膠體金免疫層析法檢測血清隱球菌抗原在肺隱球菌病診斷中的應(yīng)用價值

黃佳斯，石磊，唐愛國，胡敏，唐玲麗，梁好，李影

(中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院a.檢驗(yàn)科，b.病理科，長沙 410011)

·臨床實(shí)驗(yàn)研究·

膠體金免疫層析法檢測血清隱球菌抗原在肺隱球菌病診斷中的應(yīng)用價值

黃佳斯a，石磊b，唐愛國a，胡敏a，唐玲麗a，梁好a，李影a

(中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院a.檢驗(yàn)科，b.病理科，長沙 410011)

目的 探討血清隱球菌抗原-膠體金免疫層析法(CrAg-LFA)在肺隱球菌病診斷中的應(yīng)用價值。方法 回顧性研究2016年1至11月中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院收治的肺隱球菌病及非肺隱球菌病患者共547例，采用CrAg-LFA篩查血清中隱球菌抗原，分析血清CrAg-LFA對肺隱球菌病診斷的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值。結(jié)果 10例肺隱球菌病組患者采用CrAg-LFA測定陽性8例，敏感性為80.0%(8/10)；非肺隱球菌病組患者537例，CrAg-LFA測定陰性534例，特異性為99.4%(534/537)，陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別為72.7%和99.6%。結(jié)論 CrAg-LFA是一種簡單快速的肺隱球菌病篩查試驗(yàn)，可用于肺隱球菌病的輔助診斷。

肺隱球菌??；隱球菌抗原；膠體金法

隨著免疫功能低下患者增多，肺隱球菌病(pulmonary cryptococcosis，PC)發(fā)生率呈增加趨勢[1]。隱球菌在肺組織內(nèi)呈局限性浸潤感染，傳統(tǒng)的痰墨汁染色和培養(yǎng)陽性率很低[2]。血清學(xué)隱球菌莢膜抗原檢測對隱球菌感染具有較好的輔助診斷價值。文獻(xiàn)報道，隱球菌抗原-膠體金免疫層析法(cryptococcal antigen lateral flow immunochromatographic assay，CrAg-LFA)測定腦脊液樣本對隱球菌性腦膜炎的診斷敏感性和特異性達(dá)到95%左右[3]，而血清樣本CrAg-LFA對PC的診斷效能國內(nèi)未見報道。本研究應(yīng)用CrAg-LFA法結(jié)合臨床病理穿刺結(jié)果，探討血清CrAg-LFA在PC診斷中的應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象 回顧性研究中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院呼吸科2016年1月至11月確診PC組10例，男7例，女3例，年齡(47.1±11.6)歲，肺組織病理組織學(xué)染色均發(fā)現(xiàn)隱球菌橢圓形孢子樣結(jié)構(gòu)，孢子周邊可見厚莢膜；非PC組537例，其中男335例，女202例，年齡(42.5±13.1)歲，組織病理或臨床診斷排除PC，包括肺炎223例，慢性阻塞性肺病62例，肺癌43例，肺結(jié)核33例和支氣管炎35例，其余肺病99例，非肺部疾病42例。根據(jù)2010年《隱球菌感染診治專家共識》中PC診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]進(jìn)行診斷。

1.2 標(biāo)本采集 采集患者空腹靜脈血約4 mL于無菌干燥采血管中，3 000×g離心10 min取血清。

1.3 血清隱球菌抗原檢測 隱球菌抗原檢測(膠體金法)檢測試劑盒購自美國Immuno-Mycologics公司。按照試劑盒說明書進(jìn)行：將1滴樣本稀釋液加入到無菌試管中，加入40 μL血清樣本進(jìn)行混合，將隱球菌抗原檢測試紙條檢測端沒入混合樣本液中，10 min后讀取結(jié)果。結(jié)果判讀：檢測條帶和對照條帶均出現(xiàn)為陽性；僅出現(xiàn)對照條帶為陰性；若對照條帶未出現(xiàn)，說明檢測無效，應(yīng)重新檢測。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。根據(jù)四格表資料計(jì)算血清CrAg-LFA診斷PC的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值。

2 結(jié)果

10例PC組患者中8例血清CrAg-LFA法檢測呈陽性(強(qiáng)陽性)，2例為陰性；537例非PC組患者中3例血清CrAg-LFA法檢測弱陽性，其余534例均為陰性。見表1。血清CrAg-LFA診斷PC的敏感性為80.0%，特異性為99.4%，陽性預(yù)測值為72.7%，陰性預(yù)測值為99.6%。

表1 血清CrAg-LFA對肺隱球菌病檢測結(jié)果

3 討論

目前血清學(xué)隱球菌莢膜抗原檢測方法主要包括乳膠凝集法(LA)、酶聯(lián)免疫法(EIA)和側(cè)向?qū)游龇?CrAg-LFA)[5]。研究表明，CrAg-LFA比LA法和EIA具有更高的準(zhǔn)確性，其在室溫下穩(wěn)定，10 min即可出結(jié)果，對實(shí)驗(yàn)室設(shè)備的要求不高，易于操作[6]。本研究10例PC患者中8例血清CrAg-LFA測定為強(qiáng)陽性，2例為陰性。陰性結(jié)果可能與隱球菌在肺部局限性浸潤生長，隱球菌抗原較難釋放入血有關(guān)。因此，CrAg-LFA測定陰性，臨床高度懷疑PC時，仍需結(jié)合患者宿主因素及其他指標(biāo)綜合判斷。537例非PC組患者中3例血清CrAg-LFA測定均為弱陽性，提示隱球菌抗原滴度較低或某些因素導(dǎo)致的交叉反應(yīng)。以上3例患者最終診斷為耶氏肺孢子蟲病、社區(qū)獲得性肺炎伴類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和肺占位性病變，病理組織學(xué)均提示非隱球菌感染，提示耶氏肺孢子蟲或類風(fēng)濕因子可能在一定程度上與隱球菌抗原存在交叉反應(yīng)，但尚需大樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行進(jìn)一步論證。本研究結(jié)果顯示血清CrAg-LFA法診斷PC的敏感性和特異性分別為80.0%和99.6%，陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別為72.7%和99.6%，提示該方法對PC有較好的輔助診斷價值，可應(yīng)用于PC的快速篩查。

[1]Park BJ, Wannemuehler KA, Marston BJ,etal. Estimation of the current global burden of cryptococcal meningitis among persons living with HIV/AIDS[J].AIDS,2009, 23(4):525-530.

[2]于洪志,吳琦.國內(nèi)肺隱球菌病臨床資料匯總分析[J].西南軍醫(yī), 2009,11(4):606-608.

[3]Boulware DR, Rolfes MA, Rajasingham R,etal. Multisite validation of cryptococcal antigen lateral flow assay and quantification by laser thermal contrast[J]. Emerg Infect Dis, 2014, 20(1):45-53.

[4]《中國真菌學(xué)雜志》編輯委員會.隱球菌感染與診治專家共識[J].中國真菌學(xué)雜志, 2010,5(2):65-68.

[5]Saha DC, Xess I, Biswas A,etal. Detection ofCryptococcusby conventional, serological and molecular methods[J].J Med Microbiol, 2009,58(Pt8):1098-1105.

[6]Lindsley MD, Nanthawan M, Baggett HC,etal. Evaluation of a newly developed lateral flow immunoassay for the diagnosis of cryptococcosis[J]. Clin Infect Dis, 2011, 53(4): 321-325.

(本文編輯：周萬青，劉群)

10.13602/j.cnki.jcls.2017.07.10

黃佳斯，1986年生，女，技師，碩士研究生，從事凝血機(jī)制研究。

李影，主管技師，碩士，E-mail：liying.xiangya@163.com。

R446.5

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2017-03-13)