素、青蒿琥酯治療大鼠肺孢子蟲肺炎的療效研究［J］.中國人獸共患病雜志，2001，17（4）：43-45.

［10］Zhang C，Lei G S，Shao S，et al.Accumulation of myeloidderived suppressor cells in the lungs duringPneumocystispneumonia［J］.Infect Immu，2012，80（10）：3634-3641.

［11］徐 璐，李艷明，劉婧陶，等.黃芪總黃酮對小鼠免疫功能的影響［J］.動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，34（11）：36-39.