絲狀真菌的快速鑒定及藥敏試驗(yàn)

彭陽，許超，王玉月，何彩珍，許昕，毛易捷，史偉峰

(蘇州大學(xué)附屬第三醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇常州 213003)

·臨床檢驗(yàn)技術(shù)研究·

絲狀真菌的快速鑒定及藥敏試驗(yàn)

彭陽，許超，王玉月，何彩珍，許昕，毛易捷，史偉峰

(蘇州大學(xué)附屬第三醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇常州 213003)

目的 評估基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)技術(shù)在絲狀真菌鑒定中的作用，分析常用抗菌藥物對絲狀真菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果。方法 收集100株絲狀真菌，采用MALDI-TOF MS進(jìn)行快速鑒定，并與顯微鏡檢查結(jié)果進(jìn)行比對；用E-test法進(jìn)行絲狀真菌藥敏試驗(yàn)。結(jié)果 MALDI-TOF MS對100株絲狀真菌鑒定達(dá)到種鑒定水平的有61株(得分≥2.000)，達(dá)到屬鑒定水平的有36株(1.700～1.999)，未能鑒定的有3株(<1.700)；與鏡檢結(jié)果不一致的有1株。兩性霉素B對絮狀表皮癬菌的90%最低抑菌濃度(MIC90)為0.19 μg/mL，而對黃曲霉的MIC90>32 μg/mL。伊曲康唑?qū)喟l(fā)毛癬菌、犬小孢子菌和絮狀表皮癬菌的MIC90均<0.38 μg/mL，而對黑曲霉的MIC90>32 μg/mL。氟康唑?qū)Υ蟛糠质茉嚲甑腗IC90均>256 μg/mL。伏立康唑和卡泊芬凈對煙曲霉、黃曲霉、黑曲霉、紅色毛癬菌、斷發(fā)毛癬菌和犬小孢子菌的MIC90分別≤0.38 μg/mL和≤1 μg/mL。結(jié)論 MALDI-TOF MS技術(shù)可快速、準(zhǔn)確、高通量檢測臨床分離的絲狀真菌。伏立康唑和卡泊芬凈對絲狀真菌具有較好的抗菌活性。

基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜；絲狀真菌；真菌藥敏試驗(yàn)

近年來，由于器官移植、免疫抑制劑使用、侵入性治療、惡性腫瘤、HIV感染等患者逐年增多，以及廣譜抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，絲狀真菌的感染比例呈上升趨勢。很多絲狀真菌生長緩慢，傳統(tǒng)的基于培養(yǎng)的形態(tài)學(xué)鑒定方法耗時(shí)長，操作繁瑣且鑒定能力有限[1-2]，給臨床早期診斷和抗真菌治療帶來困難。基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(matrix-assisted laser desorption ionization-time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)是近年來發(fā)展起來的一種新的鑒定技術(shù)，具有敏感性高和特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，可快速、準(zhǔn)確鑒定細(xì)菌和真菌[3-5]。目前國際上對于抗真菌體外藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果的判讀缺乏解釋標(biāo)準(zhǔn)，通常用50%最低抑菌濃度(50% minimal inhibitory concentration, MIC50)和MIC90來反映抗真菌藥物的活性。本研究主要評估MALDI-TOF MS技術(shù)鑒定多種絲狀真菌的性能，并應(yīng)用E-test法檢測伊曲康唑等5種抗真菌藥物對絲狀真菌的抗菌活性。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 實(shí)驗(yàn)所用菌株有100株。標(biāo)準(zhǔn)菌19株，包括煙曲霉(ATCC 3626)、黃曲霉(CBS13161)、土曲霉(ATCC 3633)、黑曲霉[CMCC(F)A3]、雜色曲霉(CBS 245.65)、構(gòu)巢曲霉[CMCC(F)A7a]、溜曲霉[CMCC(F)A13]、棒曲霉[CMCC(F)A4a]、薛氏曲霉[CMCC(F)A28]、構(gòu)巢曲霉[CMCC(F)A7]、焦曲霉[CMCC(F)A15a]、紅色毛癬菌(ATCC 4438)、斷發(fā)毛癬菌(CBS 171.65)、球孢白漿菌[CMCC(F)B13b]、馬爾尼菲藍(lán)狀菌[CMCC(F)B33r]、產(chǎn)黃青霉[CMCC(F)B31]、淡紫擬青霉(CMCC 35539)、小孢根霉[CMCC(F)B46]、石膏樣小孢子菌(CBS 118893)和申克孢子絲菌(ATCC 49.12)各1株，購自中國醫(yī)學(xué)真菌保藏中心；臨床分離菌株共81株，包括煙曲霉19株，黃曲霉14株，黑曲霉4株，紅色毛癬菌22株，絮狀表皮癬菌5株，犬小孢子菌5株，斷發(fā)毛癬菌5株，石膏樣小孢子菌5株，申克孢子絲菌2株，來自蘇州大學(xué)附屬第三醫(yī)院、南京軍區(qū)總醫(yī)院和江蘇省人民醫(yī)院。

1.2 儀器與試劑 Microflex質(zhì)譜儀(德國布魯克公司)。馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基、棉藍(lán)染色液(珠海貝索公司)，無水乙醇、乙腈及甲酸(Sigma公司)。氟康唑(FCA)、兩性霉素B(AMB)、伏立康唑(VRC)、伊曲康唑(ITR)和卡泊芬凈(CAS)5種E-test藥敏紙片(鄭州安圖生物公司)，真菌藥敏試驗(yàn)培養(yǎng)基(溫州康泰公司)。

1.3 絲狀真菌鑒定

1.3.1 棉藍(lán)染色檢查 將絲狀真菌點(diǎn)種在PDA培養(yǎng)基上，30 ℃培養(yǎng)4～10 d，取一清潔載玻片，滴加棉藍(lán)染液1滴，然后挑取少許培養(yǎng)物于其中，用接種針將其攤開，加蓋玻片微微加溫并稍壓以除去氣泡，在顯微鏡下觀察孢子和分生孢子的形態(tài)、生長方式及菌絲特征，同時(shí)結(jié)合菌落生長速度、形態(tài)、質(zhì)地和顏色等進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。

1.3.2 質(zhì)譜儀鑒定 將絲狀真菌點(diǎn)種在PDA培養(yǎng)基上，30 ℃培養(yǎng)3 d，挑取少量微生物培養(yǎng)物于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，然后置于搖床內(nèi)28 ℃增菌培養(yǎng)，曲霉屬培養(yǎng)24 h，非曲霉屬培養(yǎng)48 h，取出離心2 min，收集沉積樣本移入Ep管中，13 000 r/min離心2 min，吸棄上清液，向離心管中添加1 mL去離子水，漩渦振蕩1 min，13 000 r/min離心2 min，吸棄上清液，向沉淀中加入300 μL去離子水渦旋，再加入900 μL無水乙醇渦旋，13 000 r/min離心2 min，棄上清液，在超凈臺中干燥2 min；根據(jù)沉淀的體積，按比例加入適量的70%甲酸溶液，充分混勻后加等體積乙腈溶液并充分混勻，13 000 r/min離心2 min。吸取1 μL上清液點(diǎn)在MALDI靶板上，待液滴干燥后取1 μL基質(zhì)溶液(50%乙腈、2.5%三氟乙酸和α-氰基-4-羥基肉桂酸飽和溶液)覆蓋其上，在室溫下晾干，用質(zhì)譜儀進(jìn)行鑒定。使用FlexControl 3.0 軟件采集圖譜，采用正線性模式，激光頻率為60 Hz，加速電壓19.98 kV，延遲提取電壓17.98 kV，聚焦電壓5.99 kV，延遲時(shí)間為150 ns，每個(gè)靶點(diǎn)設(shè)激光隨機(jī)射擊6個(gè)點(diǎn)，每次射擊40次。用MALDI Biotyper 3.0系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)庫比對，得出鑒定結(jié)果。鑒定得分在2.000～3.000之間表示準(zhǔn)確鑒定到種, 1.700～1.999表示鑒定到屬,0.000～1.699表示不能可靠鑒定。每株菌點(diǎn)3 個(gè)靶點(diǎn)，進(jìn)行平行檢測，取評分最高的點(diǎn)計(jì)入數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。

1.4 抗真菌藥物敏感性測定

1.4.1 菌懸液的制備 將絲狀真菌點(diǎn)種在PDA培養(yǎng)基上，30 ℃培養(yǎng)7 d，用無菌生理鹽水沖洗菌落表面的菌絲和孢子。將含有菌絲和孢子的沖洗液靜置5～10 min，去除沉淀的顆粒，取上層液體渦旋15 s成孢子懸液。將曲霉屬孢子懸液用生理鹽水調(diào)至0.5麥?zhǔn)蠞岫葐挝?，非曲霉孢子懸液調(diào)至0.5～1.0麥?zhǔn)蠞岫葐挝弧?/p>

1.4.2 E-test真菌藥敏試驗(yàn) 挑選79株絲狀真菌，包括19株煙曲霉、14株黃曲霉、5株黑曲霉、18株紅色毛癬菌、5株絮狀表皮癬菌、5株犬小孢子菌和6株斷發(fā)毛癬菌以及構(gòu)巢曲霉、土曲霉、溜曲霉、棒曲霉、焦曲霉、雜色曲霉、石膏樣小孢子菌各1株，采用E-test方法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。操作及結(jié)果判讀方法按照說明書進(jìn)行。質(zhì)控菌為近平滑念珠菌(ATCC 22019)。

2 結(jié)果

2.1 絲狀真菌鑒定結(jié)果 絲狀真菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)4～10 d后菌落形態(tài)較典型，見圖1。曲霉屬菌落生長較快，結(jié)構(gòu)相對疏松，不同的曲霉菌可產(chǎn)生不同顏色的色素，如黃曲霉表面呈灰綠色，背面無色或略呈褐色；黑曲霉表面為黑色，呈粉末狀；煙曲霉開始為白色，2～3 d后轉(zhuǎn)為綠色，數(shù)日后變?yōu)樯罹G色并呈粉末狀；土曲霉表面為淡褐色或褐色；雜色曲霉顏色有數(shù)環(huán)，從青綠到紅綠，呈絨毛狀。青霉屬菌落生長速度較曲霉菌屬慢，一般需培養(yǎng)7 d左右，可產(chǎn)生色素，如產(chǎn)黃青霉菌質(zhì)地絨狀，有輻射狀皺紋，邊緣菌絲體白色，菌落反面呈淺黃褐色；馬爾尼菲藍(lán)狀菌在30 ℃時(shí)呈現(xiàn)為菌絲型，并可產(chǎn)生紅色色素，而在37 ℃時(shí)則為酵母型，不產(chǎn)生色素。申克氏孢子絲菌為雙相型真菌性，在25 ℃時(shí)呈菌絲狀，表面有皺紋，顏色從白色轉(zhuǎn)成深棕色，在37 ℃時(shí)則呈灰棕色酵母菌狀。皮癬菌屬一般于第2～4天開始有菌落生長，第7～12天菌落較快生長，除了可產(chǎn)生特征性色素的菌株如紅色毛癬菌、紫色毛癬菌外，大多呈白色絨毛狀，肉眼較難區(qū)分。根霉菌屬一般會從中心向周圍輻射生長成圓形菌落，初形成時(shí)為灰白色或黃白色，成熟后變成黑色，生長迅速的菌株可在2～3 d長滿整個(gè)平板。100株絲狀真菌的MALDI-TOF MS鑒定得分：評分≥2.000，達(dá)到種鑒定水平的有61株；1.700～1.999，達(dá)到屬水平的有36株；<1.700的有3株，見表1。19株標(biāo)準(zhǔn)菌株中，棉藍(lán)染色鏡檢結(jié)果與質(zhì)譜鑒定結(jié)果相符合的有15株；質(zhì)譜鑒定無結(jié)果的有3株，分別為薛氏曲霉[CMCC(F)A28]、球孢白漿菌[CMCC(F)B13b]和馬爾尼菲藍(lán)狀菌[CMCC(F)B33r]；與質(zhì)譜鑒定結(jié)果不相符的有1株，為產(chǎn)黃青霉[CMCC(F)B31]。質(zhì)譜鑒定標(biāo)準(zhǔn)菌株的準(zhǔn)確率為78.95%(15/19)。81株常見臨床分離菌株中，棉藍(lán)染色鏡檢結(jié)果與質(zhì)譜結(jié)果均相符合。

注：A，煙曲霉；B，黃曲霉；C，黑曲霉；D，棒曲霉；E，構(gòu)巢曲霉；F，雜色曲霉；G，馬爾尼菲藍(lán)狀菌；H，申克孢子絲菌；I，石膏樣小孢子菌；J，小孢根霉；K，產(chǎn)黃青霉菌；L，斷發(fā)毛癬菌。

圖1 12種絲狀真菌菌落形態(tài)

2.2 E-test藥敏試驗(yàn)結(jié)果 79株絲狀真菌采用E-test方法檢測藥敏試驗(yàn)。對于曲霉屬等生長較快的絲狀真菌24 h即可判讀結(jié)果，而對于申克孢子絲菌、石膏樣小孢子菌、犬小孢子菌、毛癬菌屬則需48～96 h才能判讀。兩性霉素B對絮狀表皮癬菌的MIC90為0.19 μg/mL，而對黃曲霉的MIC90>32 μg/mL。伊曲康唑?qū)喟l(fā)毛癬菌、犬小孢子菌和絮狀表皮癬菌的MIC90均<0.38 μg/mL，而對黑曲霉的MIC90>32 μg/mL。氟康唑?qū)Υ蟛糠质茉嚲甑腗IC90均>256 μg/mL；伏立康唑和卡泊芬凈對煙曲霉、黃曲霉、黑曲霉、紅色毛癬菌、斷發(fā)毛癬菌和犬小孢子菌的MIC90分別≤0.38 μg/mL和≤1 μg/mL。見表2。

表2 79株絲狀真菌體外藥敏結(jié)果

3 討論

絲狀真菌的鑒定方法包括直接鏡檢法、血清學(xué)方法、組織病理學(xué)檢查、分子生物學(xué)方法等。其中絲狀真菌形態(tài)學(xué)鑒定需要數(shù)天的時(shí)間對菌落的生長速度、色素變化及鏡下菌絲和孢子結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察，要求檢驗(yàn)人員有專業(yè)的技術(shù)和豐富的鑒定經(jīng)驗(yàn)，易產(chǎn)生較大的人為誤差；組織病理學(xué)檢查和血清學(xué)方法不能將絲狀真菌鑒定到種的水平；分子生物學(xué)方法對操作人員技術(shù)要求高,操作復(fù)雜，費(fèi)用昂貴,且對于一些基因序列高度同源的真菌如黃曲霉和米曲霉不能很好地區(qū)分，亦不適合成為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)的檢測方法。近年來，MALDI-TOF MS技術(shù)已廣泛用于酵母菌的鑒定，操作簡便、快速、高通量、成本低廉，且準(zhǔn)確性高，臨床應(yīng)用取得良好效果[6]，因此我們選用質(zhì)譜儀鑒定法對21種絲狀真菌進(jìn)行鑒定，同時(shí)與棉藍(lán)染色檢查的鑒定結(jié)果進(jìn)行比對。目前，此技術(shù)并未普及至絲狀真菌的鑒定，主要是因?yàn)榻z狀真菌的胞壁堅(jiān)韌、難以破碎，常規(guī)處理方法難以提取出足量的蛋白質(zhì)。真菌蛋白質(zhì)的提取方法包括勻漿法、研磨法、超聲破碎法及酶溶法等。有研究表明玻璃珠研磨法和超聲破碎法可提高真菌蛋白質(zhì)的分離效率[7-8]?？紤]到玻璃珠研磨法操作復(fù)雜、超聲破碎法成本高且熱效應(yīng)太大等缺點(diǎn)，我們設(shè)計(jì)了液體培養(yǎng)的方法，對絲狀真菌進(jìn)行甲酸萃取等特殊處理，有助于快速、簡便地提取更多的蛋白質(zhì)。此外，本研究菌株種類多，而Biotyper 2.0數(shù)據(jù)庫中包含的絲狀真菌庫較少，無法滿足臨床需要，因此我們引進(jìn)了布魯克公司提供的最新絲狀真菌數(shù)據(jù)庫。其涵蓋127種絲狀真菌的圖譜，但仍缺少個(gè)別種類，如本研究鑒定無結(jié)果的薛氏曲霉和馬爾尼菲藍(lán)狀菌。因此，絲狀真菌的數(shù)據(jù)庫圖譜需繼續(xù)完善。

絲狀真菌進(jìn)行棉藍(lán)染色檢查時(shí)，需要將真菌接種在PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)至少7 d至成熟后才能在鏡下看到理想的形態(tài)，而質(zhì)譜儀鑒定法只需將絲狀真菌接種于肉湯中培養(yǎng)24 h即可鑒定，并且可以同時(shí)檢測多個(gè)菌株，鑒定單株的過程大約需要20 min。由此可見，質(zhì)譜儀鑒定法不僅大大縮短了絲狀真菌鑒定的時(shí)間，而且具有高通量、高準(zhǔn)確性的優(yōu)勢。按照質(zhì)譜評分標(biāo)準(zhǔn)，絲狀真菌鑒定達(dá)到種水平的鑒定率為61.00%(61/100)，達(dá)到屬水平為97.00%(97/100)，與國內(nèi)報(bào)道[9]相似；曲霉菌鑒定達(dá)到種水平的鑒定率為97.83%(45/46)，達(dá)到屬水平為100%(46/46)，與國內(nèi)外報(bào)道[4,9]相似。由此可見，質(zhì)譜儀鑒定的方法具有快速、操作簡便、高通量、成本低廉等優(yōu)勢，有助于盡早鑒定出真菌類別，提高鑒定速度，尤其在鑒定曲霉菌上優(yōu)勢更突出。

近年來，新的抗菌藥物如卡泊芬凈、伏立康唑給臨床治療真菌感染提供了更多的選擇，如何有針對性地選擇抗菌藥物是臨床醫(yī)生最為關(guān)注的問題，而真菌的體外藥敏試驗(yàn)可評估臨床上常見的真菌對經(jīng)典和新型抗菌藥物的抗菌活性，為臨床提供一定的藥敏依據(jù)。臨床實(shí)踐中，絲狀真菌的體外藥敏試驗(yàn)方法主要包括美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)推薦的M38-A肉湯稀釋法、瓊脂擴(kuò)散法和E-test法。其中CLSI推薦的標(biāo)準(zhǔn)化方案重復(fù)性好，但是操作繁瑣，成本較高，需時(shí)較長，不適合實(shí)驗(yàn)室常規(guī)運(yùn)用；瓊脂擴(kuò)散法測定真菌對抗真菌藥物的敏感性僅限于定性，目前較少使用。國外最新研究報(bào)道，E-test法和CLSI推薦的液基稀釋法針對兩性霉素、卡泊芬凈和伏立康唑等抗真菌藥物藥敏結(jié)果的符合率具有很好的一致性[10]。E-test法不僅具有操作簡便、結(jié)果易判讀、重復(fù)性好和定量檢測MIC值等優(yōu)點(diǎn)，而且有成熟的商品供應(yīng)，是我們選擇該方法的重要原因。國內(nèi)外均有研究報(bào)道E-test法檢測抗真菌藥物的抗菌活性,但是對于抗真菌藥物的類別和霉菌種類的選擇依舊存在一定的局限性[11-13]。本實(shí)驗(yàn)利用E-test法檢測了79株絲狀真菌對AMB、FCA、ITR、VRC和CAS 5種抗真菌藥物的活性。CLSI對近平滑念珠菌(ATCC 22019)具有MIC范圍標(biāo)準(zhǔn)，本次質(zhì)控試驗(yàn)結(jié)果在范圍標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)，符合質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。由于CLSI對于判斷不同絲狀真菌體外藥敏試驗(yàn)敏感和耐藥的折點(diǎn)尚未明確規(guī)定，我們用MIC50和MIC90來反映5種抗真菌藥物對不同絲狀真菌的抑菌程度。本研究顯示，兩性霉素B對多數(shù)絲狀真菌有抗菌活性，對黃曲霉的MIC90>32 μg/mL，對土曲霉的MIC>32 μg/mL，與研究報(bào)道的土曲霉對兩性霉素B天然耐藥，黃曲霉可以出現(xiàn)獲得性耐藥的情況相符[12]；氟康唑?qū)^大多數(shù)絲狀真菌的抗菌活性較弱，提示對大多數(shù)真菌可能無效；卡泊芬凈對絕大多數(shù)絲狀真菌有抗菌活性，但在體外藥敏試驗(yàn)中有拖尾現(xiàn)象，圈內(nèi)有菌生長，可能會影響結(jié)果的判讀；伏立康唑和伊曲康唑均為三唑類抗真菌藥，對大多數(shù)絲狀真菌均有抗菌活性，但結(jié)果顯示伏立康唑?qū)z狀真菌的抗菌活性優(yōu)于伊曲康唑。以往兩性霉素常作為抗真菌感染的一線用藥，而本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明伏立康唑和卡泊芬凈對絲狀真菌有更好的抗菌活性。此外，需要注意藥敏結(jié)果與臨床療效常遵循的“90-60”原則[14]，即體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果敏感者約有90%臨床療效較好，而耐藥者約有60%仍然對治療有效，這一規(guī)律說明了體外藥敏試驗(yàn)與臨床療效之間的相關(guān)性。因此，檢驗(yàn)科室需與臨床加強(qiáng)溝通，這就要求我們能夠正確理解藥敏試驗(yàn)結(jié)果的臨床應(yīng)用價(jià)值和局限性，以便更準(zhǔn)確、快速地為臨床篩選藥物。

綜上所述，MALDI-TOF MS技術(shù)可快速、準(zhǔn)確、高通量檢測臨床分離的絲狀真菌，同時(shí)結(jié)合快速的藥敏試驗(yàn)，便能在很短的治療時(shí)間窗口內(nèi)提供診斷和治療意見，既能夠避免選用天然不敏感的抗真菌藥物以減少臨床藥物治療成本，又能減少了嚴(yán)重感染病患者的住院時(shí)間并降低發(fā)病率和死亡率。E-test法重復(fù)性好，操作簡便，敏感性高，可以為指導(dǎo)臨床醫(yī)師合理選擇用藥及檢測病原真菌對抗真菌藥物的耐藥趨勢等方面提供參考。故推薦MALDI-TOF MS鑒定法和E-test法作為臨床實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)檢測方法。

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(本文編輯：劉群)

Rapid identification and antifungal susceptibility testing of filamentous fungi

PENGYang,XUChao,WANGYu-yue,HECai-zhen,XUXin,MAOYi-jie,SHIWei-feng

(DepartmentofLaboratoryMedicine,theThirdAffiliatedHospitalofSoochowUniversity,Changzhou213003,Jiangsu,China)

Objective To evaluate the application of matrix-assisted laser desorption ionization-time-of-flight mass spectrometry(MALDI-TOF MS) technology in the identification of filamentous fungi, and analyze the susceptibility of filamentous fungi to commonly used antibiotics. Methods A total of 100 strains of filamentous fungi were collected and identified rapidly by MALDI-TOF MS. The obtained results were compared with those from microscopic examination. The susceptibility of filamentous fungi was detected by the E-test method. Results Among 100 strains of filamentous fungi identified by MALDI-TOF MS, 61 reached to the species level(score≥2.000), 36 to the genus level(score between 1.700 and 1.999), and 3 failed to be identified(score<1.700). There was inconsistent results for one strain of filamentous fungi between MALDI-TOF MS and microscopic examination. The MIC90of amphotericin B againstEpidermophytonfloccosumwas 0.19 μg/mL, while that againstAspergillusflavuswas above 32 μg/mL. The MIC90of itraconazole againstTrichophytontonsurans,MicrosporumcanisandEpidermophytonfloccosumwere all below 0.38 μg/mL, while that againstAspergillusnigerwas above 32 μg/mL. The MIC90of fluconazol were above 256 μg/mL for most of strains. The MIC90of voriconazole and caspofungin againstAspergillusfumigatus,Aspergillusflavus,Aspergillusniger,Trichophytonrubrum,TrichophytontonsuransandMicrosporumcaniswere ≤0.38 μg/mL and ≤1 μg/mL, respectively. Conclusion The MALDI-TOF MS technology may be used to identify the filamentous fungi isolated from clinical specimens quickly, accurately and high-throughput. Voriconazole and caspofungin have effective anti-filamentous fungi activity.

matrix-assisted laser desorption ionization-time-of-flight mass spectrometry; filamentous fungi; antifungal susceptibility testing

10.13602/j.cnki.jcls.2017.07.02

國家自然科學(xué)基金(81572052)；江蘇省自然科學(xué)基金(BK20151178)；常州市醫(yī)學(xué)領(lǐng)軍人才項(xiàng)目(20101368)。

彭陽，1992年生，女，碩士研究生，主要從事臨床微生物與免疫研究。

史偉峰，主任技師，教授，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：swf67113@163.com。

R446.5

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2017-06-01)