金葉女貞果實(shí)花青素抗炎鎮(zhèn)痛的作用機(jī)制*

王 靜， 王建安， 姜玉新， 周萍萍， 王海華Δ

(1. 皖南醫(yī)學(xué)院生理教研室， 蕪湖 241002； 2. 濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院， 山東 日照 276826)

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金葉女貞果實(shí)花青素抗炎鎮(zhèn)痛的作用機(jī)制*

王 靜1， 王建安2， 姜玉新1， 周萍萍1， 王海華1Δ

(1. 皖南醫(yī)學(xué)院生理教研室， 蕪湖 241002； 2. 濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院， 山東 日照 276826)

目的：研究金葉女貞果實(shí)花青素抗炎鎮(zhèn)痛的作用，為進(jìn)一步開發(fā)新藥提供理論依據(jù)。方法：實(shí)驗(yàn)動物共240只，分為6項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)40只，分為5組(n=8)：生理鹽水對照組，阿司匹林對照組，花青素高、中、低劑量組。通過小鼠熱板法和醋酸扭體法觀察花青素鎮(zhèn)痛作用；通過二甲苯至耳廓腫脹法、腹腔毛細(xì)血管通透性及棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn)觀察花青素的抗炎作用。測定小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、總抗氧化能力(T-AOC)和前列腺素E2(PGE2)水平和小鼠肝臟勻漿的SOD、T-AOC 及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)酶活力，觀察肝臟組織學(xué)變化。結(jié)果：中、高濃度的花青素能提高小鼠痛閾，減少扭體次數(shù)；花青素處理組小鼠血清SOD活性增高，NO和PGE2含量降低。高濃度花青素可抑制小鼠耳廓腫脹、腹腔毛細(xì)血管通透性的增加和肉芽腫增生，同時提高血清SOD和T-AOC活性，降低血清PGE2含量。肝臟SOD、T-AOC、GSH-PX酶活力有所提高，肝臟組織學(xué)切片在各組中未見明顯變化。結(jié)論：金葉女貞果實(shí)花青素具有抗炎鎮(zhèn)痛作用，其機(jī)制可能與提高小鼠抗氧化能力，減少NO和炎性因子PGE2的生成有關(guān)，在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)連續(xù)給藥7 d對肝臟無明顯損傷作用。

金葉女貞；花青素；抗炎；鎮(zhèn)痛；小鼠

花青素是一類廣泛存在于高等植物的果實(shí)、花、莖等器官中的黃酮類化合物， 已有研究發(fā)現(xiàn)花青素具有抗氧化、抗炎、抑菌、抗衰老、抗癌作用以及對肝臟、心腦血管和視力具有保護(hù)作用[1-3]；但是花青素的鎮(zhèn)痛作用少有報(bào)道。而炎癥與疼痛常是相伴而行，花青素是否在發(fā)揮抗炎作用的同時起到鎮(zhèn)痛的作用值得思考。目前用于食品添加及藥用研究的天然花青素主要集中于藍(lán)莓、葡萄籽、紫薯等[4-7]。金葉女貞(ligustrum vicaryi )為木犀科女貞屬半綠小灌木，被譽(yù)為“金玉滿堂”，其核果呈紫黑色，含豐富的天然色素——花青素，是極具有開發(fā)價值的天然色素資源[8, 9]。本研究擬用金葉女貞果實(shí)花青素來探索花青素的抗炎鎮(zhèn)痛作用，并觀察用藥期間是否對肝臟產(chǎn)生毒副作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物及分組

SPF級昆明小鼠240只，6～8周齡，體重18～22 g，購于蘇州愛爾麥特科技有限公司(許可證號：SCXK蘇2009-0001)，共分為6項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)40只，隨機(jī)分為5組(n=8)：每天早晨8∶00～9∶00對各組小鼠灌胃給藥，給予0.2 ml花青素(90 mg/kg、30 mg/kg及10 mg/kg)分別為花青素高濃度組(high-concentration anthocyanin group, HA)；花青素中濃度組(medium-concentration anthocyanin group, MA)及花青素低濃度組(low-concentration anthocyanin group, LA)，阿司匹林組對照組(aspirin control group, Asp)0.2 ml阿司匹林(100 mg/kg)小鼠灌胃，生理鹽水對照組(normal saline control group, NS)小鼠灌胃0.2 ml生理鹽水，其他步驟相同，連續(xù)7 d。

1.2 主要儀器與試劑

YLB-6B 小鼠熱板儀(成都泰盟科技有限公司)，紫外分光光度計(jì)(UV-3200PCS)，Model-680型酶標(biāo)儀(美國BIO-RAD公司)。阿司匹林為AstraZeneca公司產(chǎn)品(批號：1304031)，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、前列腺素E2(prostaglandin E2, PGE2)、總抗氧化能力(total antioxidant capacity, T-AOC)和谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)試劑盒購自南京建成生物科技公司。

1.3 花青素的提取與純化

取金葉女貞果實(shí)于50℃烘箱中干燥至恒重，粉碎過80目篩，以75%的乙醇提取，提取液抽濾以除去濾渣得粗提液，粗提液經(jīng)DM130大孔樹脂柱進(jìn)行吸附，待吸附完全，以蒸餾水沖柱和石油醚萃取以除去樹脂柱中的糖和脂類，即得去糖去脂花青素。將去糖去脂花青素溶液置于凍干機(jī)中凍干，最后得到純花青素粉末，使用時溶于生理鹽水中。

1.4 花青素的鎮(zhèn)痛作用

1.4.1 熱板法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn) 為避免雄性小鼠陰囊熱板引起刺激反應(yīng)，故取雌性實(shí)驗(yàn)小鼠，置于55℃±0.5℃智能熱板儀的金屬板上，測定各鼠從放在金屬板上至出現(xiàn)舔后足所需時間(s)作為該鼠的基礎(chǔ)痛閾值(測量2次取平均痛閾)，選取基礎(chǔ)痛閾在(5～30)s的40只雌鼠參加試驗(yàn)，每組8只，分組如上1.1。末次給藥后分別在給藥后15 min、30 min、60 min、120 min、 240 min測小鼠痛閾。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后眼眶取血，3 000 r/min離心10 min，取血清檢測NO和PGE2含量及SOD活性。

1.4.2 醋酸扭體法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)小鼠40只，雌雄各半，每組8只，分組及給藥同1.1。末次給藥后1 h，腹腔注射新鮮配制的0.8%冰醋酸溶液0.2 ml，觀察小鼠產(chǎn)生“扭體”反應(yīng)次數(shù)，以小鼠腹部內(nèi)凹、軀干與后肢伸張、臀部高起、后肢伸長等行為反射為1次完整扭體反應(yīng)。觀察15 min內(nèi)扭體次數(shù)，計(jì)算扭體反應(yīng)抑制率。抑制率(%) = (對照組扭體數(shù)-給藥組扭體數(shù))/對照組扭體數(shù)×100%。

1.5 花青素的抗炎作用

1.5.1 小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)小鼠40只，雌雄各半，每組8只，分組及給藥同1.1。末次給藥后30 min，各小鼠尾靜脈注射質(zhì)量濃度0.5%的伊文思蘭溶液0.2 ml，隨即腹腔注射質(zhì)量濃度0.6%的醋酸溶液0.2 ml，20 min后脫頸處死，剪開腹部皮膚肌肉，用6 ml生理鹽水分3次洗滌腹腔，最后合并洗液使總量達(dá)5 ml，將洗液3 000 r/min離心15 min，取上清液于590 nm測定OD值。

1.5.2 小鼠棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)小鼠40只，雌雄各半，每組8只。乙醚麻醉小鼠，在小鼠的背部正中央去毛并用75%的乙醇消毒，然后用手術(shù)剪刀開0.5 cm 長的小口，用眼科鑷子將質(zhì)量為10 mg的滅菌棉球從小切口植入皮下，并在切口上撒適量的青霉素以防止傷口感染，之后用手術(shù)針縫合小鼠皮膚。然后隨機(jī)分成5組，給藥同上1.1。手術(shù)當(dāng)天開始，灌胃給藥連續(xù)7 d。末次給藥后5 h眼眶取血，3 000 r/min離心10 min，比色法檢測各組小鼠血清中SOD活性和NO含量，ELISA法檢測血清PGE2含量。用剪刀和鑷子打開原切口，將棉球連同周圍結(jié)締增生組織一起取出，剔除脂肪組織，放人烘箱中80℃烘干2 h，稱質(zhì)量。將稱得的質(zhì)量減去棉球原質(zhì)量即得肉芽腫的質(zhì)量。抑制率(%) = (對照組肉芽腫質(zhì)量-給藥組肉芽腫質(zhì)量)/對照組肉芽腫質(zhì)量×100%。

1.5.3 二甲苯至小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)小鼠40只，雌雄各半，每組8只，分組及給藥同1.1。末次給藥后1 h，將40 μl二甲苯均勻涂于小鼠右耳兩側(cè)，至炎1 h后脫錐處死，沿耳廓基線剪下雙耳，用打孔器在左、右兩耳同一位置打下圓耳片，稱重，以左右耳片重量差為腫脹度。腫脹抑制率%=(對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/對照組平均腫脹度×100%

1.6 花青素對肝臟功能的影響

實(shí)驗(yàn)小鼠40只，雌雄各半，每組8只，分組及給藥同1.1。末次給藥后5 h，動物脫頸處死，取0.2 g肝臟制備10%的肝臟勻漿，用來測定其中SOD、T-AOC 和GSH-Px活性；同時留取部分肝臟用10%甲醛固定，觀察其形態(tài)學(xué)變化。

1.7 實(shí)驗(yàn)方法

比色法測定血清和肝臟勻漿的SOD、NO、T-AOC、GSH-Px，ELISA法檢測血清PGE2含量，具體方法按試劑盒說明進(jìn)行。

1.8 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果

2.1 花青素的鎮(zhèn)痛作用

2.1.1 花青素對小鼠熱板法痛閾的影響 各組小鼠在實(shí)驗(yàn)前基礎(chǔ)痛閾沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，給藥7 d后，NS組痛閾沒有出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與NS組相比較，Asp組在給藥60 min后出現(xiàn)顯著差異(P<0.01)，并一直持續(xù)至240 min；HA組在給藥15 min和30 min明顯提高痛閾(P<0.05)，給藥60 min至240 min出現(xiàn)顯著差異(P<0.01)；MA組在給藥后30 min與NS組出現(xiàn)差異(P<0.05)，在給藥60 min至240 min出現(xiàn)顯著差異(P<0.01)；LA組在給藥60 min和120 min兩個時間點(diǎn)與NS組有差異(P<0.05)。與Asp組相比，HA組在給藥15 min、30 min、240 min效果超過Asp組(P<0.05)，MA組與Asp組始終沒有明顯差異，LA組的效果在給藥120 min、240 min時低于Asp組(P<0.05，表1)。

2.1.2 花青素對小鼠腹腔注射醋酸扭體反應(yīng)的影響 Asp組與花青素各組均減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)(P<0.05)，HA組與NS組達(dá)到顯著差異(P<0.01)，且效果超過Asp組(P<0.05)。MA組和LA組與NS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，與Asp組沒有差異(表2)。

Tab. 1 Influence of anthocyanins on the pain threshold of mice based on hot plate ±s，n=8)

NS： Normal saline； Asp： Aspirin； HA： High-concentration anthocyanin； MA： Medium-concentration anthocyanin； LA： Low-concentration anthocyanin

*P<0.05，**P<0.01vsNS group;#P<0.05vsAsp group

GroupDose(mg/kg)Timesoftwistbodyin15minInhibitionratio(%)NS38.67±5.61Asp10021.67±3.61*43.96HA9014.83±4.75**#61.65MA3022.83±2.64*#40.96LA1024.36±8.09*37.01

NS： Normal saline； Asp： Aspirin； HA： High-concentration anthocyanin； MA： Medium-concentration anthocyanin； LA： Low-concentration anthocyanin

*P<0.05，**P<0.01vsNS group;#P<0.05vsAsp group

2.1.3 花青素對小鼠鎮(zhèn)痛血清SOD,NO及PGE2的影響 與NS組比較，Asp組和MA組提高小鼠血清SOD活性(P<0.05)，HA組效果達(dá)到顯著差異(P<0.01)，且HA組效果超過Asp組(P<0.05)；LA組與NS組沒有明顯差異。與NS組比較，Asp組、MA組和LA組均降低小鼠血清NO含量和PGE2含量(P<0.05)，HA組達(dá)到顯著差異(P<0.01)，且在降低NO含量的效果上超過Asp組(P<0.05，表3)。

GroupDose(mg/kg)SOD(U/ml)NO(μmol/L)PGE2(pg/ml)NS129.10±20.8238.64±3.25217.55±23.06Asp100150.43±23.08*29.56±6.32*168.24±18.62*HA90169.95±7.39**#24.22±2.56**#158.96±9.52**MA30155.24±19.62*30.54±4.32*172.55±12.55*LA10138.55±9.8132.22±5.21*185.96±15.22*

NS： Normal saline； Asp： Aspirin； HA： High-concentration anthocyanin； MA： Medium-concentration anthocyanin； LA： Low-concentration anthocyanin

*P<0.05，**P<0.01vsNS group;#P<0.05vsAsp group

2.2 花青素的抗炎作用

2.2.1 花青素對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響 與NS組相比，HA組、MA組對醋酸所致小鼠毛細(xì)血管通透性增高有抑制作用(P<0.05)，且HA組的抑制效果超過Asp組(P<0.05)。

GroupDose(mg/kg)ODvalueNS0.288±0.106Asp1000.238±0.091HA900.138±0.034*#MA300.184±0.015*LA100.286±0.047

NS： Normal saline； Asp： Aspirin； HA： High-concentration anthocyanin； MA： Medium-concentration anthocyanin； LA： Low-concentration anthocyanin

*P<0.05vsNS group;#P<0.05vsAsp group

2.2.2 花青素對小鼠棉球肉芽腫增生的影響 與NS組相比，Asp組和HA組對小鼠棉球肉芽腫的抑制效果達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而MA組和LA組結(jié)果與NS組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

GroupDose(mg/kg)Dryweightofgranuloma(mg)Inhibitionratio(%)NS19.17±2.85Asp10014.03±4.12*26.81%HA9014.87±3.27*22.43%MA3017.38±4.089.34%LA1018.16±5.835.27%

NS： Normal saline； Asp： Aspirin； HA： High-concentration anthocyanin； MA： Medium-concentration anthocyanin； LA： Low-concentration anthocyanin

*P<0.05vsNS group

2.2.3 花青素對二甲苯至小鼠耳廓腫脹程度的影響 與NS組相比，Asp和花青素各組均能抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹(P<0.05)，且HA組和Asp組的抑制作用達(dá)顯著效果(P<0.01)。

GroupDose(mg/kg)Swellingdegree(mg)Inhibitionratio(%)NS4.78±2.24Asp1002.55±1.87**46.65%HA902.62±1.21**45.19%MA303.54±1.17*25.94%LA103.41±1.24*28.66%

NS： Normal saline； Asp： Aspirin； HA： High-concentration anthocyanin； MA： Medium-concentration anthocyanin； LA： Low-concentration anthocyanin

*P<0.05，**P<0.01vsNS group

2.2.4 花青素對小鼠抗炎實(shí)驗(yàn)血清SOD、T-AOC活性及PGE2含量的影響 與NS組比較，Asp組和花青素各組均提高小鼠血清中SOD活性(P<0.05)，且各組效果沒有差異；T-AOC活性也明顯提高(P<0.05)，HA組的效果超過Asp組(P<0.05)。與NS組比較，Asp組、HA組和MA組的PGE2含量顯著降低(P<0.01，P<0.05，表7)。

GroupDose(mg/kg)SOD(U/ml)T-AOC(U/ml)PGE2(pg/ml)NS158.79±32.654.85±0.88165.08±38.86Asp100190.65±21.47*6.07±1.16*118.91±17.77**HA90195.64±20.53*7.75±1.60*#112.85±21.38**MA30209.95±10.79*6.46±2.27*127.97±20.36*LA10204.68±18.27*6.14±2.36*144.68±22.69

NS： Normal saline； Asp： Aspirin； HA： High-concentration anthocyanin； MA： Medium-concentration anthocyanin； LA： Low-concentration anthocyanin

*P<0.05，**P<0.01vsNS group;#P<0.05vsAsp group

2.3 花青素對小鼠肝功能的影響

2.3.1 花青素對各組小鼠肝臟酶學(xué)變化的影響 與NS組比較，只有HA組小鼠肝臟勻漿的SOD和GSH-Px酶活力活性明顯提高(P<0.05)；各濃度花青素組在提高T-AOC中都達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且HA組達(dá)到顯著差異(P<0.01)。

GroupDose(mg/kg)SOD(U/mgprot)T-AOC(U/mgprot)GSH-Px(U/mgprot)NS48.76±10.950.478±0.117630.17±152.43Asp10058.35±4.290.632±0.246*650.86±52.38HA9069.95±9.15*0.703±0.085**710.21±116.40*MA3052.82±5.350.609±0.047*631.61±46.87LA1060.47±3.350.602±0.287*652.19±39.19

NS： Normal saline； Asp： Aspirin； HA： High-concentration anthocyanin； MA： Medium-concentration anthocyanin； LA： Low-concentration anthocyanin

*P<0.05，**P<0.01vsNS group

2.3.2 花青素對小鼠肝臟形態(tài)學(xué)變化的影響 與NS組一樣，阿司匹林和花青素連續(xù)灌胃7天后，各組肝細(xì)胞輪廓清晰，核圓而大，著色深，居細(xì)胞中央，細(xì)胞質(zhì)均勻，沒有出現(xiàn)細(xì)胞破裂，胞質(zhì)溶解，體積變小等毒副現(xiàn)象(圖1)。

3 討論

炎癥是機(jī)體對損傷刺激所發(fā)生的防御反應(yīng)，分為急性與慢性，急性炎癥表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛，毛細(xì)血管通透性增加等；慢性炎癥持續(xù)時間長，表現(xiàn)為小血管及結(jié)締組織增生等[10]。疼痛是機(jī)體受到傷害性刺激后所產(chǎn)生的一類保護(hù)性反應(yīng)，常伴有恐懼、緊張不安等情緒活動，也是一種預(yù)警機(jī)制，以防止機(jī)體遭受進(jìn)一步損傷，是臨床上最常見的問題之一。疼痛與炎癥常同時發(fā)生，最常用的鎮(zhèn)痛藥也是抗炎藥如非甾體類抗炎藥(如復(fù)方阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬等)及阿片類藥物(如哌替啶、嗎啡、可待因等)，雖然這兩類鎮(zhèn)痛藥都有較好療效，但均有不同程度的不良反應(yīng)，如非甾體類抗炎藥有胃腸道反應(yīng)，阿片類藥物有不同程度的成癮性，這使其在臨床上的應(yīng)用受到了很大的限制[11-13]。因此，尋找副作用和依賴性小的抗炎鎮(zhèn)痛中藥十分重要。

Fig. 1 Morphological changes of liver tissue in each group(HE ×400) NS： Normal saline； Asp： Aspirin； HA： High-concentration anthocyanin； MA： Medium-concentration anthocyanin； LA： Low-concentration anthocyanin

花青素的抗氧化、抗炎作用已得到證實(shí)[14-16]。本研究結(jié)果也顯示，金葉女貞果實(shí)花青素能抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹；抑制醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的增加；抑制棉球所致肉芽腫增生，表明金葉女貞果實(shí)花青素對急性炎癥和慢性炎癥均有一定的對抗效應(yīng)。這種對抗作用可能與其增強(qiáng)小鼠的抗氧化作用(提高了SOD和T-AOC酶活性)和降低炎性因子PGE2的生成有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)金葉女貞果實(shí)花青素能使小鼠熱痛閾明顯延長，醋酸致小鼠扭體次數(shù)也減少，提示花青素具有與阿司匹林類似的鎮(zhèn)痛作用。鎮(zhèn)痛機(jī)制可能與花青素提高小鼠抗氧化能力增強(qiáng)血清SOD活性，減少炎性因子NO和PGE2的生成有關(guān)。SOD是體內(nèi)清除氧自由基的重要酶，能減少自由基對細(xì)胞的破壞，常用來反映體內(nèi)自由基損害程度[17]。NO在炎癥和痛覺中都起到重要作用：NO促進(jìn)炎癥反應(yīng)的作用包括使血管舒張、形成水腫和局部紅斑、增加炎性滲出等，NO作為中樞神經(jīng)遞質(zhì)或第二信使可以直接或間接的激活瞬時感受器電位離子通道蛋白(Transient receptor potential ion channel protein, TRPs)，起到痛覺增敏效應(yīng)[18-21]。本研究中花青素的抗炎與鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)小鼠血清中PGE2含量都有所降低，PGE2是一類活性很強(qiáng)的炎癥介質(zhì)，在炎癥組織中可與其它炎癥介質(zhì)起協(xié)調(diào)作用，加劇炎癥反應(yīng)，同時PGE2可以致痛，還有疼痛增敏作用，另PGE2的產(chǎn)生常伴有大量氧自由基的生成，繼而引起細(xì)胞損傷[22,23]。肝臟是藥物代謝、轉(zhuǎn)化的主要臟器，又是機(jī)體代謝、免疫的主要器官。本研究中發(fā)現(xiàn)花青素連續(xù)給藥7 d，肝臟組織結(jié)構(gòu)未見明顯變化，說明實(shí)驗(yàn)濃度的花青素對小鼠沒有產(chǎn)生毒副作用；從生化指標(biāo)結(jié)果看，花青素可以增強(qiáng)肝臟的抗氧化能力(提高SOD、T-AOC和GSH-Px酶活性)。

綜上所述，本研究推測金葉女貞果實(shí)花青素通過增強(qiáng)小鼠的抗氧化能力及減少炎性因子的釋放來發(fā)揮抗炎效應(yīng)，進(jìn)而達(dá)到鎮(zhèn)痛作用，且在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)沒有引起肝臟組織學(xué)變化。但是關(guān)于這種抗炎鎮(zhèn)痛作用的最佳劑量、用藥時間及具體的分子機(jī)制，以及對其他臟器是否有副作用有待于進(jìn)一步研究。

[1] Cooper-Driver GA. Contributions of jeffrey harborne and coworkers to the study of anthocyanins [J].Phytochemistry, 2001, 56(3): 229-236.

[2] 徐春明, 龐高陽, 李 婷. 花青素的生理活性研究進(jìn)展[J]. 中國食品添加劑, 2013, (3): 205-210.

[3] Lule SU, Xia W. Food phenolics, pros and cons: a review[J].FoodReviewsInternational, 2005, 21(4): 367-388.

[4] 龔 頻, 陳福欣, 金 賽, 等. 不同給藥方式下藍(lán)莓花青素的鎮(zhèn)痛作用研究[J]. 食品研究與開發(fā), 2013, 34(24): 186-188.

[5] 王 靜, 馬養(yǎng)民, 逮文靜. 藍(lán)莓花青素的純化及鎮(zhèn)痛、抗炎藥效學(xué)研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2013, (5): 338-340.

[6] 高 杉, 黃春霞, 黃玲玲, 等. 低聚葡萄籽原花青素對異丙腎上腺素誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大的影響[J]. 中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué), 2012, 17(5): 497-501.

[7] 孫 健, 王洪云, 鈕福祥, 等. 不同品種紫甘薯花青素含量及抗氧化活性差異[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué), 2013, 41(12): 323-324.

[8] 王建安, 王慧云, 李艷芝, 等. 金葉女貞果實(shí)中齊墩果酸的提取與測定[J]. 食品工業(yè)科技, 2010, 31(11): 301-303.

[9] 王建安, 宛光輝, 李艷芝, 等. 超聲法提取金葉女貞果實(shí)中多糖工藝的研究[J]. 南京師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版, 2012, 35(4): 73-75.

[10]宋媛媛, 李 媛, 張洪泉. 丁香苷抗炎鎮(zhèn)痛作用及部分機(jī)制研究[J]. 中國野生植物資源， 2010, 29(4): 27-30.

[11]閔志雪, 黃 璐, 孫 瑤, 等. 皖南地區(qū)眼鏡蛇毒活性組分鎮(zhèn)痛效應(yīng)的初步研究[J]. 中國病理生理雜志, 2013, 29(1): 150-154.

[12]王海華, 張根葆, 閔志雪, 等. 皖南地區(qū)眼鏡蛇鎮(zhèn)痛組分對大鼠炎性痛作用機(jī)制探討[J]. 中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué), 2013, 18(10): 1093-1099.

[13]蘭忠平, 陳雅慧, 顧 楠, 等. 脊髓水平給予胍丁胺對鞘內(nèi)嗎啡鎮(zhèn)痛的影響[J]. 中國應(yīng)用生理學(xué)雜志, 2014, 30(3)： 197-198.

[14]王榮姣, 李昭華, 黃紅林, 等. 北陸花青素的抗氧化作用[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011， 39(12): 7061-7063.

[15]王少朋, 劉海英, 楊曉翠, 等. 菊花花青素的粗提及其對DPPH·的清除作用[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2010, 19(9):109-113.

[16]余 晶, 鮑中英, 徐玉敏, 等. 花青素抗氧化損傷及細(xì)胞凋亡的作用研究[J]. 中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志, 2009, 19(1): 24-26.

[17]張祥根, 王國華, 李永財(cái), 等. 高壓氧療法對創(chuàng)傷性腦損傷大鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)及促/抗炎細(xì)胞因子水平的影響[J]. 中國應(yīng)用生理學(xué)雜志， 2010, 26(3): 373-375.

[18]Hu HZ, Xiao R, Wang C,etal. Potentiation of TRPV3 channel function by unsaturated fatty acids[J].JCellPhysiol, 2006, 208(1): 201-212.

[19]Yoshida T, Inoue R, Morii T,etal. Nitric oxide activates TRP channels by cysteine S-nitrosylation[J].NatChemBiol, 2006, 2(11): 596-607.

[20]賀正華, 郭曲練, 鄒望遠(yuǎn), 等. 鞘內(nèi)注射可樂定和氯胺酮對慢性神經(jīng)病理性疼痛大鼠的鎮(zhèn)痛效應(yīng)[J]. 中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版), 2007, 32(4): 702-705.

[21]劉凌云, 吳 迪, 李清君, 等. 甲醛炎性痛增強(qiáng)大鼠海馬NOS表達(dá)和NO生成[J]. 中國應(yīng)用生理學(xué)雜志, 2007, 23(1): 30-34.

[22]羅小文, 李佳川, 譚 睿, 等. 濕生扁蕾對小鼠抗炎鎮(zhèn)痛作用研究[J]. 中藥藥理與臨床, 2013, 29(1): 97-99.

[23]彭 丹. 復(fù)方黃柏散的鎮(zhèn)痛抗炎作用[J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2012, 32(14): 1108-1111.

The mechanism of anthocyanin to anti-inflammatory and analgesic from Ligustrum fruit

WANG Jing1, WANG Jian-an2, JIANG Yu-xin1, ZHOU Ping-ping1, WANG Hai-hua1Δ

(1. Department of Physiology, Wannan Medical College, Wuhu 241002； 2. College of Pharmacy, Jining Medical College, Rizhao 276826， China)

Objective: To provide a theoretical basis for the further development of new drugs, the analgesic and anti-inflammatory effects and the liver function in mice of anthocyanin from Ligustrum vicaryi were investigated. Methods: The 240 experimental mice were splitted equally for 6 kinds of experiments and 40 rats in each kind of experiment were divided into 5 groups (n=8)：normal saline control group (NS)；aspirin control group (Asp)；high-concentration anthocyanin group (HA)；medium-concentration anthocyanin group (MA)；low-concentration anthocyanin group (LA). The analgesia effect of anthocyanin at different concentration was determined by hot-plate test and acetic acid writhing test, and the anti-inflammatory effect of anthocyanin was performed by ear edema, abdomen capillary permeability and cotton granuloma. The activities of superoxide dismutase (SOD) and total antioxidant capacity(T-AOC) and the contents of nitric oxide (NO) and prostaglandin E2(PGE2) in blood serum were determined, and the activities of SOD, T-AOC and glutathione peroxidase (GSH-Px) in liver were measured, while the histological changes of liver tissue were observed. Results: The pain threshold of mice was enhanced and the times of twist body was decreased by medium-concentration and high-concentration anthocyanin. The activity of SOD was increased and the contents of NO and PGE2were reduced in blood serum. High-concentration anthocyanin inhibited the ear swelling , the increase of celiac capillary permeability and the granuloma hyperplasia, and increased the activities of SOD and T-AOC while decreased the content of PGE2. The activities of SOD, T-AOC, GSH-PX were increased in liver, but the morphology of liver tissues in each group had no significant changes. Conclusion: Anthocyanin of Ligustrum vicaryi has definite anti-inflammatory and analgesic effects, which is related to increasing the antioxidant capacity and decreasing the contents of NO and PGE2, and has not obvious damage to liver in the range of experimental concentration.

ligustrum vicaryi； anthocyanin; anti-inflammatory; analgesic; rats

國家自然科學(xué)基金(81172790)；安徽省自然科學(xué)研究重點(diǎn)基金(KJ2013A251)；皖南醫(yī)學(xué)院中青年基金(WK201507)；安徽省質(zhì)量工程項(xiàng)目(2013jyxm127)；日照市科技發(fā)展項(xiàng)目(2011SF006)

2015-01-26 【修回日期】2015-06-19

R965.2

A

1000-6834(2015)05-431-06

10.13459/j.cnki.cjap.2015.05.013

△【通訊作者】Tel: 0553-3932473; E-mail: wanghaihua9972@sina.com