氣相色譜法測定二十二烷酸含量

趙嬌嬌，劉 靜，周益峰

（中國計量學院 生命科學學院，浙江 杭州 310018）

二十二烷醇是由Avanir公司開發(fā)的2000年世界首次上市的廣譜抗病毒藥物［1］.同年其乳膏劑被FDA批準用作非處方藥治療復發(fā)性口腔炎及面部皰疹［2］.目前我國正在開發(fā)研究二十二烷醇的合成工藝，常見的合成方法是原料二十二烷酸經酯化再進一步還原得到二十二烷醇，而國內市售的二十二烷酸純度多為80%左右，將購買的二十二烷酸純化是控制二十二烷醇質量的關鍵步驟.目前高級脂肪酸氣相含量測定方法多采用衍生化法［3］，二十二烷酸不用衍生化的氣相色譜法尚未見到相關文獻報道，建立一個二十二烷酸不用衍生化的氣相方法，可以快速有效地測定二十二烷酸含量，并且可避免衍生化不完全或副反應造成的定量不準確.此法操作簡單，重現性好，計算簡便，可有效控制產品質量［4］.

1 儀器與試劑

儀器：Agilent 6890N氣相色譜儀；正二十二烷酸對照品（日本 TCI公司，CAS：12－85－6，含量99%）；樣品由本實驗室自制；色譜柱DB－530m×0.32mm×0.25μm（－60～325℃）毛細管柱；檢測器FID；柱溫200℃保持3min，10℃·min－1升溫至300℃，保持15min；進樣口溫度320℃；檢測器溫度320℃；載氣為N2；進樣方式為分流進樣；分流比1∶20；進樣量1μL.

2 方法與結果

2.1 對照品儲備液的制備

精密稱取對照品1.0g，置于100mL容量瓶中，加DMF（N，N－二甲基甲酰胺）適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液.

2.2 供試品溶液的制備

精密稱取樣品0.06g，置于10mL容量瓶中，加DMF（N，N－二甲基甲酰胺）適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液.

2.3 線性關系考察

分別精密吸取對照品儲備液2、4、6、8、10mL置于10mL容量瓶中，加入DMF稀釋至刻度，搖勻，質量濃度分別為2、4、6、8、10mg·mL－1，將對照品溶液分別進樣3次，記錄色譜圖，如圖1.以對照品溶液質量濃度對二十二烷酸峰面積繪制標準曲線［5］ 如圖2.計算得回歸方程y＝578.7x－805.6，R2＝0.999.結果表明，二十二烷酸在2～10mg·mL－1范圍內線性關系良好.

圖1 二十二烷酸GC色譜圖Figure 1 GC chromatogram of behenic acid

圖2 對照品溶液標準曲線圖Figure 2 Standard curve of the reference solution

2.4 進樣精密度試驗

取質量濃度為6mg·mL－1的供試品試液，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，計算RSD＝0.39%.

2.5 精密度試驗

取質量濃度為6mg·mL－1的二十二烷酸對照溶液，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，計算RSD＝0.8%.

2.6 重復性試驗

同一批號的樣品（批號：20150506），依法“2.2”平行制備6份供試品溶液，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，算其平均含量為96.56%，RSD＝0.55%.

2.7 穩(wěn)定性試驗

精密稱取同一批號供試品溶液（批號：20150506）分別于配制后0、1、2、4、6、8、10、12、24小時進樣測定，測得二十二烷酸峰面積平均值為2499.920，RSD＝1.84%，表明供試品溶液在24h內基本穩(wěn)定.

2.8 回收率試驗

取“2.2”項下已測知含量的二十二烷酸樣品3份，分別稱取0.04g，0.06g，0.08g，精密稱定，置于10mL容量瓶中，加DMF稀釋至刻度，振搖使溶解，在上述色譜條件下進樣測定，各進樣三針［6］，測得量由公式得到，計算二十二烷酸的平均回收率為99.8%（RSD＝0.53%，n＝9），結果見表1和表2.

表1 對照品溶液峰面積Table 1 Peak areas of the reference solution

表2 回收率試驗結果Table 2 Results of the recovery rate

2.9 樣品分析

取3批樣品（批 號：20150505，20150506，20150507），依“2.2”項下方法制備供試品溶液，分別按以上色譜條件測試，記錄色譜圖，根據標準曲線計算樣品中二十二烷酸的平均含量為96.56%，平行測3次，計算結果見表3.

表3 二十二烷酸含量測試結果Table 3 Analytical results of behenic acid

3 討 論

常見的高級飽和脂肪酸檢測方法有：方法一，蒸發(fā)光散射檢測法（ELSD）.此方法靈敏度高，但穩(wěn)定性受環(huán)境影響比較大［7］，且二十二烷酸溶解度差，難以找到適合流動相進行檢測.方法二，滴定法.滴定法操作復雜，且難以直觀了解純化過程中其它雜質的變化情況［8］.方法三，氣相色譜法.二十二烷酸作為高級飽和脂肪酸，沸點較高（305℃），一般的氣相色譜多采用衍生化法［9］，如酯化、酰化或硅烷化.但衍生化反應存在難以反應完全、容易發(fā)生副反應等問題，以致影響檢測結果.同時過量的衍生化試劑對毛細管柱也會產生損害.

所以，本文的檢測采用非衍生化的氣相色譜法，來避免上述弊端.二十二烷酸在氣相色譜中響應良好，保留時間適宜.從回收率及樣品測定結果來看，本方法具有準確、重現性好、簡便易行的優(yōu)點［10］.

二十二烷酸溶解度較差，超過一定濃度的二十二烷酸易結晶析出，影響檢測，所以需要控制其質量濃度在一定響應范圍（2～10mg·mL－1）.

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