不同中藥多糖體外對(duì)雞外周血和脾臟淋巴細(xì)胞增殖能力的比較

蔣春茂, 陳曉蘭,, 陸廣富, 陳興穎, 王德云, 胡元亮, 耿千麗

(1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院,江蘇泰州 225300；2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,江蘇南京 2100951）

不同中藥多糖體外對(duì)雞外周血和脾臟淋巴細(xì)胞增殖能力的比較

蔣春茂1, 陳曉蘭1,2, 陸廣富1, 陳興穎2, 王德云2, 胡元亮2, 耿千麗1

(1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院,江蘇泰州 225300；2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,江蘇南京 2100951）

為比較玉竹多糖、桑葉多糖、杜仲多糖、商陸多糖、淫羊藿多糖體外增強(qiáng)免疫活性,采用酶學(xué)檢測(cè)法測(cè)定各中藥多糖對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞的安全濃度,根據(jù)安全濃度測(cè)定結(jié)果,選擇250.000 μg/ml、125.000 μg/ml、62.500 μg/ml、31.250 μg/ml、15.625 μg/ml 5個(gè)濃度,用MTT法比較5種中藥多糖單獨(dú)和PHA協(xié)同刺激對(duì)外周血T淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)的影響,以及比較5種中藥多糖單獨(dú)和LPS協(xié)同刺激對(duì)脾臟B淋巴細(xì)胞增殖率的影響。結(jié)果顯示,玉竹多糖、桑葉多糖、杜仲多糖、商陸多糖、淫羊藿多糖對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞的安全濃度分別為1 250.0 μg/ml、625.0 μg/ml、625.0 μg/ml、625.0 μg/ml、312.5 μg/ml。玉竹多糖、桑葉多糖、杜仲多糖和淫羊藿多糖無(wú)論是單獨(dú)還是協(xié)同PHA刺激外周血T淋巴細(xì)胞,均不同程度地表現(xiàn)出增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞的活性。桑葉多糖、杜仲多糖和淫羊藿多糖無(wú)論是單獨(dú)還是協(xié)同LPS刺激脾臟B淋巴細(xì)胞,均不同程度地顯示出良好的增強(qiáng)B淋巴細(xì)胞的活性。桑葉多糖和杜仲多糖體外增強(qiáng)免疫效果最佳,在62.500 μg/ml和125.000 μg/ml時(shí),均顯示出較強(qiáng)的增強(qiáng)外周血T淋巴細(xì)胞和脾臟B淋巴細(xì)胞增殖的能力。

中藥多糖；淋巴細(xì)胞增殖；植物血凝素(PHA）；脂多糖(LPS）

動(dòng)物的病毒性傳染病,如高致病性禽流感[1]、新城疫[2]、傳染性法氏囊病[3]等,嚴(yán)重危害畜牧業(yè)的發(fā)展,造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,一直受到廣泛的關(guān)注[4]。然而,單獨(dú)使用疫苗效果普遍較差,通常都需要配合相應(yīng)的佐劑才能達(dá)到滿意的免疫效果。但目前常用的鋁鹽和礦物油佐劑卻存在許多缺點(diǎn),因此,研發(fā)高效低毒的新型免疫佐劑成為當(dāng)前防控動(dòng)物傳染性疾病的熱點(diǎn)。

大量研究結(jié)果表明,許多中草藥及其有效成分單獨(dú)或者組成復(fù)方配伍使用都具有良好的免疫增強(qiáng)活性[5],其毒副作用小,殘留污染低[6],來(lái)源廣泛,便于應(yīng)用。因此,研發(fā)以中草藥有效成分為主的新型免疫佐劑將成為今后畜禽免疫增強(qiáng)劑的發(fā)展趨勢(shì)。

諸多研究結(jié)果表明,一些藥食兩用中藥多糖具有一定的免疫調(diào)節(jié)功能,表現(xiàn)出不同程度的免疫增強(qiáng)活性。鑒于此,本研究選擇玉竹多糖、桑葉多糖、杜仲多糖、商陸多糖、淫羊藿多糖為研究對(duì)象,在測(cè)定以上多糖最大細(xì)胞安全濃度的基礎(chǔ)上,通過(guò)單獨(dú)刺激和協(xié)同PHA(Phytohaemagglutinin）或LPS(Lipopolysaccharide）共同刺激,比較5種中藥多糖5個(gè)濃度下對(duì)雞外周血T淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)或?qū)ζ⑴KB淋巴細(xì)胞增殖率的影響,旨在篩選出體外免疫活性最好的中藥多糖,為進(jìn)一步研究其體內(nèi)免疫增強(qiáng)作用效果奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 中藥成分的制備

選擇桑葉、杜仲皮、玉竹、商陸、淫羊藿五種中藥原料,分別制備桑葉多糖、杜仲多糖、玉竹多糖、商陸多糖、淫羊藿多糖。各中藥多糖均采用水提醇沉法制備,用苯酚-硫酸法進(jìn)行多糖含量測(cè)定,所得多糖的含量為：桑葉多糖29.83%、杜仲多糖31.02%、玉竹多糖96.09%、商陸多糖45.76%、淫羊藿多糖66.38%。將各中藥成分配成10 mg/ml濃度,用于最大細(xì)胞安全濃度測(cè)定。再根據(jù)安全濃度測(cè)定結(jié)果,用RPMI 1640將各中藥多糖分別配成250.000 μg/ml、125.000μg/ml、62.500μg/ml、31.250 μg/ml、15.625 μg/ml系列濃度,用于體外淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)。

1.2 主要試劑與儀器

小牛血清,杭州四季青生物制品廠生產(chǎn)；RPMI 1640培養(yǎng)液,Gibco公司產(chǎn)品；Hank's液,自制；四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT）,北京廣源恒信科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)；植物血凝素(PHA）,南京奧多福尼生物科技有限公司生產(chǎn)；脂多糖(LPS）,Sigma公司生產(chǎn)；二甲基亞砜(DMSO）(分析純）,上海凌峰化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；磷酸鹽緩沖液(PBS）(pH 7.1～7.3）,自配。

TS100型倒置顯微鏡,Nikon公司生產(chǎn)；CO2培養(yǎng)箱,America Revco公司生產(chǎn)；RT-6000型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀,深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司生產(chǎn)；75-2A型微量振蕩器,上海醫(yī)用分析儀器廠生產(chǎn)；細(xì)胞培養(yǎng)板,德國(guó)Nunclon公司生產(chǎn)；BS110S型電子天平,Sartorius公司生產(chǎn)。

1.3 最大細(xì)胞安全濃度測(cè)定

選擇10日齡雞胚,調(diào)節(jié)細(xì)胞至適當(dāng)密度后置于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,在CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)24 h,棄去細(xì)胞生長(zhǎng)液,用Hanks液清洗后每孔加入系列濃度的中藥多糖(2 000.000 μg/ml、1 000.000 μg/ml、500.000 μg/ml、250.000 μg/ml、125.000 μg/ml、62.500μg/ml、31.250μg/ml、15.625 μg/ml、7.813 μg/ml、3.906 μg/ml）100 μl,4次重復(fù),設(shè)細(xì)胞和空白對(duì)照。繼續(xù)培養(yǎng)72 h,觀察細(xì)胞有無(wú)病變,若各重復(fù)孔均無(wú)病變,則采用MTT法測(cè)定各孔OD值,以加藥孔OD值不顯著低于細(xì)胞對(duì)照孔OD值的最高濃度作為最大細(xì)胞安全濃度。

1.4 雞外周血T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)

用MTT法比較各中藥成分增強(qiáng)免疫活性[5]。無(wú)菌取雞心臟血液,分離淋巴細(xì)胞于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,設(shè)PHA和細(xì)胞對(duì)照組,除空白孔外每孔加入系列濃度中藥多糖100 μl,培養(yǎng)44 h取出,每孔分別加入MTT 30 μl,繼續(xù)培養(yǎng)4 h后,加DMSO顯色并震蕩后測(cè)定吸光值(A570）,以及刺激指數(shù)(SI）,SI=試驗(yàn)孔A570平均值/對(duì)照孔A570平均值,作為淋巴細(xì)胞增殖的指標(biāo)。刺激指數(shù)大于1時(shí),表明有明顯的刺激作用。

1.5 雞脾臟B淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)

無(wú)菌取出成年健康雞脾臟,收集脾細(xì)胞懸液并稀釋至1 ml 5×106個(gè),加入至96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,設(shè)LPS對(duì)照,除細(xì)胞對(duì)照組外各孔加入系列濃度中藥成分100 μl,4次重復(fù)。培養(yǎng)44 h取出,每孔分別加入MTT 30 μl,繼續(xù)培養(yǎng)4 h后,加DMSO顯色并震蕩后測(cè)定吸光值(A570）,作為B淋巴細(xì)胞增殖的指標(biāo)。并按公式計(jì)算淋巴細(xì)胞增殖率[8]：增殖率=

2 結(jié)果

2.1 各中藥多糖細(xì)胞安全濃度

表1顯示,玉竹多糖對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞(CEF）的最大安全藥物濃度為1 250.000 μg/ml,桑葉多糖、杜仲多糖、商陸多糖最大安全藥物濃度為625.000 μg/ml,淫羊藿多糖最大安全藥物濃度為312.500 μg/ml。各中藥多糖在最大安全濃度以下多個(gè)濃度水平均顯示出一定的促細(xì)胞生長(zhǎng)作用。

表1 中藥多糖對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的影響Table 1 The influence of Chinese herbal medicine polysaccharides on the growth of chicken embryonic fibroblast(CEF）

2.2 各中藥多糖單獨(dú)刺激外周血T淋巴細(xì)胞增殖的變化

各中藥多糖單獨(dú)刺激時(shí)外周血T淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)見(jiàn)表2。玉竹多糖在125.000～250.000 μg/ml濃度時(shí),對(duì)外周血T淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)顯著高于低濃度。桑葉多糖在62.500～250.000 μg/ml濃度時(shí),顯著高于低濃度,且125.000 μg/ml濃度時(shí)刺激指數(shù)最高。杜仲多糖62.500～125.000 μg/ml濃度時(shí)顯著高于其他濃度,且62.500 μg/ml濃度時(shí)刺激指數(shù)最高。商陸多糖在250.000 μg/ml濃度時(shí)刺激指數(shù)最高,且顯著高于其他濃度,其他4個(gè)濃度間的刺激指數(shù)無(wú)顯著性差異。淫羊藿多糖在31.250～62.5.000 μg/ml濃度時(shí)顯著高于其他濃度,在250.000 μg/ml濃度時(shí)表現(xiàn)出較低的刺激指數(shù)。

表2 中藥多糖單獨(dú)刺激時(shí)外周血T淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)(SI）Table 2 T lymphocyte stimulation index(SI）of peripheral blood stimulated alone by Chinese herbal medicine polysaccharides

2.3 各中藥多糖協(xié)同PHA刺激外周血T淋巴細(xì)胞增殖的變化

各中藥多糖協(xié)同PHA刺激外周血T淋巴細(xì)胞時(shí)刺激指數(shù)見(jiàn)圖1。玉竹多糖在125.000～250.000 μg/ml濃度時(shí),協(xié)同PHA刺激時(shí)外周血T淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)顯著高于低濃度。桑葉多糖在62.500～250.000 μg/ml濃度時(shí),刺激指數(shù)顯著高于低濃度,且125.000 μg/ml濃度時(shí)刺激指數(shù)最高。杜仲多糖在62.500～125.000 μg/ml濃度時(shí),刺激指數(shù)顯著高于其他濃度,且62.500 μg/ml濃度時(shí)刺激指數(shù)最高。商陸多糖在250.000 μg/ml濃度時(shí),刺激指數(shù)顯著高于低濃度,在15.625～125.000 μg/ml濃度時(shí)各濃度間無(wú)顯著性差異。淫羊藿多糖在31.250～62.500 μg/ml濃度時(shí)刺激指數(shù)最高,且顯著高于其他濃度。

圖1 不同中藥多糖協(xié)同PHA刺激外周血T淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)Fig.1 T lymphocyte stimulation index(SI）of peripheral blood co-stimulated by PHA and Chinese herbal medicine polysaccharides

2.4 中藥多糖單獨(dú)刺激對(duì)脾臟B淋巴細(xì)胞增殖率的影響

中藥多糖單獨(dú)刺激脾臟B淋巴細(xì)胞增殖率見(jiàn)圖2。玉竹多糖在31.250～250.000 μg/ml濃度時(shí),顯著高于15.625 μg/ml濃度。桑葉多糖在125.000 μg/ml濃度時(shí)增殖率最高,顯著高于其他各濃度。杜仲多糖在62.500 μg/ml濃度時(shí)顯著高于其他各濃度,在125.000～250.000 μg/ml濃度時(shí)亦顯著高于15.625 μg/ml和31.250 μg/ml 2個(gè)濃度。商陸多糖和淫羊蕾多糖在250.000 μg/ml濃度時(shí)顯著高于15.625～61.250 μg/ml 3個(gè)濃度。

圖2 中藥多糖單獨(dú)刺激脾臟B淋巴細(xì)胞增殖率Fig.2 Spleenic B lymphocyte proliferation rate stimulated alone by Chinese herbal medicine polysaccharides

2.5 中藥多糖協(xié)同LPS刺激對(duì)脾臟B淋巴細(xì)胞增殖率的影響

中藥多糖協(xié)同LPS刺激脾臟B淋巴細(xì)胞增殖率見(jiàn)圖3。玉竹多糖在250.000 μg/ml濃度時(shí),脾臟B淋巴細(xì)胞增殖率顯著高于15.625 μg/ml濃度。桑葉多糖在31.250～250.000 μg/ml濃度時(shí)均顯示出較高的增殖率,顯著高于15.625 μg/ml濃度,且在125.000 μg/ml濃度時(shí)最高。杜仲多糖在31.250～250.000 μg/ml濃度時(shí)脾臟B淋巴細(xì)胞增殖率顯著高于15.625 μg/ml濃度。商陸多糖在250 μg/ml濃度時(shí)脾臟B淋巴細(xì)胞增殖率顯著高于31.250 μg/ml和15.625 μg/ml 2個(gè)濃度。淫羊藿多糖在250.000 μg/ml濃度時(shí)脾臟B淋巴細(xì)胞增殖率顯著高于15.625 μg/ml、31.250 μg/ml和62.500 μg/ml 3個(gè)濃度。

3 討論

酶學(xué)比色法是目前細(xì)胞免疫學(xué)檢測(cè)中的一種常用方法。用該法檢測(cè)藥物對(duì)免疫細(xì)胞活性的影響,不僅操作簡(jiǎn)單、安全,而且客觀準(zhǔn)確,容易定量[7]。本試驗(yàn)選擇雞胚成纖維細(xì)胞(CEF）作為免疫細(xì)胞,測(cè)定5種中藥多糖對(duì)CEF的最大安全濃度。結(jié)果顯示,桑葉多糖、杜仲多糖、商陸多糖具有相同的安全濃度,為625 μg/ml,玉竹多糖安全濃度最大,而淫羊藿多糖安全濃度最低。各中藥多糖在最大安全濃度以下多個(gè)濃度水平均顯示出一定的促細(xì)胞生長(zhǎng)作用。

圖3 不同中藥多糖協(xié)同LPS共同刺激脾臟B淋巴細(xì)胞增殖率Fig.3 Spleenic B lymphocyte proliferation rate co-stimulated by LPS and Chinese herbal medicine polysaccharides

淋巴細(xì)胞增殖是反應(yīng)機(jī)體細(xì)胞免疫最直接的指標(biāo)[8]。T細(xì)胞具有介導(dǎo)細(xì)胞免疫及調(diào)節(jié)免疫的雙重功能,其能識(shí)別和提呈抗原,特別是TH細(xì)胞核TS細(xì)胞能調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞增殖和分化[9]。因此,監(jiān)測(cè)T細(xì)胞增殖的變化是研究藥物活性和作用機(jī)制的最好的方法。PHA作為有絲分裂原,在體外可以刺激T淋巴細(xì)胞的活化分裂增殖。通常將藥物單獨(dú)刺激和PHA協(xié)同刺激T淋巴細(xì)胞增殖作為判定中藥體外對(duì)細(xì)胞免疫的調(diào)節(jié)功能的基本指標(biāo)。各中藥多糖單獨(dú)和協(xié)同PHA刺激外周血T淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)結(jié)果顯示,5種中藥多糖無(wú)論是單獨(dú)還是協(xié)同PHA刺激外周血T淋巴細(xì)胞,除了桑葉多糖和淫羊藿多糖出現(xiàn)過(guò)刺激指數(shù)小于1,其余均大于1,說(shuō)明5種多糖體外均不同程度地表現(xiàn)出增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞的活性。各中藥多糖單獨(dú)和協(xié)同PHA刺激外周血T淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)結(jié)果顯示,在62.500～125.000 μg/ml時(shí),玉竹多糖、桑葉多糖和杜仲多糖刺激指數(shù)高于其它多糖,且桑葉的效果最好。250.000 μg/ml時(shí),玉竹多糖和桑葉多糖刺激指數(shù)最大,而杜仲高濃度時(shí)增殖指數(shù)較小,可能高濃度對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生了抑制作用。而商陸多糖在不同濃度其增殖指數(shù)較小,說(shuō)明其對(duì)T淋巴細(xì)胞無(wú)顯著的刺激增殖能力。類似的研究結(jié)果也有報(bào)道,桑葉多糖可極顯著提高巨噬細(xì)胞吞噬百分率、吞噬指數(shù)和T、B淋巴細(xì)胞功能(P＜0.01）[10]。

脾臟是雞重要的免疫器官,脾臟中B淋巴細(xì)胞約占脾內(nèi)淋巴細(xì)胞總數(shù)55%。B淋巴細(xì)胞是機(jī)體中參與免疫應(yīng)答的重要細(xì)胞類群,主要參與體液免疫[11]。監(jiān)測(cè)脾臟中B細(xì)胞增殖的變化亦是研究藥物活性的常用方法之一。而有絲分裂原LPS能刺激B淋巴細(xì)胞的活化分裂增殖,通常將藥物單獨(dú)刺激和LPS協(xié)同刺激脾B淋巴細(xì)胞增殖作為判定中藥體外對(duì)細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功能的基本指標(biāo)[12]。本研究結(jié)果顯示,5種中藥多糖中,桑葉多糖、杜仲多糖、淫羊藿多糖單獨(dú)刺激時(shí)脾臟B淋巴細(xì)胞增殖率顯著高于玉竹多糖和商陸多糖。桑葉多糖在125.000 μg/ml時(shí)脾臟B淋巴細(xì)胞增殖率顯著高于其他濃度,高濃度時(shí)呈現(xiàn)一定的抑制作用。杜仲多糖在62.500 μg/ml時(shí)增殖率顯著高于其他濃度,濃度升高也呈現(xiàn)明顯的抑制作用。而淫羊藿多糖在250.000 μg/ml時(shí)增殖率最大,呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系。LPS與中藥多糖共同刺激脾B淋巴細(xì)胞增殖率結(jié)果顯示,經(jīng)LPS誘導(dǎo)后,各中藥多糖刺激淋巴細(xì)胞增殖率明顯增高。桑葉多糖和杜仲多糖在62.500 μg/ml、125.000 μg/ml時(shí),經(jīng)LPS協(xié)同作用顯示出很強(qiáng)的促進(jìn)脾臟B淋巴細(xì)胞增殖的能力,淫羊藿多糖次之,而玉竹和商陸多糖較弱。有類似的研究報(bào)道稱桑葉多糖與刀豆蛋白A(ConA）協(xié)同作用,誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力,具有增強(qiáng)小鼠免疫功能的作用[13]。而與王洪斌[14]報(bào)道的商陸多糖體外能顯著促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖,促進(jìn)絲裂原誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化及雙向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)結(jié)果不一致。

綜上所述,玉竹多糖、桑葉多糖、杜仲多糖具有較高的安全濃度,在62.500～125.000 μg/ml時(shí),與15.625 μg/ml比較,無(wú)論是單獨(dú)刺激還是協(xié)同PHA均能顯著地誘導(dǎo)外周血T淋巴細(xì)胞增殖,產(chǎn)生較高的刺激指數(shù)。桑葉多糖、杜仲多糖在62.500～250.000 μg/ml時(shí),與15.625 μg/ml比較,無(wú)論是單獨(dú)刺激還是協(xié)同LPS均能顯著地提高脾臟B淋巴細(xì)胞增殖率,且桑葉多糖在125.000 μg/ml時(shí),杜仲多糖在62.500 μg/ml時(shí),具有最強(qiáng)的促進(jìn)脾臟B淋巴細(xì)胞增殖的能力。

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[13]侯瑞宏,廖森泰,劉 凡,等.桑葉多糖對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的影響[J].食品科學(xué),2011,32(11）：280-283.

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(責(zé)任編輯：陳海霞）

Comparative study on chicken peripheral lymphocyte and spleen lymphocyte proliferation by Chinese herbal medicinal polysaccharides in vitro

JIANG Chun-mao1, CHEN Xiao-lan1,2, LU Guang-fu1, CHEN Xing-ying2, WANG De-yun2, HU Yuan-liang2, GEN Qian-li1

(1.Jiangsu Agri-animal Husbandry Vocational College,Taizhou 225300,China；2.College of Veterinary Medicine,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China）

Polygonatum odoratumpolysaccharide(POPS）,morus polysaccharide(MPS）,eucommia polysaccharide (EPS）,pokeweed polysaccharide(PPS）,and epimedium polysaccharide(EPPS）to chicken embryonic fibroblast(CEF）in vitrowere determined and showed as follows compared.1 250.0 μg/ml,625.0 μg/ml,625.0 μg/ml,625.0 μg/ml,and 312.5 μg/ml,respectively.The effects of above five polysaccharides applied solely or co-applied with phytohaema glutinin (PHA）on the proliferation of peripheral blood T lymphocytes and the effects of five paly saccharides appiied solely or co-applied with lipopolysaccharide LPS on the proliferation of spleenic B lymphocytes were compared.POPS,MPS, EPSand EPPScould enhance peripheral blood Tlymphocytes activity at different levels either stimulated alone or co-stimulated with PHA.MPS,EPSand EPPScould improve spleenic B lymphocytes activity at different levels either stimulated alone or co-stimulated with LPS.The im-mune enhancements of MPSand EPSin vitrooutperformed others at the concentration of 62.5 μg/ml and 125 μg/ml.

Chinese herbal medicinal polysaccharide；lymphocyte proliferation；phytohaemagglutinin(PHA）；lipopolysaccharide(LPS）

S853.74

A

1000-4440(2015）01-0106-06

蔣春茂,陳曉蘭,陸廣富,等.不同中藥多糖體外對(duì)雞外周血和脾臟淋巴細(xì)胞增殖能力的比較[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2015,31(1）：106-111.

10.3969/j.issn.1000-4440.2015.01.016

2014-06-20

江蘇省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(BK2011537）；江蘇省農(nóng)業(yè)三新工程項(xiàng)目[SXGC(2013）291]；江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院鳳凰人才專項(xiàng)(NSFFH1303）；江蘇省大學(xué)生實(shí)踐創(chuàng)新項(xiàng)目(201412806016Y）；學(xué)院重點(diǎn)項(xiàng)目(NSFZD1404）

蔣春茂(1962-）,男,江蘇靖江人,博士,教授,主要從事新獸藥研發(fā)。