大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎病程不同階段T細(xì)胞亞群及重要器官的病理學(xué)變化

孫曉靜，徐 澍，賈曉益，魏 芳，楊雪枝，常 艷，魏 偉

(安徽醫(yī)科大學(xué)臨床藥理研究所，抗炎免疫藥物教育部重點實驗室,安徽 合肥 230032)

大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎病程不同階段T細(xì)胞亞群及重要器官的病理學(xué)變化

孫曉靜，徐 澍，賈曉益，魏 芳，楊雪枝，常 艷，魏 偉

(安徽醫(yī)科大學(xué)臨床藥理研究所，抗炎免疫藥物教育部重點實驗室,安徽 合肥 230032)

目的 觀察大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant rheumatoid arthritis, AA)病程不同階段的脾臟T細(xì)胞亞群及其重要器官的病理學(xué)變化，探討病程不同的階段AA大鼠T細(xì)胞亞群變化的規(guī)律及局部組織和全身重要器官的病理學(xué)變化特點。方法 選用20只♂ Lewis大鼠，完全弗氏佐劑(CFA)誘導(dǎo)AA模型，造模后d 7、d 10、d 13、d 16、d 19、d 22進(jìn)行全身評分和關(guān)節(jié)炎指數(shù)評分，計算關(guān)節(jié)腫脹數(shù)。造模后d 14(炎癥初期)、d 22(炎癥高峰期)處死大鼠，流式細(xì)胞儀檢測炎癥初期和炎癥高峰期脾臟總T細(xì)胞(CD3+CD4+)、記憶T細(xì)胞(CD4+CD44+)、未致敏T細(xì)胞(CD4+CD62L+)的細(xì)胞亞群和Th17(CD4+IL-17+)細(xì)胞亞群比例。d 22取心、肝、脾、肺、腎、踝關(guān)節(jié)、腸系膜淋巴結(jié)組織，光鏡觀察各組織的病理學(xué)改變。結(jié)果 大鼠免疫后10 d出現(xiàn)繼發(fā)側(cè)足爪紅腫，炎癥初期(d 10～d 14)和炎癥高峰期(d 19～d 22)AA大鼠的全身評分、關(guān)節(jié)炎指數(shù)評分和關(guān)節(jié)腫脹數(shù)有不同程度的增加。踝關(guān)節(jié)病理見滑膜組織增生、炎細(xì)胞浸潤，血管翳出現(xiàn)等，且心、肝、脾、肺、腎、腸系膜淋巴結(jié)組織的病理也有不同程度的炎性變化。與正常組比較，炎癥初期AA大鼠脾臟總T細(xì)胞、記憶T細(xì)胞和未致敏T細(xì)胞亞群比例都無明顯變化、炎癥高峰期AA大鼠脾臟總T細(xì)胞、記憶T細(xì)胞和未致敏T細(xì)胞亞群比例明顯升高；Th17細(xì)胞亞群比例在炎癥初期和高峰期都明顯升高。結(jié)論 AA大鼠的T細(xì)胞亞群在炎癥初期和高峰期出現(xiàn)不同的變化特點；在大鼠AA不僅有關(guān)節(jié)局部的病理表現(xiàn)，且全身主要臟器組織均有受累。

佐劑性關(guān)節(jié)炎；類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；Th17；病理學(xué)；T細(xì)胞亞群；病程

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis, RA)是一種慢性的表現(xiàn)為滑膜炎癥并導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨和骨損害的全身炎癥免疫性疾病[1]。除了對關(guān)節(jié)軟骨滑膜造成損害以外，RA的關(guān)節(jié)外臨床表現(xiàn)和并發(fā)癥也有很多，比如心包炎、心肌炎、腎小球腎炎等等[2]。CD4+T細(xì)胞是浸潤RA滑膜關(guān)節(jié)的主要免疫細(xì)胞，多年來，RA一直被認(rèn)為是一種T細(xì)胞驅(qū)動的疾病[3]。根據(jù)細(xì)胞的功能，通常將CD4+T細(xì)胞分為Th1、Th2輔助細(xì)胞以及T調(diào)節(jié)細(xì)胞三個亞群，Th17 細(xì)胞是近年來研究發(fā)現(xiàn)的一種CD4+T細(xì)胞新亞型，高分泌IL-17，與許多炎癥反應(yīng)和自身免疫病的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)[4]。RA患者的血清和關(guān)節(jié)滑液中Th17細(xì)胞數(shù)量和IL-17的表達(dá)都明顯升高[5]。

大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritis, AA)模型是一種T細(xì)胞依賴、細(xì)胞免疫介導(dǎo)的炎癥性免疫動物模型，在臨床表現(xiàn)和病理機(jī)制等方面與人RA有許多相似特征，是研究RA病理機(jī)制的較理想動物模型[6]。本文成功建立了大鼠AA模型，進(jìn)行全身評分、關(guān)節(jié)炎指數(shù)，關(guān)節(jié)腫脹數(shù)的測定，檢測了炎癥初期和高峰期T細(xì)胞亞群的變化，總T細(xì)胞(CD3+CD4+)、未致敏T細(xì)胞(CD4+CD62L+)和記憶T細(xì)胞(CD4+CD44+)在炎癥初期沒有明顯變化，但在炎癥高峰期均明顯升高；Th17細(xì)胞亞群比例在炎癥初期就有明顯升高。為以病程不同階段的T細(xì)胞亞群調(diào)控為策略或以Th17細(xì)胞為靶標(biāo)的RA早期診斷、早期治療及預(yù)后判斷研究，提供了實驗依據(jù)。觀察AA大鼠踝關(guān)節(jié)、心、肝、脾、肺、腎、腸系膜淋巴結(jié)組織病理形態(tài)的變化，結(jié)果顯示多種重要組織都有不同程度的炎性改變。為綜合探討和分析關(guān)節(jié)局部和全身重要臟器的炎癥性反應(yīng)提供了實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物L(fēng)ewis 大鼠，♂，清潔級，體質(zhì)量160～180 g，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司,許可證號碼: SCXK(京)2012-0001，在恒溫(24±2) ℃、光照周期12 h環(huán)境中，飼養(yǎng)1周后實驗。

1.2 試劑卡介苗(bacillus calmette-guerin, BCG)：成都生物制品研究所有限責(zé)任公司產(chǎn)品，生產(chǎn)批號：20123007。

1.3 方法

1.3.1 大鼠AA模型的制備 將BCG 80℃水浴滅活1 h，與高壓滅菌的石蠟充分研磨混勻，制成10 g·L-1完全弗氏佐劑(complete freund adjuvant, CFA)，于每只Lewis大鼠右后足跖皮內(nèi)注射CFA 0.1 mL致炎[6]，造模當(dāng)天設(shè)為d 0。

1.4 檢測指標(biāo)

1.4.1 全身評分 從致炎后d 7，每隔3 d(d 7、d 10、d 13、d 16、d 19、d 22)進(jìn)行全身表現(xiàn)評分，評分標(biāo)準(zhǔn)包括：耳：0=無結(jié)節(jié)和發(fā)紅癥狀，1=一只耳朵結(jié)節(jié)和發(fā)紅癥狀，2=兩只耳朵結(jié)節(jié)和發(fā)紅癥狀；鼻：0=無結(jié)締組織腫脹，1=明顯結(jié)締組織腫脹；尾:0=無結(jié)節(jié)，1=有結(jié)節(jié)；前足爪：0=無腫脹，1=一個前足爪腫脹，2=兩個前足爪腫脹；后足爪：0=無腫脹，1=一個后足爪腫脹，2=兩個后足爪腫脹，每只大鼠最多評8分[7]。

1.4.2 關(guān)節(jié)炎指數(shù) 從致炎后d 7，每隔3 d(d 7、d 10、d 13、d 16、d 19、d 22)進(jìn)行關(guān)節(jié)炎指數(shù)評分，觀察每組大鼠的繼發(fā)病變。每只足爪的關(guān)節(jié)炎指數(shù)評分標(biāo)準(zhǔn):0=正常；1=踝關(guān)節(jié)出現(xiàn)紅斑和輕微腫脹；2=踝關(guān)節(jié)到跖關(guān)節(jié)或掌關(guān)節(jié)紅斑和輕微腫脹；3=踝關(guān)節(jié)到跖趾關(guān)節(jié)或掌關(guān)節(jié)出現(xiàn)紅斑和中度腫脹；4=踝關(guān)節(jié)到趾關(guān)節(jié)出現(xiàn)紅斑和重度腫脹 每只大鼠最多評12分[6]。

1.4.3 關(guān)節(jié)腫脹數(shù) 從致炎后d 7，每隔3 d(d 7、d 10、d 13、d 16、d 19、d 22)計算關(guān)節(jié)腫脹數(shù)。每只足爪計1個踝關(guān)節(jié)(或腕關(guān)節(jié))和5個指(趾)關(guān)節(jié)，每只大鼠最多24個關(guān)節(jié)腫脹[7]。

1.4.4 病理學(xué)觀察 造模后d 22,分別將正常對照組和模型組大鼠麻醉后頸部脫臼處死，迅速剪開大鼠腹部縫線，分離各臟器組織，留取心、肝、脾、肺、腎、踝關(guān)節(jié)、腸系膜淋巴結(jié)組織，置于含體積分?jǐn)?shù)10%甲醛溶液的玻璃瓶中固定，5%HNO3(踝關(guān)節(jié))，選塊，不同濃度梯度乙醇逐級脫水，石蠟包埋，制作病理切片(厚約5 μm)，經(jīng)蘇木精-伊紅(HE)染色后，Olympus光鏡觀察各組織病理學(xué)變化。

1.4.5 脾臟CD4+T細(xì)胞數(shù)量及特征性表面抗原測定 造模后d 14和d 22，麻醉后頸椎脫臼處死大鼠，無菌分離大鼠脾臟，制備脾細(xì)胞懸液，分別加入CD3-APC/CD4-FITC一抗，CD62L-APC/CD4- FITC一抗，CD44-PE/CD4-FITC一抗；檢測總(CD3+CD4+)、未致敏(CD4+CD62L+)和記憶(CD4+CD44+)T細(xì)胞，4℃避光放置30 min后上機(jī)檢測。Th17細(xì)胞的檢測：100 μL的脾細(xì)胞懸液中先加入CD4-FITC，4℃避光孵育30 min后，300 g離心5 min，棄上清，加入Fixation/permeabilization穿膜60 min，用洗液洗滌后，加入IL-17-PE 4℃避光孵育45 min后，對胞內(nèi)細(xì)胞因子IL-17進(jìn)行染色，洗液洗滌后，500 μl PBS重懸細(xì)胞后上機(jī)檢測。

2 結(jié)果

2.1 AA大鼠體征觀察情況大鼠AA原發(fā)病變主要表現(xiàn)為早期致炎部位的局部炎癥反應(yīng)，在發(fā)病過程中，大鼠精神萎靡、毛發(fā)失去光澤，多發(fā)性關(guān)節(jié)腫脹和活動障礙等。免疫后18 h，右后肢(原發(fā)側(cè))腫脹達(dá)高峰，持續(xù)3 d后逐漸減輕；免疫后d 8再度腫脹；免疫后d 10～14 AA大鼠普遍出現(xiàn)全身病變和繼發(fā)性炎癥表現(xiàn)，d 19～22達(dá)高峰，發(fā)病率達(dá)95%以上，表現(xiàn)為左后肢(繼發(fā)側(cè))和前肢的腫脹，耳朵、鼻和尾部出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎結(jié)節(jié)等(Fig 1)。

Fig 1 Sign of AA rats

A: Hind limbs of normal rats; B: Hind limbs of AA rats; C: Fore limbs of normal rats; D: Fore limbs of AA rats; E: Tail of AA rats; F: Ocular region of AA rats.

2.2 AA大鼠整體指標(biāo)觀察造模后d 7、d 10、d 13、d 16、d 19、d 22進(jìn)行全身評分和關(guān)節(jié)炎指數(shù)評分，計算關(guān)節(jié)腫脹數(shù)。結(jié)果顯示：AA大鼠在d 13全身評分(Fig 2-1)、關(guān)節(jié)炎指數(shù)(Fig 2-2)和關(guān)節(jié)腫脹數(shù)(Fig 2-3)開始升高，d 19到達(dá)高峰，與體征觀察一致。

Fig 2-1 Total score of AA rats (n=20)

Fig 2-2 Arthritis index of AA rats (n=20)

Fig 2-3 Paw swelling number (n=20)

2.3 AA大鼠脾臟CD4+ T細(xì)胞亞群比例的變化與正常組比較，炎癥初期模型組脾臟總T細(xì)胞(CD3+CD4+)、記憶T細(xì)胞(CD4+CD44+)、未致敏T細(xì)胞(CD4+CD62L+)的細(xì)胞亞群比例無明顯變化；炎癥高峰期模型組脾臟總T細(xì)胞、記憶T細(xì)胞、未致敏T細(xì)胞的細(xì)胞亞群比例明顯升高(Fig 3-1)。

與正常組比較，炎癥初期和炎癥高峰期模型組脾臟Th17(CD4+IL-17+)細(xì)胞亞群比例均明顯升高(Fig 3-2)。

2.4 AA大鼠踝關(guān)節(jié)、心、肝、脾、肺、腎、腸系膜淋巴結(jié)組織HE染色病理學(xué)變化

2.4.1 AA大鼠踝關(guān)節(jié)病理學(xué)表現(xiàn) 結(jié)果顯示：正常大鼠踝關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)完整，關(guān)節(jié)腔內(nèi)干凈，關(guān)節(jié)表面光滑平整，關(guān)節(jié)囊由結(jié)締組織構(gòu)成，囊腔光滑，有1～2層滑膜細(xì)胞覆蓋。AA大鼠踝關(guān)節(jié)間隙明顯變窄，可見關(guān)節(jié)腔積液，炎性滲出，表面有纖維結(jié)締組織增生，滑膜細(xì)胞增生水腫，血管翳形成，滑膜組織內(nèi)小血管增生，擴(kuò)張充血，大量炎細(xì)胞浸潤，以淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞和漿細(xì)胞慢性炎細(xì)胞浸潤為主(Fig 4-1)。

Fig 3-1 Variation of T-cell subsets in AA spleen in different courses ±s，n=3～4) (Molecule expressions on T cell surface were detected using a flow cytometer)A: Total (CD3+CD4+) T cells; B: Naive (CD4+CD62L+) T cells; C: Memory (CD4+CD44+) T cells. *P<0.05 vs normal group

Fig 3-2 Variation of Th17 subsets in AA spleen in different courses ±s，n=3～4)

**P<0.01vsnormal group；#P<0.05vsd 22 group

Fig 4-1 HE staining of ankle joints of rats(×100)

A: Normal group; B: AA group

2.4.2 AA大鼠心臟病理學(xué)表現(xiàn) 結(jié)果顯示：正常對照組心肌呈粉紅色，胞質(zhì)胞核及組織結(jié)構(gòu)清晰，心肌纖維細(xì)長，呈圓柱形，分支并互連成網(wǎng)，心肌纖維間有少量結(jié)締組織；模型組心肌纖維濁腫，肌原纖維不清，橫紋消失，局灶性肌漿凝聚，呈波浪狀改變或形狀不規(guī)則的顆粒、團(tuán)塊和收縮帶，間質(zhì)可見明顯水腫(Fig 4-2)。

Fig 4-2 HE staining of heart of rats (×200)

A: Normal group; B: AA group

2.4.3 AA大鼠肝臟病理學(xué)表現(xiàn) 結(jié)果顯示：正常對照組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常圍繞中央靜脈呈放射狀排列。模型組肝索紊亂，肝細(xì)胞呈輕度或中度水腫，胞質(zhì)疏松，肝小葉紊亂，有細(xì)小的、無規(guī)律性散布于肝小葉中的淋巴組織細(xì)胞呈局灶性細(xì)胞聚集，為肝細(xì)胞點狀壞死(Fig 4-3)。

Fig 4-3 HE staining of liver of rats (×200)

A: Normal group; B: AA group

2.4.4 AA大鼠脾臟病理學(xué)表現(xiàn) 結(jié)果顯示：脾臟由脾白髓和紅髓組成，白髓包括三個結(jié)構(gòu)：淋巴小結(jié)、動脈周圍淋巴鞘和邊緣區(qū)，紅髓由脾索和脾血竇組成。正常對照組脾臟結(jié)構(gòu)清晰明顯，白髓與紅髓界限較明顯，淋巴小結(jié)中央動脈和動脈周圍淋巴鞘清晰可見，淋巴細(xì)胞密集；模型組白髓與紅髓界限模糊，可見明顯的白髓增生，出現(xiàn)生發(fā)中心，紅髓增生，淤血增多，脾竇和紅髓的外套叢充血，有粒細(xì)胞浸潤(Fig 4-4)。

Fig 4-4 HE staining of spleen of rats (×200)

A: Normal group; B: AA group

2.4.5 AA大鼠肺臟病理學(xué)表現(xiàn) 結(jié)果顯示：正常對照組肺組織中肺泡結(jié)構(gòu)清晰，肺泡腔及支氣管腔有少量紅細(xì)胞。 模型組大部分肺泡結(jié)構(gòu)顯正常，少數(shù)肺泡間隙輕度增寬，未見明顯炎癥細(xì)胞及浸出物，偶見少量炎性細(xì)胞(Fig 4-5)。

Fig 4-5 HE staining of lungs of rats (×200)

A: Normal group; B: AA group

2.4.6 AA大鼠腎臟病理學(xué)表現(xiàn) 結(jié)果顯示：正常對照組腎臟結(jié)構(gòu)正常，包括皮質(zhì)和髓質(zhì)，含大量泌尿小管，其間有少量結(jié)締組織、血管、神經(jīng)等構(gòu)成的腎間質(zhì)，腎小管上皮細(xì)胞完好。模型組可見腎小球數(shù)量減少、體積增大，腎小管上皮細(xì)胞有水腫,有炎性細(xì)胞浸潤(Fig 4-6)。

Fig 4-6 HE staining of kidney of rats (×200)

A: Normal group; B: AA group

2.4.7 AA大鼠腸系膜淋巴結(jié)病理學(xué)表現(xiàn) 結(jié)果顯示：正常淋巴結(jié)表面有薄層結(jié)締組織構(gòu)成的被膜，有時可見穿通的輸入淋巴管，被膜的結(jié)締組織深入實質(zhì)中，形成小梁。皮質(zhì)由淺層皮質(zhì)、副皮質(zhì)區(qū)和皮質(zhì)淋巴竇組成，髓質(zhì)由髓索和髓竇組成；淋巴細(xì)胞呈圓形或橢圓形，邊緣整齊。模型組腸系膜淋巴結(jié)髓質(zhì)里的髓索中大量漿細(xì)胞浸潤(Fig 4-7)。

Fig 4-7 HE staining of mesenteric lymph node of rats (×400)

A: Normal group; B: AA group

3 討論

RA是一種系統(tǒng)性炎癥免疫性疾病，以外周滑膜關(guān)節(jié)慢性炎性病變?yōu)橹鳎⒖衫奂捌渌M織和器官[2]。我們采用完全弗氏佐劑誘導(dǎo)Lewis大鼠，成功建立了AA模型，結(jié)果顯示，AA大鼠原發(fā)側(cè)和繼發(fā)側(cè)足爪及踝關(guān)節(jié)腫脹，活動障礙，全身評分、關(guān)節(jié)炎指數(shù)和足爪腫脹數(shù)都明顯升高，發(fā)病率高達(dá)95%以上。RA的主要病理特點為大量漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞在滑膜中浸潤，以及滑膜組織對軟骨、肌腱、骨的侵蝕和損壞[8]。本研究顯示，AA模型大鼠的踝關(guān)節(jié)病理見滑膜組織增生，炎細(xì)胞浸潤，血管翳出現(xiàn)和骨破壞等，與RA具有類似的病理學(xué)表現(xiàn)。研究也表明，AA大鼠的主要組織器官出現(xiàn)明顯病理學(xué)變化，如心臟心肌纖維絲束排列紊亂，間質(zhì)可見明顯水腫；肝臟肝索紊亂，肝細(xì)胞呈輕度或中度水腫；脾臟白髓與紅髓界限模糊，可見明顯的白髓增生，出現(xiàn)生發(fā)中心、紅髓增生，淤血增多；腎臟腎小球數(shù)量減少、體積增大；腸系膜淋巴結(jié)髓質(zhì)中大量漿細(xì)胞浸潤；未見肺臟出現(xiàn)病理變化。

大鼠AA模型作為一種T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫性炎癥動物模型，免疫調(diào)節(jié)異常是其關(guān)鍵病理機(jī)制，與人的RA相似。RA滑膜中以處于激活狀態(tài)的T淋巴細(xì)胞浸潤為主，尤其是CD4+T 細(xì)胞[9]。CD4+T輔助細(xì)胞產(chǎn)生前炎癥細(xì)胞因子，并釋放大量炎性介質(zhì)，可引起全身各系統(tǒng)、器官的廣泛損傷。T細(xì)胞的活化在RA發(fā)病機(jī)制中至關(guān)重要[10-11]。我們的研究結(jié)果表明，與正常組比較，AA大鼠在炎癥初期脾臟總T細(xì)胞(CD3+CD4+)、未致敏T細(xì)胞(CD4+CD62L+)、記憶T細(xì)胞(CD4+CD44+)細(xì)胞亞群比例都無明顯變化，炎癥高峰期總T細(xì)胞(CD3+CD4+)、未致敏T細(xì)胞(CD4+CD62L+)、記憶T細(xì)胞(CD4+CD44+)細(xì)胞亞群比例明顯升高。提示AA模型CD4+T細(xì)胞亞群嚴(yán)重失衡，與AA大鼠的病理損傷密切相關(guān)。

根據(jù)其產(chǎn)生的細(xì)胞因子及其與之相關(guān)的活性功能的不同，將CD4+T細(xì)胞分為Th1、Th2、Treg和Th17四大亞群[12-13]。Th17 細(xì)胞是近年來研究發(fā)現(xiàn)的一種CD4+T細(xì)胞新亞型，可表達(dá)IL-17A、IL-17F、IL-6和TNF-α等炎性細(xì)胞因子，與許多炎癥反應(yīng)和自身免疫病的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，RA患者的血清和關(guān)節(jié)滑液中Th17細(xì)胞數(shù)量和IL-17的表達(dá)都明顯升高[5,14]。有文獻(xiàn)研究表明，用攜帶IL-17靶基因的病毒載體對小鼠進(jìn)行免疫，在不使用佐劑的情況下就可以在小鼠體內(nèi)誘生抗自身IL-17的抗體，并且產(chǎn)生自身IL-17抗體的小鼠與正常的小鼠相比，CIA的發(fā)病率明顯降低[15]。本實驗在AA模型上首次進(jìn)行了疾病病程不同階段(炎癥早期和炎癥高峰期)T細(xì)胞亞群的研究，結(jié)果顯示：Th17亞群在炎癥初期即明顯升高，比炎癥高峰期升高明顯。

本實驗對大鼠AA模型的多個重要臟器做了病理學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)這些臟器都有明顯的炎癥反應(yīng)，為綜合探討和分析關(guān)節(jié)局部和全身重要臟器的炎癥性反應(yīng)提供了實驗依據(jù)。本實驗還在AA模型上進(jìn)行了疾病病程不同階段(炎癥早期和炎癥高峰期)T細(xì)胞亞群的研究，結(jié)果表明，T細(xì)胞總(CD3+CD4+)、未致敏T細(xì)胞(CD4+CD62L+)和記憶T細(xì)胞(CD4+CD44+)在炎癥初期沒有明顯變化，但在炎癥高峰期均明顯升高；Th17亞群在炎癥初期即明顯升高，比炎癥高峰期升高明顯，此為以病程不同階段的T細(xì)胞亞群調(diào)控為策略或以Th17細(xì)胞為靶標(biāo)的RA早期診斷和早期治療及預(yù)后判斷研究提供了實驗依據(jù)。

[1] Pope R M. Apoptosis as a therapeutic tool in rheumatoid arthritis[J].NatRevImmunol, 2002, 2(7): 527-35.

[2] Young A, Koduri G. Extra-articular manifestations and complications of rheumatoid arthritis[J].BestPractResClinRheumatol, 2007, 21(5): 907-27.

[3] Firestein G S.Evolving concepts of rheumatoid arthritis[J].Nature, 2003, 423(6937): 356-61.

[4] Mu L, Sun B, Kong Q, et al. Disequilibrium of T helper type 1, 2 and 17 cells and regulatory T cells during the development of experimental autoimmune myasthenia gravis[J].Immunology, 2009, 128(1 Suppl): e826-36.

[5] Sarkar S, Fox D A. Targeting IL-17 and Th17 cells in rheumatoid arthritis[J].RheumDisClinNorthAm, 2010, 36(2): 345-66.

[6] 宋姍姍，張玲玲，魏 偉. 實驗性關(guān)節(jié)炎動物模型建立及病理機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 中國藥理學(xué)通報，2011,27(12)：1648-52.

[6] Song S S, Zhang L L, Wei W. Progress in animal models and their pathogenesis of experimental arthritis[J].ChinPharmacolBull, 2011, 27(12): 1648-52.

[7] Wang D, Chang Y, Wu Y, et al. Therapeutic effects of TACI-Ig on rat with adjuvant arthritis[J].ClinExpImmunol, 2011, 163(2): 225-34.

[8] Chang Y, Wu Y, Wang D, et al. Therapeutic effects of TACI-Ig on rats with adjuvant-induced arthritis via attenuating inflammatory responses[J].Rheumatology(Oxford), 2011, 50(5): 862-70.

[9] Zwerina J, Redlich K, Schett G, et al. Pathogenesis of rheumatoid arthritis: targeting cytokines[J].AnnNYAcadSci, 2005, 1051: 716-29.

[10] Zhang X, Nakajima T, Goronzy J J, et al. Tissue trafficking patterns of effector memory CD4+T cells in rheumatoid arthritis[J].ArthritisRheum, 2005, 52(12): 3839-49.

[11] 黃 蓓，汪慶童，劉亢亢,等. 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生發(fā)展中TNF-α信號通路與CD4+T細(xì)胞的關(guān)系[J]. 中國藥理學(xué)通報,2013，29(7)：900-3.

[11] Huang B, Wang Q T, Liu K K, et al. Relationship between TNF-signaling pathway and the function of CD4+T cell subsets in rheumatoid arthritis[J].ChinPharmacolBull, 2013,29(7)：900-3.

[12] Firestein G S, Zvaifler N J. How important are T cells in chronic rheumatoid synovitis: II. T cell-independent mechanisms from beginning to end[J].ArthritisRheum, 2002, 46(2): 298-308.

[13] Romagnani S. Regulation of the T cell response[J].ClinExpAllergy, 2006, 36(11): 1357-66.

[14] Segal B M. Th17 cells in autoimmune demyelinating disease[J].SeminImmunopathol, 2010, 32(1): 71-7.

[15] Rohn T A, Jennings G T, Hernandez M,et al. Vaccination against IL-17 suppresses autoimmune arthritis and encephalomyelitis[J].EurJImmunol, 2006, 36(11): 2857-67.

Variation of T-cell subsets in spleen and tissue histopathological changes in rats with adjuvant arthritis

SUN Xiao-jing, XU Shu, JIA Xiao-yi, WEI Fang, YANG Xue-zhi, CHANG Yan, WEI Wei

(InstituteofClinicalPharmacology,AnhuiMedicalUniversity,KeyLaboratoryofAnti-inflammatoryandImmuneMedicineofEducationMinistryofChina,Hefei230032,China)

Aim To observe the variation of T-cell subsets in spleen in different courses of disease and tissue histopathological changes in rats with adjuvant arthritis (AA). Methods The model of rat AA was induced by complete Freund’s adjuvant into the right hind metatarsal footpad of 20 male Lewis rats. Arthritis was evaluated by total score, arthritis index and paw swelling number. The percentage of total (CD3+CD4+), memory (CD4+CD44+), no-sensitizated (CD4+CD62L+) and Th17 (CD4+IL-17+) on CD4+T cells in spleen were detected by flow cytometry on days 14 and 22 after immuniozation. The histopathological evaluation of heart, liver, spleen, lung, kidney, ankle joints and mesenteric lymph nodes were examined by hematoxylin and eosin (HE) stain. Results The onset of secondary arthritis appeared on about day 10 after immunization, with a peak onset on day 19. Systematic arthritis symptoms included front and hind paw swelling and redness (swelling was more apparent in the front rather than hind paws), nodule formation and redness on the ears, connective tissue swelling and redness of the nose and evident nodules and redness on the tail. Total score, arthritis index and the paw swelling numbers were enhanced in AA rats.Pathohistology of ankles joints showed hyperplasia, pannus formation, and inflammatory cells infiltration in AA rats. And pathohistology of heart, liver, spleen, kidney and mesenteric lymph nodes showed inflammatory changes. Compared with normal group, there was no change in the percentage of total, memory and no-sensitizated CD4+T cell in the early stage inflammation but they were significantly enhanced in the peak of inflammation. Th17 cell subsets were significantly enhanced in both of the early and peak of inflammation. Conclusion These findings suggest that abnormal T cell responses and tissue histopathological changes are important features of AA rats.

adjuvant arthritis; rheumatoid arthritis; Th17; histopathology; T cell subsets; disease course

時間：2015-3-16 15:41 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20150316.1541.016.html

2014-10-12,

2015-02-13

國家自然科學(xué)基金資助項目(No 81330081，81173075，31200675);安徽省科技攻關(guān)項目(No 1301042098)

孫曉靜(1989-)，女，碩士生，研究方向： 抗炎免疫藥理學(xué)，E-mail ：291921552@qq.com; 常 艷(1981-)，女，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：抗炎免疫藥理學(xué)，通訊作者，E-mail：changyan318@126.com; 魏 偉(1960-)，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：抗炎免疫藥理學(xué)，通訊作者，E-mail：wwei@ahmu.edu.cn

10.3969/j.issn.1001-1978.2015.04.008

A

1001-1978(2015)04-0475-07

R-332；R331.125；R392.12；R593.22；R684.3