HPLC法研究燈盞細(xì)辛注射液對水楊酸排泄的影響

戴國梁，李長印，孫冰婷，丁 康，劉史佳，居文政

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床藥理科，江蘇 南京 210029； 2.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,江蘇 南京 210029；3.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院急診科，江蘇 南京 210001)

◇研究簡報◇

HPLC法研究燈盞細(xì)辛注射液對水楊酸排泄的影響

戴國梁1，李長印1，孫冰婷2，丁 康3，劉史佳1，居文政1

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床藥理科，江蘇 南京 210029； 2.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,江蘇 南京 210029；3.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院急診科，江蘇 南京 210001)

近年來，阿司匹林抗血小板聚集活性逐漸成為其臨床主要應(yīng)用領(lǐng)域[1-2]，是心血管疾病方面一線藥物。臨床上，阿司匹林常與燈盞細(xì)辛注射液(DI)、脈絡(luò)寧注射液等中藥制劑合用，用于治療心腦血管疾病，并取得了良好的療效[3-4]。

研究表明，阿司匹林的消除半衰期短，約為7～12 min，難以測到阿司匹林的體內(nèi)過程，因此常測定其代謝物水楊酸的濃度變化來研究體內(nèi)阿司匹林的藥動學(xué)過程[5-6]。

水楊酸在大鼠體內(nèi)的排泄研究及DI對水楊酸排泄的影響未見報道。阿司匹林與DI長期合用可能導(dǎo)致體內(nèi)水楊酸的蓄積，而體內(nèi)水楊酸濃度升高將導(dǎo)致不良反應(yīng)[7-8]。

本文以水楊酸為指標(biāo)，探討DI對大鼠體內(nèi)水楊酸排泄的影響，為DI與阿司匹林合用的安全性提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 儀器Waters 2695/2487高效液相色譜儀(美國Waters公司)；Biofuge PrimoR冷凍高速離心機(jī)(德國Heraeus公司)；WH-2微型旋渦混合儀(上海滬西分析儀器廠)。

1.2 試劑與藥品燈盞細(xì)辛注射液(DI)(云南生物谷燈盞花藥業(yè)有限公司，批號：20120740)；阿司匹林腸溶片(沈陽奧吉娜藥業(yè)有限公司，批號：120502)；對照品水楊酸(中國食品藥品檢定研究院，批號：100106-200303)；對照品非那西丁(Sigma公司，批號：048K1586)。

1.3 尿液的收集SD大鼠，♂，12只，體質(zhì)量250～270 g，由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號：SCXK(浙)2008-0033。給藥前禁食12 h，自由飲水。大鼠隨機(jī)平均分成2組(單獨(dú)和聯(lián)合給藥組)，置于代謝籠中適應(yīng)5 d,收集尿液作為空白樣品。聯(lián)合給藥組先尾靜脈注射DI 4 mL·kg-1，后立即灌胃阿司匹林10 mg·kg-1；單獨(dú)給藥組只灌胃阿司匹林10 mg·kg-1。自給藥時起，收集0～4、4～8、8～12、12～24、24～48、48～72 h的尿液，并記錄體積，-40 ℃保存待測。

1.4 色譜條件Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；檢測波長237 nm；流速1.0 mL·min-1；柱溫40 ℃；流動相為乙腈-0.2%H3PO4=30 ∶70；進(jìn)樣量20 μL。

1.5 對照品溶液的制備精密稱取水楊酸對照品10.8 mg于10 mL量瓶中，甲醇定容，得1.08 g·L-1的水楊酸儲備液。精密稱取非那西丁對照品10.2 mg于10 mL量瓶中，甲醇定容，得1.02 g·L-1的非那西丁儲備液。精密移取適量用甲醇稀釋成102 mg·L-1的非那西丁內(nèi)標(biāo)溶液。

1.6 尿液樣品處理取尿樣1 mL，加入內(nèi)標(biāo)(102 mg·L-1)20 μL，1 mol·L-1鹽酸500 μL，旋渦1 min，加入乙酸乙酯4 ml，振蕩5 min，4 000 r·min-1離心10 min。吸取上清液，置于離心濃縮儀45 ℃揮干，加100 μL 50%甲醇復(fù)溶，旋渦1 min，12 000 r·min-1離心10 min，取上清20 μL進(jìn)樣。

1.7 方法學(xué)考察按生物樣品分析的相關(guān)要求，考察專屬性、線性范圍、定量限、精密度、準(zhǔn)確度、提取回收率和樣品穩(wěn)定性。

2 結(jié)果

2.1 方法學(xué)考察上述條件下，水楊酸、內(nèi)標(biāo)的保留時間分別約為5.22、4.12 min。各色譜峰峰形良好，無雜峰干擾，基線平穩(wěn)。

水楊酸在0.42～54 mg·L-1范圍內(nèi)線性良好，定量限為0.42 mg·L-1。

按“1.6”項下制備水楊酸低、中、高3個濃度(尿液濃度為0.84、6.75、27 mg·L-1)的質(zhì)控樣品，進(jìn)行提取回收率、精密度和準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性試驗(yàn)。結(jié)果表明，水楊酸低、中、高3個濃度下的回收率分別為82.8%±3.2%、87.3%±5.2%和84.6%±4.5%；其日內(nèi)、日間準(zhǔn)確度分別為95.3%～102.5%(RSD≤6.8%，n=5)和93.1%～108.4%(RSD≤8.8%，n=15)；經(jīng)處理后的尿液樣品室溫放置24 h后水楊酸尿藥濃度的RSD均小于8.83%，-40 ℃保存28 d的RSD均小于9.12%，經(jīng)過3個凍融周期后的RSD均小于7.39%，以上結(jié)果均符合生物樣品的測定要求。

2.2 大鼠尿液中水楊酸累積排泄百分率取不同時間段的尿樣，按“1.6”項下方法操作，計算水楊酸的排泄量及累積排泄百分率。

SingleadministrationgroupCombinedadministrationgroupMeanurinaryexcretion/μg0～4h41.72±17.9695.80±26.774～8h82.38±8.92103.74±16.778～16h87.83±22.46144.06±26.1916～24h55.03±21.73104.26±11.0424～48h25.06±5.7527.66±5.3948～72h6.88±1.3810.22±3.79Cumulativeurineexcretionrate/%0～72h15.57±4.5225.30±5.41*T12/h8.27±0.456.79±0.20*

*P<0.05vssingle administration group

3 討論

水楊酸的蛋白結(jié)合率高達(dá)80%～90%，而DI中含有咖啡酸、綠原酸等酚酸類成分[9]，化學(xué)結(jié)構(gòu)與水楊酸相似，故其蛋白結(jié)合位點(diǎn)與水楊酸可能相同。大鼠給予DI后，酚酸類化合物可和血液中的血漿蛋白結(jié)合，抑制了后續(xù)吸收的水楊酸和血漿蛋白的結(jié)合，使大鼠體內(nèi)游離水楊酸增多，加快水楊酸從大鼠體內(nèi)排出，但確切的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

[1] Rafferty M, Walters M R, Dawson J. Anti-platelet therapy and aspirin resistance-clinically and chemically relevant?[J].CurrMedChem, 2010, 17(36): 4578-86.

[2] Fitzgerald R, Pirmohamed M. Aspirin resistance: effect of clinical, biochemical and genetic factors[J].PharmacolTher, 2011, 130(2): 213-25.

[3] 張 凱. 脈絡(luò)寧合用阿司匹林治療重癥缺血性腦卒中療效觀察[J]. 中華醫(yī)藥雜志, 2003, 3(8): 478-9.

[3] Zhang K. Efficacy of Mailuoning and aspirin in acute ischemic stroke[J].ChinJMed, 2003, 3(8): 478-9.

[4] 李 明, 趙高峰. 燈盞細(xì)辛注射液聯(lián)合拜阿司匹林治療急性腦梗死50例療效觀察[J]. 中國中醫(yī)急癥, 2010, 19(8): 1314-5.

[4] Li M, Zhao G F. 50 acute cerebral infarction cases treated by Dengzhanxixin injection combined with Bayaspirin[J].JEmergTraditlChinMed, 2010, 19(8): 1314-5.

[5] 周燕文, 陳 麗, 蘭聰賢. 人血漿中水楊酸的測定及阿司匹林的人體藥物動力學(xué)研究[J]. 華西藥學(xué)雜志, 2008, 23(5): 572-4.

[5] Zhou Y W, Chen L, Lan C X. Determination of salicylic acid in plasma by HPLC- FLU and pharmacokinetics of aspirin in healthy volunteers[J].WestChinJPharSci, 2008, 23(5): 572-4.

[6] 陳衛(wèi)東, 呂雄文,李 俊, 等. 卡托普利和低劑量阿司匹林在犬體內(nèi)的藥動學(xué)相互作用研究[J]. 中國藥學(xué)雜志, 2005, 40(9): 696-8.

[6] Chen W D, Lü X W, Li J, et al. Pharmacokinetics interaction of captopril and low-dosage aspirin in dog[J].ChinPharmJ, 2005, 40(9): 696-8.

[7] 董素琴. 常量阿斯匹林治療風(fēng)濕性疾病致水楊酸中毒[J]. 甘肅醫(yī)藥, 1994, 13(4): 229-30.

[7] Dong S Q. Salicylic acid poisoning of constant aspirin for treating rheumatoid disease[J].GansuMedJ, 1994, 13(4): 229-30.

[8] 滑吉美. 水楊酸中毒的尿液監(jiān)測方法[J]. 藥物分析雜志, 1994, 14(6): 46-7.

[8] Hua J M. Monitoring method for salicylic acid poisoning in urine[J].JPharmAnal, 1994, 14(6): 46-7.

[9] 周 玲, 居文政, 劉子修, 等. 燈盞細(xì)辛注射液多成分血漿蛋白結(jié)合率測定[J]. 中國藥理學(xué)通報, 2011, 27(5): 719-22.

[9] Zhou L, Ju W Z, Liu Z X, et al. Determination of plasma protein binding rate of multicomponent in Dengzhanxixin injection[J].ChinPharmacolBull, 2011, 27(5): 719-22.

HPLC studies on effect of Dengzhanxixin injection on excretion of salicylic acid in rats

DAI Guo-liang1, LI Chang-yin1, SUN Bing-ting2, DING Kang3, LIU Shi-jia1, JU Wen-zheng1

(1.DeptofClinicalPharmacology,AffiliatedHospitalofNanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanjing210029,China; 2.CollegeofPharmacy,NanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanjing210029,China; 3.DeptofEmergency,theThirdAffiliatedHospitalofNanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanjing210001,China)

水楊酸；燈盞細(xì)辛注射液；阿司匹林；尿排泄；累積排泄率；高效液相色譜；大鼠

salicylic acid; Dengzhanxixin injection; aspirin; urinary excretion; cumulative excretion rate; HPLC; rat

時間：2015-3-16 15:41 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20150316.1541.030.html

2014-11-21,

2015-02-26

國家科技部“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(No 2012ZX09303009-002);江蘇省中醫(yī)藥領(lǐng)軍人才(No LJ200906);江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項目(2010)

戴國梁 (1988-)，男，碩士，研究方向:中藥臨床藥代動力學(xué), E-mail:daiguoliangdgl@163.com; 居文政 (1965-)，男，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向:中藥臨床藥代動力學(xué)，通訊作者，Tel：025-86617141-60310，E-mail:wzhju333@163.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2014.04.030

A

1001-1978(2015)04-0591-02

R-332；R282.71；R446.12；R969.1；R972.7