RP-HPLC測定木檳硝黃散中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量

金錄勝，張旭，張蕾，于清偉，張宏

（甘肅省獸藥飼料監(jiān)察所，蘭州730030）

RP-HPLC測定木檳硝黃散中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量

金錄勝，張旭，張蕾，于清偉，張宏?

（甘肅省獸藥飼料監(jiān)察所，蘭州730030）

建立了RP-HPLC法測定木檳硝黃散中木香烴內(nèi)酯與去氫木香內(nèi)酯含量的方法。用十八烷基鍵合硅膠柱分離木檳硝黃散中木香烴內(nèi)酯與去氫木香內(nèi)酯，以甲醇-水（60∶40）為流動相，檢測波長225 nm。木檳硝黃散中木香烴內(nèi)酯與去氫木香內(nèi)酯的線性范圍分別為4.14～41.4 μg／mL和3.59～35.9 μg／mL，平均回收率分別為99.23%、99.00%（n＝6）。該方法簡便、快速，可用于木檳硝黃散中木香烴內(nèi)酯與去氫木香內(nèi)酯的含量測定。

木檳硝黃散；木香烴內(nèi)酯；去氫木香內(nèi)酯；RP-HPLC

木檳硝黃散是以檳榔、大黃、玄明粉、木香為原料加工制成的中獸藥散劑，具有行氣導(dǎo)滯、泄熱通便之功效，用于實熱便秘、胃腸積滯等癥［1］。方中大黃苦寒，善于瀉熱毒、破結(jié)滯而蕩滌胃腸，為君藥；玄明粉咸寒，善于潤腸燥、軟堅結(jié)而瀉下通便，為臣藥；檳榔消積導(dǎo)氣，木香溫中行氣，兩者合用，行氣止痛、消積導(dǎo)滯，共為佐使藥。諸藥合用，共奏行氣導(dǎo)滯、泄熱通便之功［2］?！吨腥A人民共和國獸藥典》二○一○年版對木檳硝黃散中各成分規(guī)定了顯微鑒別，對玄明粉進行了理化鑒別，對大黃進行了薄層鑒別，未對任何組分進行定量分析［1］。試驗參照木香中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量測定方法［3］用反相高效液相色譜法對木檳硝黃散中木香烴內(nèi)酯與去氫木香內(nèi)酯的含量測定方法進行了研究。

1 儀器與試劑

Agilent 1200高效液相色譜儀，Agilent 1200多波長紫外檢測器，METTLER AE240電子天平，BX8200HP超聲波清洗器。甲醇為色譜純，水為超純水。木香烴內(nèi)酯對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，111524-201208，含量為99.5%），去氫木香內(nèi)酯對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，111525-201209，含量為99.8%）。木檳硝黃散（武威紅牛農(nóng)牧科技有限公司生產(chǎn)，批號140201、140202、140303），陰性樣品（自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent SB-C18柱（1.8 μm，4.6 mm×50 mm）；流動相：甲醇-水（60∶40）；流速：0.8 mL／min；進樣量：10 μL；柱溫：室溫；檢測波長：225 nm。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取木香烴內(nèi)酯對照品10.35 mg，去氫木香內(nèi)酯對照品8.97 mg置同一100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每1 mL含木香烴內(nèi)酯103.5 μg、去氫木香內(nèi)酯89.7 μg的溶液，作為貯備溶液。精密量取上述貯備溶液5.0 mL置25 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取木檳硝黃散約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理（功率250 W，頻率50 KHz）10 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備 按處方中藥味比例自配不含木香的散劑，按其工藝制成陰性對照樣品，再按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。

2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 分別取混合對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液注入色譜儀，色譜圖見圖1-圖3。在該色譜條件下，木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯峰與相鄰組分峰的分離度均大于3.0，理論板數(shù)按去氫木香內(nèi)酯峰計不低于5000，陰性樣品在與對照品色譜峰相應(yīng)的位置上無吸收峰，表明處方中的其他成分對測定結(jié)果無影響，滿足定量檢測需要。

圖1 混合對照品溶液HPLC圖

圖2 供試品溶液HPLC圖

圖3 陰性樣品HPLC圖

2.6 方法學考察

2.6.1 線性范圍 精密量取木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯對照品貯備溶液（103.5、89.7 μg／mL）各1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0 mL分別置25 mL容量瓶中，用甲醇定容至25 mL，搖勻，按上述色譜條件，進樣10 μL，記錄色譜圖，測定峰面積，以峰面積積分值（Y）對濃度（X，μg／mL）進行線性回歸，方程為：

木香烴內(nèi)酯：Y＝46.534X-8.7049（r＝0.9998），線性范圍4.14～41.4 μg／mL；

去氫木香內(nèi)酯：Y＝36.614X+3.623（r＝0.9996），線性范圍3.59～35.9 μg／mL。

2.6.2 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液10 μL，按上述色譜條件，連續(xù)重復(fù)進樣6次，記錄峰面積，計算結(jié)果，RSD分別為0.42%（木香烴內(nèi)酯）、0.37%（去氫木香內(nèi)酯）。

2.6.3 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8、10、12 h進樣10 μL，記錄色譜峰面積，計算木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的峰面積的RSD分別為0.62%、0.43%。結(jié)果表明供試品溶液在室溫下放置12 h基本穩(wěn)定。

2.6.4 重復(fù)性試驗 取同一批樣品分別稱取5份，按2.3項下方法制備供試品溶液，測定供試品溶液中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量。結(jié)果測得木香烴內(nèi)酯含量分別為67.8、68.2、67.3、67.6、67.1 μg／g，去氫木香內(nèi)酯含量分別為61.2、60.3、61.4、60.8、61.6 μg／g，RSD分別為0.64%，0.85%。結(jié)果表明此方法重復(fù)性良好。

2.6.5 加樣回收率試驗 準確稱取已知含量的木檳硝黃散樣品0.5 g，共6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入混合對照品貯備溶液（103.5、89.7 μg／mL）0.3 mL，按2.3項下方法處理后，測定并計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 木檳硝黃散回收率試驗結(jié)果（n＝6）

2.7 樣品測定 取不同批號的木檳硝黃散，按供試品溶液制備方法處理，按上述色譜條件進行測定，計算樣品中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（μg·g-1）

3 討論與小結(jié)

選用不同比例的甲醇-水為流動相進行洗脫，結(jié)果表明，以甲醇-水（60∶40）為流動相時，樣品中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯與其它組分的分離效果最佳。本試驗采用填料粒徑為1.8 μm、柱長為50 mm的十八烷基鍵合硅膠柱，可實現(xiàn)快速、高效分離，與文獻［4-5］使用的填料粒徑為5 μm、柱長為250 mm的C18柱比較，具有分離效果好，分析速度快、可節(jié)約時間、試劑等優(yōu)點。

木香為菊科云木香屬植物木香Aucklandia lap-pa Decne.的干燥根，原產(chǎn)印度，中國云南引種栽培，是治療胃腸疾病的常用藥物，《神農(nóng)本草經(jīng)》列為上品。木香含有揮發(fā)油0.3%～3%，油中含有多種具有生物活性的倍半帖內(nèi)酯，研究表明，木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯具有松弛平滑肌和解痙作用，木香烴內(nèi)酯能有效抑制由KCL誘導(dǎo)的主動脈收縮［6］。木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯是揮發(fā)油的主要成分，為了能控制木檳硝黃散中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量，故采用高效液相色譜法進行定量分析。試驗結(jié)果表明，在該色譜條件下，木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯峰與相鄰組分峰的分離度好，該方法的專屬性、精密度、重復(fù)性實驗符合規(guī)定，操作簡便、快速，可作為制定木檳硝黃散質(zhì)量標準、提高本品質(zhì)量的參考依據(jù)。

目前，我國中獸藥散劑質(zhì)量標準大多只采用顯微鑒別及薄層鑒別控制處方中各味中藥，未對中藥成分進行定量分析，探索對中獸藥散劑中各味中藥的有效成分進行定量分析的研究，有利于提升中獸藥散劑質(zhì)量標準的控制水平，提高產(chǎn)品質(zhì)量。

［1］ 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典二○一○年版二部［S］.

［2］ 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典獸藥使用指南二○一○年版中藥卷［S］.

［3］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典二○○○年版一部［S］.

［4］ 鞠成國，王巍，高慧，等.HPLC測定木香檳榔丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量［J］，中國實驗方劑學雜志，2011，17（23）：74-76

［5］ 常煒.HPLC法測定智托潔白丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯［J］，中成藥，2011，33（11）：1923-1926

［6］ 魏華，彭勇，馬國需，等.木香有效成分及藥理作用研究進展［J］.中草藥，2012，43（3）：613-620

（編輯：陳希）

Determination of Costunolide and Dehydrocostus Lactone in Mubing Xiaohuang San by RP-HPLC

JIN Lu-sheng，ZHANG Xu，ZHANG Lei，YU Qin-wei，ZHANG Hong?
（Gansu Institute of Veterinary Drug and Feed Inspection，Lanzhou 730030，China）

To establish a RP-HPLC method for determination of costunolide，dehydrocostus lactone in Mubing Xiaohuang San.A reverse-phase C18 column was used，the mobile phase was methanol-water（60∶40），the determination wave length was 225 nm，the linear range was 4.14～41.4 μg／mL and 3.59～35.9 μg／mL，and the average recovery was 99.23%and 99.00%.The method is simple and fast，and suitable in the determination of costunolide，dehydrocostus lactone in Mubing Xiaohuang San.

Mubing Xiaohuang San；costunolide；dehydrocostus lactone；RP-HPLC

2014-12-03

A

1002-1280（2015）03-0040-03

S853.7

金錄勝，從事獸藥檢驗及管理工作。

張宏。E-mail：195425319＠qq.com