鹽酸克林霉素棕櫚酸酯制劑的一致性評(píng)價(jià)研究*

黃 昕，張 超，林 鋒，周翠蘭，蘇薇薇，彭 維

(1.中山大學(xué)生命科學(xué)大學(xué)院，廣東廣州510275;2.廣州一品紅制藥有限公司，廣東廣州510760)

鹽酸克林霉素棕櫚酸酯是克林霉素的衍生物，體外無抗菌活性，在體內(nèi)經(jīng)酯酶水解形成克林霉素而發(fā)揮抗菌活性，主要作用于革蘭陽(yáng)性球菌和厭氧菌感染［1－2］。美國(guó)輝瑞公司的原研產(chǎn)品是干混懸劑，國(guó)內(nèi)廣州一品紅制藥有限公司的產(chǎn)品劑型為分散片，與原研產(chǎn)品干混懸劑相比具有服用方便、吸收快等特點(diǎn)。

國(guó)內(nèi)制劑與國(guó)外原研產(chǎn)品無論在原料來源還是制劑工藝上都有一定的差異，因此國(guó)家強(qiáng)制要求進(jìn)行一致性評(píng)價(jià)，以確保藥品的有效性與安全性。這項(xiàng)工作意義重大［3－5］，但尚處于發(fā)軔階段。筆者從有關(guān)物質(zhì)、溶出度分析入手，對(duì)國(guó)內(nèi)該產(chǎn)品與國(guó)外原研產(chǎn)品進(jìn)行了一致性評(píng)價(jià)研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

DionexUltimate3000 DGLC液相色譜儀 (配有DAD檢測(cè)器和VWD檢測(cè)器、雙三元梯度泵、在線脫氣裝置、自動(dòng)進(jìn)樣器);Chromeleon 6.8工作站;色譜柱1(Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C8，3 mm×150 mm，3.5 μm);色譜柱 2(Dionex Bonded Silica Products，C18，4.6 mm × 150 mm，3 μm);ZRS-8G溶出試驗(yàn)儀 (天津市天大天發(fā)科技有限公司);電子分析天平 (NewClassic MS，METTLER TOLEDO)。

甲醇 (色譜純，Burdick＆Jackson);乙腈(光譜純，Burdick＆Jackson);醋酸銨 (FOR HPLC，美國(guó)Fluka公司，17836－50G);十二烷基硫酸鈉 (分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠，20091103);丁二酸二辛酯磺酸鈉 (BioUltra，sigma，86139－50G);鹽酸 (分析純，廣州化學(xué)試劑廠，20110730);醋酸 (分析純，廣州化學(xué)試劑廠，20101001);醋酸鈉 (分析純，廣東光華化學(xué)試劑廠，20110507);氫氧化鈉 (分析純，廣東光華化學(xué)試劑廠，20090803);磷酸二氫鉀 (分析純，廣東光華化學(xué)試劑廠，20110901);超純水(美國(guó)Millipore公司，Simplicity SIMS00000);鹽酸克林霉素棕櫚酸酯對(duì)照品 (CAT.NO.1137005 USP ROCKVILLE，MD LOT H01037，以克林霉素計(jì)含595 μg/mg或w=59.5%);樣品1(鹽酸克林霉素棕櫚酸酯干混懸劑，75 mg/5 mL，美國(guó)輝瑞制藥有限公司，批號(hào)G63105);樣品2(鹽酸克林霉素棕櫚酸酯分散片，75 mg，廣州一品紅制藥有限公司，批號(hào)20130301);樣品3(鹽酸克林霉素棕櫚酸酯分散片，75 mg，廣州一品紅制藥有限公司，批號(hào)20130302);樣品4(鹽酸克林霉素棕櫚酸酯分散片，75 mg，廣州一品紅制藥有限公司，批號(hào)20130303)。

2 方法與結(jié)果

2.1 有關(guān)物質(zhì)檢查

2.1.1 色譜條件［1］用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑 (ZORBAX Eclipse XDB-C8，3×150 mm ，3.5 μm)，流動(dòng)相A為5 mmol/L醋酸銨溶液－乙腈 (50:50)，流動(dòng)相B為乙腈，液相色譜條件0～30 min(100% ～0%A);30～80 min(0%A);80～81 min(0%～100%A);81～90 min(100%A)進(jìn)行梯度洗脫。流速:0.4 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10 μL。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品細(xì)粉適量，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL中約含克林霉素5.7 mg溶液，濾過，作為供試品溶液;精密量吸取供試品溶液適量，用甲醇稀釋制成每1 mL中含克林霉素114 μg的溶液，作為對(duì)照溶液。取鹽酸克林霉素棕櫚酸酯對(duì)照品，精密稱定，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋成每1 mL中含克林霉素2.22 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.1.3 測(cè)定法 照高效液相色譜法 (中國(guó)藥典2010版二部附錄ⅤD)，在“2.1.1項(xiàng)”色譜條件下，取鹽酸克林霉素棕櫚酸酯對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

2.1.4 方法學(xué)考察

1)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。

在“2.1.1項(xiàng)”色譜條件下，取同一供試品溶液 (批號(hào)20130301)重復(fù)進(jìn)樣6次，理論塔板數(shù)、拖尾因子、分離度均符合要求。

2)專屬性試驗(yàn)。

分別采用1.0 mol/L鹽酸、0.015 mol/L氫氧化鈉、φ=3%雙氧水、高溫以及強(qiáng)光條件下對(duì)空白輔料和供試品 (批號(hào)20130301)進(jìn)行破壞，以驗(yàn)證方法的專屬性。結(jié)果表明，在1.0 mol/L鹽酸、0.015 mol/L氫氧化鈉、φ=3%雙氧水、高溫以及強(qiáng)光條件下，在“2.1.1項(xiàng)”液相色譜分析條件下降解產(chǎn)物均能與主成分鹽酸克林霉素棕櫚酸酯分離。

3)重復(fù)性試驗(yàn)。

在“2.1.1項(xiàng)”色譜條件下，對(duì)6份供試品溶液 (批號(hào)20130301)進(jìn)行重復(fù)性考察，結(jié)果各有關(guān)物質(zhì)峰面積的RSD均小于5%，表明方法重復(fù)性良好。

4)供試品穩(wěn)定性試驗(yàn)。

在“2.1.1項(xiàng)”色譜條件下，取供試品溶液(批號(hào) 20130301)，于 0、3、6、9、12、24、48 h分別進(jìn)樣，對(duì)樣品進(jìn)行穩(wěn)定性考察。結(jié)果各有關(guān)物質(zhì)峰面積RSD均小于5%，表明供試品穩(wěn)定性良好。

2.1.5 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果 采用峰面積歸一化法，計(jì)算各有關(guān)物質(zhì)相對(duì)含量，得到雜質(zhì)峰的相對(duì)含量結(jié)果，見圖1、圖2和表1。

圖1 國(guó)外原研鹽酸克林霉素棕櫚酸酯干混懸劑有關(guān)物質(zhì)色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram of the related substances of clindamycin palmitate hydrochloride original oral solution

圖2 鹽酸克林霉素棕櫚酸酯分散片有關(guān)物質(zhì)色譜圖Fig.2 HPLC chromatogram of the related substances of clindamycin palmitate hydrochloride dispersible tables

表1 各樣品中有關(guān)物質(zhì)相對(duì)百分含量(峰面積歸一化法)1)Table 1 Relative content of the related substances in each sample

檢測(cè)結(jié)果表明，國(guó)產(chǎn)分散片有關(guān)物質(zhì)種類及含量均低于國(guó)外原研產(chǎn)品。國(guó)外原研產(chǎn)品檢測(cè)到10種不同有關(guān)物質(zhì)，而3批國(guó)產(chǎn)分散片樣品僅檢測(cè)到5種不同有關(guān)物質(zhì)。峰號(hào)為4、7、8、9的有關(guān)物質(zhì)在國(guó)外原研產(chǎn)品與國(guó)內(nèi)產(chǎn)品中均能檢測(cè)到。根據(jù)LC－MS分析［1，6］:雜質(zhì) 4為克林霉素十酸酯;雜質(zhì)7為克林霉素十四酸酯;雜質(zhì)8為克林霉素棕櫚酸酯異構(gòu)體;雜質(zhì)9為克林霉素B棕櫚酸酯。

2.2 溶出度分析

2.2.1 色譜條件 用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑 (Dionex Silica Products C18，4.6 mm×150 mm，3 μm)，流動(dòng)相:醋酸銨溶液 (取醋酸銨3.85 g，加φ=5%醋酸溶液溶解并稀釋至100 mL)－w=0.21%丁二酸二辛酯磺酸鈉甲醇溶液 (20∶480);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)器:示差折光檢測(cè)器;進(jìn)樣量:50 μL。

2.2.2 溶出介質(zhì)的選擇 考察2種制劑分別在pH 1.0鹽酸溶液、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液、w=0.4%SDS溶液作為溶出介質(zhì)下的溶出情況。30 min內(nèi)，2種制劑在pH 1.0鹽酸溶液、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出度均小于20%。故選用w=0.4%SDS溶液作為溶出介質(zhì)。

2.2.3 溶出方法學(xué)考察

1)專屬性試驗(yàn)。

按分散片處方比例，制成不含主藥的空白樣品，取適量 (約相當(dāng)于1片的用量)，置100 mL容量瓶中，加w=0.4%SDS溶液至刻度，超聲振蕩，搖勻，濾過，取濾液照“2.2.1項(xiàng)”的色譜條件測(cè)定，結(jié)果表明輔料對(duì)測(cè)定無干擾，方法專屬性良好。

2)線性及線性范圍。

精密稱取鹽酸克林霉素棕櫚酸酯對(duì)照品25.13 mg，用w=0.4%十二烷基硫酸鈉溶解并稀釋成含克林霉素 29.10、43.65、58.20、72.75、87.30、101.85和 116.40 μg/mL系列質(zhì)量濃度溶液，按“2.2.1項(xiàng)”色譜條件測(cè)定。采用最小二乘法擬合，得到回歸方程:y=0.0091x－0.0465，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。試驗(yàn)表明，對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度在29.10～116.40 μg/mL的范圍內(nèi)與峰面積有良好線性關(guān)系。

3)穩(wěn)定性試驗(yàn)。

取鹽酸克林霉素棕櫚酸酯對(duì)照品溶液適量，溶于w=0.4%SDS溶液，于0、1、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，結(jié)果各樣品測(cè)得的RSD為0.66%，表明樣品在測(cè)定的24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

4)回收率試驗(yàn)。

分別精密稱取相當(dāng)于樣品標(biāo)示量的50%、80%和100%的鹽酸克林霉素棕櫚酸酯對(duì)照品及相應(yīng)量的空白輔料，加w=0.4%SDS溶液適量，振搖使鹽酸克林霉素棕櫚酸酯溶解，并加w=0.4%SDS溶液至規(guī)定質(zhì)量濃度，搖勻，濾過，照“2.2.1項(xiàng)”色譜條件測(cè)定。樣品平均回收率為100.21%，RSD為1.23%。

2.3.4 溶出度測(cè)定結(jié)果 照溶出度測(cè)定法 (中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅩC第二法)，以 w=0.4%十二烷基硫酸鈉溶液900 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為75 r/min，依法操作，在2、4、7、10、15和20 min時(shí)，分別取溶液5 mL，濾過，并及時(shí)在操作容器中補(bǔ)充上述溶劑5 mL。另取鹽酸克林霉素棕櫚酸酯對(duì)照品適量，精密稱定，用上述溶出介質(zhì)溶解并稀釋制成含克林霉素81.55 μg/mL作為對(duì)照品溶液。照“2.2.1項(xiàng)”的色譜條件，精密量取上述溶液各50 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算出每片的溶出度 (表2)。

檢測(cè)結(jié)果表明，各批鹽酸克林霉素棕櫚酸酯制劑樣品在7 min以后，累積溶出量沒有顯著性差異;在20 min時(shí)各批樣品累積溶出量均達(dá)到94%以上，符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

表2 溶出度測(cè)定結(jié)果 (n=6)Table 2 Determination results of dissolution rate(n=6)

3 討論

有關(guān)物質(zhì)主要反映原料藥的純度，而溶出度則是衡量固體制劑質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)［7］，它們是藥物一致性評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)。有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果表明，國(guó)產(chǎn)分散片產(chǎn)品檢出的有關(guān)物質(zhì)種類與含量均低于國(guó)外原研產(chǎn)品;而溶出度方面，當(dāng)參比制劑與受試制劑都在15 min內(nèi)溶出達(dá)到85%時(shí)，可以認(rèn)為體內(nèi)吸收與溶出速率無關(guān)，不需進(jìn)行溶出過程的比較。國(guó)產(chǎn)分散片與國(guó)外原研產(chǎn)品干混懸劑，在7 min后溶出度均達(dá)到85%以上，20 min時(shí)各批樣品累積溶出量均達(dá)到94%以上，符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

由于國(guó)內(nèi)藥物的一致性評(píng)價(jià)研究才剛剛起步，因此本研究不僅對(duì)確保鹽酸克林霉素棕櫚酸酯分散片的質(zhì)量有重要價(jià)值，而且對(duì)其他產(chǎn)品的一致性評(píng)價(jià)具有示范作用。

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