CIP2A及c-Myc在宮頸癌組織中的表達及相關(guān)性分析

胡 茜，劉 昆

(1.四川省成都市婦女兒童中心醫(yī)院產(chǎn)科 610081；2.四川省抗生素研究所，成都 610052)

論著·臨床研究

CIP2A及c-Myc在宮頸癌組織中的表達及相關(guān)性分析

胡 茜1，劉 昆2

(1.四川省成都市婦女兒童中心醫(yī)院產(chǎn)科 610081；2.四川省抗生素研究所，成都 610052)

目的 檢測蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(CIP2A)和c-Myc蛋白在宮頸癌組織中的表達水平并分析二者表達的相關(guān)性。方法 運用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測CIP2A和c-Myc蛋白在72例宮頸癌和12例正常宮頸組織中的表達水平，分析CIP2A和c-Myc與宮頸臨床病理特征的相關(guān)性以及二者表達的相關(guān)性。結(jié)果 CIP2A和c-Myc蛋白在宮頸癌組織中的陽性率分別為52.8%(38/72)和56.9%(41/72)，而二者在正常宮頸組織中的陽性率分別為8.3%(1/12)和25.0%(3/12)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.169,P=0.004；χ2=4.208,P=0.040)。CIP2A和c-Myc蛋白表達與腫瘤組織病理分化和臨床分期顯著相關(guān)(P<0.05)，而與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤病理類型無明顯相關(guān)性。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示宮頸癌組織中CIP2A與c-Myc蛋白表達呈顯著正相關(guān)(r=0.673，P=0.001)。結(jié)論 宮頸癌組織中CIP2A高表達與惡性臨床病理特征密切相關(guān)，并與c-Myc蛋白表達呈顯著正相關(guān)。

CIP2A；c-Myc；宮頸癌

蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A，CIP2A)最近新發(fā)現(xiàn)的一個癌蛋白，CIP2A通過抑制蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A，PP2A)對c-Myc S62的脫磷酸化作用，從而遏制PP2A介導(dǎo)的c-Myc降解，穩(wěn)定腫瘤細胞中c-Myc蛋白水平[1]。之前報道稱CIP2A在胃癌組織中表達升高，干擾其表達導(dǎo)致腫瘤細胞集落生成受損、細胞衰老和腫瘤分化[2]。另外，在人頭頸部腫瘤、結(jié)腸癌、乳腺癌和口腔鱗狀細胞癌中均發(fā)現(xiàn)CIP2A高表達[3-6]，但CIP2A在人宮頸癌組織中的表達及其與c-Myc的相關(guān)性少有報道。本課題應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測CIP2A和c-Myc在宮頸癌及正常宮頸組織中的表達水平，分析CIP2A和c-Myc與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性及二者表達的相關(guān)性，初步探討CIP2A在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機收集成都市婦女兒童中心醫(yī)院病理科2009年1月至2012年12月保存的宮頸癌組織標本，共72例，年齡29～68歲，平均(42.3±3.4)歲。其中，鱗癌60例，腺癌12例；分化程度：高、中分化39例，低分化33例；臨床分期(FIGO，2009)：Ⅰ～Ⅱ期35例，Ⅲ～Ⅳ期37例。12例正常宮頸組織標本來源于因慢性宮頸炎或子宮纖維瘤行全子宮切除術(shù)的患者，年齡30～65歲，平均(41.7±2.5)歲。兩組患者年齡具有可比性。本研究通過本院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 CIP2A和c-Myc蛋白的免疫組織化學(xué)染色 采用標準生物素-鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶(streptavidin-peroxidase-biotin，SP)法對4 μm石蠟切片進行染色。切片在60 ℃烤箱中烘烤60 min，然后經(jīng)二甲苯脫蠟和再水化，0.01 mmol/L檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0)抗原熱修復(fù)，室溫冷卻20 min，0.3% Trixon-X100處理30 min，3%雙氧水-甲醇封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性，正常血清封閉非特異性結(jié)合，切片經(jīng)CIP2A(1∶250，Novus Biologicals公司)和c-Myc(1∶400，Cell Signaling Technology公司)抗體4 ℃孵育過夜。沖洗后滴加生物素標記的二抗(SP試劑盒，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，室溫孵育30 min。滴加辣根酶標記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育30 min。滴加DAB顯色，蘇木素輕度復(fù)染。乙醇梯度脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。PBS代替一抗作為陰性對照。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色評估 所有切片由2位研究人員進行評估，染色強度評分：0分，陰性；1分，弱陽性；2分，中度；3分，強陽性。陽性細胞百分比評分：無陽性細胞，0分；≤25%，1分；26%～50%，2分；51%～75%，3分；>75%，4分。染色強度和陽性細胞百分比評分相乘大于或等于1分則認為CIP2A或c-Myc蛋白陽性表達[7]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行分析處理，分類資料運用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)系數(shù)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌及正常宮頸組織中CIP2A和c-Myc的表達水平比較 應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測72例宮頸癌及12例正常宮頸組織中CIP2A和c-Myc表達水平，CIP2A和c-Myc蛋白陽性反應(yīng)為棕黃色或棕褐色，CIP2A蛋白主要定位在細胞質(zhì)和細胞膜，而c-Myc蛋白主要定位于細胞質(zhì)和細胞核(圖1)。CIP2A和c-Myc蛋白在宮頸癌組織中的陽性率分別為52.8%(38/72)和56.9%(41/72)，而二者在正常宮頸組織中的陽性率分別為8.3%(1/12)和25.0%(3/12)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.169,P=0.004；χ2=4.208,P=0.040)。

2.2 CIP2A和c-Myc蛋白表達與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性 應(yīng)用χ2檢驗分析CIP2A及c-Myc蛋白表達與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性，結(jié)果見表1。CIP2A和c-Myc蛋白表達與腫瘤組織病理分化和臨床分期有關(guān)(P<0.05)，而與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤病理類型無顯著相關(guān)性。

2.3 宮頸癌組織中CIP2A與c-Myc蛋白表達相關(guān)性 應(yīng)用免疫組織化學(xué)評分對72例宮頸癌組織中CIP2A和c-Myc蛋白表達行半定量分析，Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示宮頸癌組織中CIP2A與c-Myc蛋白表達呈顯著正相關(guān)(r=0.673，P=0.001)。

A：宮頸鱗癌組織中CIP2A陽性染色；B：宮頸腺癌組織中CIP2A陽性染色；C：正常宮頸組織中CIP2A陰性染色；D：宮頸鱗癌組織中c-Myc陽性染色；E：宮頸腺癌組織中c-Myc陽性染色；F：正常宮頸組織中c-Myc陰性染色。

圖1 CIP2A和c-Myc蛋白在宮頸癌及正常宮頸組織中的免疫組織化學(xué)染色(SP，×400)

表1 CIP2A和c-Myc蛋白表達與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性(n=72)

續(xù)表1 CIP2A和c-Myc蛋白表達與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性(n=72)

3 討論

宮頸癌是導(dǎo)致婦科腫瘤患者死亡的第2位因素，每年全世界約有500 000新確診病例，超過1/3的患者死亡[8]。人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV)在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。目前，HPV疫苗的應(yīng)用一定程度減少了宮頸癌發(fā)病率[9]。CIP2A由于具有轉(zhuǎn)化人永生化細胞的能力而被證實為一種癌蛋白，最近CIP2A過表達在多種人類腫瘤中被報道，更重要的是許多研究發(fā)現(xiàn)CIP2A可以充當不同實體腫瘤和血液系統(tǒng)腫瘤的預(yù)后分子標志物，如非小細胞肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、卵巢癌、腎癌、舌癌、食管腺癌、膀胱癌和慢性髓樣白血病[10]。本研究發(fā)現(xiàn)CIP2A在宮頸癌組織中的陽性表達率顯著高于正常宮頸組織，既往有學(xué)者也證實了CIP2A在宮頸鱗癌組織中的表達水平高于正常宮頸和CIN Ⅰ～Ⅲ組織[11]，與本研究結(jié)果一致。進一步研究發(fā)現(xiàn)CIP2A蛋白表達與宮頸癌臨床分期和分化程度呈顯著相關(guān)，而Liu等[11]研究發(fā)現(xiàn)CIP2A與宮頸癌臨床病理特征無明顯相關(guān)。本研究納入了宮頸鱗癌和腺癌2種病理類型，而Liu等[11]只納入了宮頸鱗癌一種病理類型，不能代表宮頸癌整體，這可能是導(dǎo)致出現(xiàn)不同結(jié)論的原因。

c-Myc作為一個經(jīng)典的促癌蛋白參與許多生物學(xué)功能(如細胞增殖、分化、衰老、凋亡和轉(zhuǎn)化)，而在宮頸癌組織中已經(jīng)證實存在c-Myc蛋白過表達[12-14]。本研究也發(fā)現(xiàn)c-Myc蛋白在宮頸癌組織中表達水平顯著高于正常宮頸組織。另外，統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)在高臨床分期和低分化的腫瘤組織中c-Myc陽性率更高。CIP2A是一個細胞PP2A抑制因子，通過抑制PP2A介導(dǎo)的c-Myc絲氨酸62號位脫磷酸化作用從而限制c-Myc蛋白水解。進一步評估宮頸癌組織中CIP2A和c-Myc蛋白表達相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CIP2A與c-Myc蛋白表達呈顯著正相關(guān)。既往研究證實在宮頸癌細胞系中干擾CIP2A表達可以導(dǎo)致c-Myc蛋白表達水平降低和細胞增殖[11]，提示CIP2A可能通過穩(wěn)定c-Myc蛋白促進宮頸癌惡性生物學(xué)行為。

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The expression of CIP2A and c-Myc and their correlation analysis in cervical carcinoma tissues

HuQian1,LiuKun2

(1.Obstetrics,WomenandChildren′sHospitalCenterinChengdu,Chengdu610081,China;2.InstituteofAntibioticsofSichuanProvincial,Chengdu610052,China)

Objective To investigate the expression of CIP2A and c-Myc and their correlation in cervical carcinoma.Methods We detected CIP2A and c-Myc expression using immunohistochemistry in 72 samples of cervical carcinoma and 12 samples of normal cervix tissues.Correlation between proteins and clinicopathologic features and relation between CIP2A and c-Myc expression were analyzed.Results The positive expression of CIP2A and c-Myc in cervical carcinoma tissues were 52.8% and 56.9%,respectively.While their positive expression in normal cervix tissues were 8.3% and 25.0%,respectively.The differences had statistical significance(χ2=8.169,P=0.004;χ2=4.208,P=0.040,respectively).Clinicopathological analysis suggested that CIP2A and c-Myc protein expression were associated with histopathological differentiation and clinical stage(P<0.05) in cervical carcinoma,but the protein expression was not related to age,lymph node metastasis and pathological type.CIP2A was significantly positive correlated with c-Myc protein in cervical carcinoma(r=0.673，P=0.001).Conclusion The high-expression of CIP2A is correlated with malignant clinicopathologic characteristics,and CIP2A is positively associated with c-Myc,suggesting that CIP2A may promote tumor initiation and development through maintaining c-Myc protein in cervical carcinoma.

CIP2A；c-Myc;cervical carcinoma

胡茜(1980-)，主治醫(yī)師,本科,主要從事臨床婦產(chǎn)科工作。

10.3969/j.issn.1671-8348.2015.08.020

R711.74

A

1671-8348(2015)08-1072-03

2014-10-08

2014-12-17)