天山雪蓮醇提液對連續(xù)光照雌性小鼠生殖激素水平及離體子宮活動能力的影響

莊淑珍，張曉紅，張 冀，張貝貝，侯 宇，周玉東，姚 剛

（1.新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，新疆烏魯木齊830046；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，烏魯木齊830052）

天山雪蓮，又名“雪荷花”，屬菊科鳳毛菊，多年生草本植物，是新疆特有的珍奇名貴中草藥，具有除寒、壯陽、調(diào)經(jīng)、補(bǔ)血、收縮子宮和緩解高原反應(yīng)等功效［1］。雪蓮全草入藥，對其藥物化學(xué)和藥理分析證明，雪蓮中含有揮發(fā)油、生物堿、黃酮類、酚類、糖類、鞣質(zhì)等成分［2］。天山雪蓮作為藥用植物，在民間習(xí)用已久，對風(fēng)濕、關(guān)節(jié)炎效果顯著，它還能壯陽補(bǔ)血，治腎虛腰痛、麻疹不透等癥。目前，已有研究對雪蓮的抗炎 鎮(zhèn) 痛［3］、調(diào) 節(jié) 血 脂［4］、抗 氧 化［5］、抗 缺 氧［6－7］抗癌［8］、抗輻射［9］和免疫調(diào)節(jié)［10］幾個方面的作用機(jī)理進(jìn)行了初步闡述，張冀等［11］的研究表明雪蓮提取液對連續(xù)光照造成的小鼠卵巢早衰具有一定的預(yù)防作用。雖然對雪蓮的化學(xué)成分、藥用價值等方面進(jìn)行了研究，但是作為民間保健調(diào)理和女性美容保健佳品，雪蓮對雌性機(jī)體生殖激素水平以及子宮平滑肌的影響未見報道。本研究通過觀察雪蓮醇提液對連續(xù)光照雌性小鼠血清生殖激素水平及離體子宮活動能力的影響，初步探討雪蓮提取液維持雌性小鼠主要生殖激素水平和子宮平滑肌活力的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 7周齡～8周齡昆明小鼠，雌性，體重20g左右，購自新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號：SYXK（新）2010－0003；實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（新）2010－0001。

1.1.2 試劑 小鼠血清促卵泡素（follicle－stimulating hormone，F(xiàn)SH），雌二醇（estradiol，E2），促黃體素（luteinizing hormone，LH），ELISA試劑盒為武漢基因美生物科技有限公司產(chǎn)品；9g／L 生理鹽水（國藥準(zhǔn)字H65020253）為國藥集團(tuán)新疆制藥有限公司產(chǎn)品；雪蓮提取液為天山雪蓮的乙醇提取液，由新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)提供。

1.2 方法

1.2.1 小鼠的飼養(yǎng) 小鼠用無病菌的食物和水喂養(yǎng)，飼養(yǎng)條件為恒溫（24℃）、恒濕（60%）、自然晝夜節(jié)律光照（光照和黑暗各12h），給予足夠的水和食物。

1.2.2 小鼠血清FSH、E2和LH 的ELISA分析 適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，選擇性周期正常的小鼠隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對照組，每組20只，常規(guī)飼養(yǎng)。隨后對2組小鼠實(shí)施連續(xù)光照3周。試驗(yàn)組小鼠每天12：00灌胃雪蓮提取液0.5mL，對照組同法灌胃9g／L生理鹽水0.5mL。3周后小鼠眼眶采血，獲得血清，用于生殖激素ELISA分析，按ELISA試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.3 小鼠離體子宮的活力分析 將處理的小鼠依次斷頸處死，取子宮用于離體子宮檢測，將離體子宮固定于Powerlab系統(tǒng)的體外器官浴槽內(nèi)，槽內(nèi)加30 mL的Locke液，恒溫37 ℃，pH 7.3～7.4，持續(xù)通入空氣，上端通過張力換能器連于自動記錄儀，描記收縮曲線，靜息張力為1.0g，標(biāo)本穩(wěn)定30min后，開始試驗(yàn)。本試驗(yàn)所應(yīng)用軟件中，相性收縮以收縮波形的幅值和波峰出現(xiàn)的周期／頻率表示，張力性收縮主要以平均最小值（基線）表示［12］。記錄張力曲線并在不同條件下觀察10min內(nèi)子宮平滑肌條收縮幅度的變化狀況。每觀察一樣品后，沖洗標(biāo)本3次，然后再平衡30min進(jìn)行下一樣品的試驗(yàn)。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本試驗(yàn)部分?jǐn)?shù)據(jù)均采用Prism 5.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。計(jì)量資料均采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，其多組間兩兩比較用單因素方差（One－Way ANOVA）分析。

2 結(jié)果

2.1 雪蓮提取液對小鼠血清中主要生殖激素水平的影響

連續(xù)光照3周后，對照組小鼠E2、FSH 和LH 的水平均低于試驗(yàn)組，且差異顯著（圖1），表明連續(xù)光照可以降低雌性小鼠體內(nèi)E2、FSH 和LH 水平。

2.2 雪蓮提取液對小鼠離體子宮活動能力的影響

2.2.1 雪蓮提取液灌胃處理對小鼠子宮活動能力的影響 觀察光照處理前后試驗(yàn)組和對照組小鼠離體子宮的蠕動，結(jié)果表明，連續(xù)3周的光照處理使對照組小鼠離體子宮的活動力顯著降低，而對試驗(yàn)組小鼠離體子宮的活動力影響不大；對照組小鼠子宮蠕動的振幅比光照前顯著降低；對照組經(jīng)光照后雖然子宮蠕動的周期變慢，但和光照前相比差異不明顯（表1，圖2）。

圖1 小鼠血清主要生殖激素含量ELISA分析Fig.1 Level analysis of seral reproductive hormones in mice by ELISA

表1 雪蓮提取液灌胃對小鼠離體子宮活動能力的影響Table1 Effect of ethanol extract of Saussurea involucrate by intragastric administration on uterus activities in vitroin mice

2.2.2 雪蓮提取液對小鼠離體子宮活動能力的影響

待上述對照組小鼠的離體子宮收縮穩(wěn)定后，向浴槽內(nèi)每隔10min加入雪蓮提取液，使其終濃度分別達(dá)到0.33、0.67、1mL／L，直接刺激離體子宮。結(jié)果表明，加入相應(yīng)濃度的雪蓮提取液可以使小鼠離體子宮蠕動的振幅逐漸增大，周期變小，子宮活動力顯著提高。但當(dāng)濃度達(dá)到1mL／L時，小鼠離體子宮蠕動明顯減弱，振幅降低，周期變大，表現(xiàn)出對子宮活動力的抑制作用（表2和圖3）。

3 討論

E2主要由卵巢的卵泡內(nèi)膜和顆粒細(xì)胞分泌，能引起子宮興奮，增加蠕動；FSH 由垂體前葉嗜堿粒細(xì)胞分泌，可刺激卵巢生長、增加卵巢重量；LH 是在下丘腦促性腺激素釋放激素的作用下，由垂體前葉嗜堿性細(xì)胞分泌的，可以促進(jìn)雌性個體卵巢血流加速，并在FSH 的預(yù)先作用下促進(jìn)排卵以及黃體的生成。E2、FSH 和LH 協(xié)同作用，共同維持著雌性個體的性別特征以及各項(xiàng)生殖功能。正常情況下，當(dāng)E2減少時，可通過反饋引起FSH 的增加，促進(jìn)卵泡發(fā)育和激素分泌；當(dāng)E2增多時，又可抑制FSH 的分泌，促進(jìn)LH 的釋放，導(dǎo)致排卵。本研究對照組小鼠經(jīng)連續(xù)光照3周后，其子宮蠕動的振幅和活動力與光照前相比明顯減弱，周期變長，可能和連續(xù)光照造成卵巢早衰［11］，從而使得E2、FSH 和LH 分泌紊亂有關(guān)，而對血清中E2、FSH 和LH 水平檢測的ELISA 試驗(yàn)也證實(shí)了連續(xù)光照使得對照組E2、FSH 和LH 水平降低。與對照組相反，試驗(yàn)組的小鼠經(jīng)連續(xù)3周光照后，其子宮蠕動的振幅、周期和活動力與光照前相比無明顯差異，仍然維持在正常水平，表明灌胃雪蓮提取液可降低連續(xù)光照對小鼠卵巢造成的損害，保護(hù)小鼠卵巢機(jī)能，改善因外界不良因素導(dǎo)致的小鼠生殖激素水平紊亂，從而維持或調(diào)節(jié)雌性小鼠生殖激素水平正常，對因外界不良因素（如連續(xù)光照）造成的卵巢早衰可能起到一定的預(yù)防作用。

圖2 雪蓮提取液灌胃對小鼠離體子宮活動能力的影響Fig.2 Effect of ethanol extract of Saussurea involucrata by intragastric administration on uterus activities in vitroin mice

表2 雪蓮提取液對小鼠離體子宮活動能力的影響Table 2 Effect of ethanol extract of Saussurea involucrata on uterus activities in vitroin mice

圖3 雪蓮提取液對小鼠離體子宮活動能力的影響Fig.3 Effect of ethanol extract of Saussurea involucrata on uterus activities in vitroin mice

本研究還將雪蓮提取液直接作用于收縮能力已經(jīng)顯著降低的對照組小鼠離體子宮，結(jié)果顯示由低濃度到高濃度依次加入雪蓮提取液后小鼠子宮的收縮能力逐漸加強(qiáng)，并達(dá)到正常子宮的水平，但是當(dāng)?shù)竭_(dá)一定濃度后，會抑制子宮收縮，最終導(dǎo)致子宮收縮停止?？梢娺m當(dāng)濃度的雪蓮提取液對蠕動緩慢的離體子宮具有雌激素樣作用，可以促進(jìn)子宮收縮力增強(qiáng)，但當(dāng)濃度過大時則會抑制子宮的蠕動，表現(xiàn)出對子宮平滑肌的毒性作用。

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