不同產(chǎn)地差不嘎蒿的質(zhì)量對(duì)比研究

王琰等

【摘 要】 目的：考察不同產(chǎn)地差不嘎蒿藥材的各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立及優(yōu)質(zhì)產(chǎn)地的篩選提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：采用HPLC法，流動(dòng)相：乙腈-0.2%甲酸水（35∶65）流量：0.8ml/min；檢測(cè)波長：288nm；柱溫：30℃，測(cè)定指標(biāo)性成分異櫻花素、圣草酚-7-甲醚的含量；按照2010年版《中國藥典》（一部）附錄方法測(cè)定其醇溶性浸出物、水分、雜質(zhì)、灰分含量及其酸敗度，綜合評(píng)定藥材質(zhì)量。 結(jié)果：不同產(chǎn)地的藥材之間有一定的差異，其中異櫻花素、圣草酚-7-甲醚含量差異較為明顯，水分隨保藏年份的增加而減少，其他項(xiàng)的差異保持在一定范圍內(nèi)。結(jié)論：不同產(chǎn)地的差不嘎蒿藥材的質(zhì)量有所不同，內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市可作為優(yōu)質(zhì)種源。

【關(guān)鍵詞】 差不嘎蒿；不同產(chǎn)地；質(zhì)量對(duì)比；異櫻花素；圣草酚-7-甲醚

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2015）17-0027-04

Abstract：Objective Study the quality indicators of Artemisia halodendron Turcz.In different areas， to provide some academic basis for quality criterion and origin select of Artemisia halodendron. Method The methods of HPLC （mobile phase of acetonitrile-0.2% formic acid water（35：65）； The flow rate was 0.8 ml/min， the detection wavelength was 288 nm，column temperature 30℃）was used to determine the content of the signature ingredients-Isosakuranetin and Eriodictyol-7-methyl ether. According to the 2010 pharmacopoeia appendix method for determining the ethanol–soluble， moisture， impurities， ash content and its degree of rancidity. To evaluate the quality of Artemisia halodendron in a comprehensive way. Results There are many differences between all the medicines， especially the content of Isosakuranetin and Eriodictyol-7-methyl ether . Moisture content decreased with the increase of the preservation time， and other quality indexs remain within a certain range of differences. Conclusion The content of chemical compositions in Artemisia halodendron from different place has a significant difference and and Artemisia halodendron in Chifeng， Inner Mongolia could be used as a high quality germplasm.

Keywords：Artemisia halodendron Turcz.；Different habitats； Quality contrast； Isosakuranetin； Eriodictyol-7-methyl ether

差不嘎蒿為菊科植物差不嘎蒿Artemisia halodendron Turcz.的干燥成熟果實(shí)，又名有沙蒿、沙漠嘎、普勒罕達(dá)等，在《中國沙漠地區(qū)藥用植物》[1]、《中藥大辭典》[2] 、《全國中草藥匯編》[3]中均有收載。差不嘎蒿味辛性溫，歸肝、肺經(jīng)，具有抗炎[4]、止咳、祛痰、平喘[5]、解表、祛濕等功效，臨床用于治療腸癰腹痛、慢性盆腔炎、跌打損傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性氣管炎及支氣管哮喘等癥[1-3]。研究發(fā)現(xiàn)，差不嘎蒿藥材中含有大量的黃酮類成分[6-7]，并具有清除自由基、抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗病毒、抗突變、調(diào)節(jié)免疫、防治血管硬化、降血糖等功能[8]。對(duì)差不嘎蒿藥材祛痰平喘活性成分進(jìn)行追蹤[5]，確定其有效部位為總黃酮，其中，異櫻花素和圣草酚-7-甲醚含量較高，為指標(biāo)性成分[4]。

產(chǎn)地是影響中藥材質(zhì)量的重要因素之一，當(dāng)?shù)厮械纳鷳B(tài)因子均與藥材質(zhì)量有關(guān)，其中包括土壤、氣溫、降雨、光照、生態(tài)群落構(gòu)成等。大多數(shù)藥材經(jīng)過千百年來的篩選，已將產(chǎn)地和質(zhì)量緊密結(jié)合，即稱優(yōu)質(zhì)產(chǎn)地的藥材為道地藥材[9]。因此，產(chǎn)地作為中藥質(zhì)量的本草學(xué)屬性在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中有著不可或缺的重要地位[10]。迄今為止，內(nèi)蒙、甘肅、山西等地均被視為差不嘎蒿的主產(chǎn)區(qū)，但各地差不嘎蒿質(zhì)量差別的研究尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)選取差不嘎蒿主產(chǎn)區(qū)的19批不同產(chǎn)地的藥材，分別測(cè)定指標(biāo)性成分圣草酚-7-甲醚、異櫻花素的含量，藥材的醇溶性浸出物含量，穩(wěn)定性指標(biāo)酸敗度，安全性指標(biāo)水分、雜質(zhì)、灰分含量，對(duì)其進(jìn)行綜合全面的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC-20A高效液相色譜儀（DAD，Shimadzu Corporation）；雙列六孔電熱恒溫水浴箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；KQ-500DE超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；WG136型電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；AB265-S精密電子天平（Mettler Toledo）；JA2003電子分析天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）；DL-I-15電爐（天津市泰斯特儀器有限公司）；馬弗爐（弗恩森（北京）電爐有限公司）。

1.2 材料 本次研究用19批差不嘎蒿藥材供試品均由亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供，涵蓋了內(nèi)蒙古、山西、甘肅等地區(qū)在內(nèi)的差不嘎蒿主產(chǎn)區(qū)，于秋天果實(shí)成熟時(shí)采收果穗，曬干，搓出種子，除去雜質(zhì)。經(jīng)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所馬林教授鑒定，各批供試品均為差不嘎蒿，詳見表1。

異櫻花素對(duì)照品、圣草酚-7-甲醚對(duì)照品自制，經(jīng)面積歸一化法確定其純度均在98%以上；乙腈為色譜純；水為自制超純水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 指標(biāo)性成分含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)[4] 色譜柱：Phenomenex Extend（250mm× 4.6mm，5μm），檢測(cè)波長：288 nm；流動(dòng)相：乙腈-0.2%甲酸水溶液（35∶65）；流速0.8 ml/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μl。供試品中各相鄰色譜峰的分離度均符合要求，理論板數(shù)均不低于3000。對(duì)照品及樣品HPLC圖譜見圖1-3。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 取圣草酚-7-甲醚、異櫻花素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1ml含圣草酚-7-甲醚76.20μg、異櫻花素26.18μg的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 將各批差不嘎蒿藥材粉碎，過三號(hào)篩。取藥材粉末約0.5g，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶中，精密加85%乙醇20ml，稱定重量，超聲處理（功率500W，頻率40kHz）30min，放冷，用85%乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)眉状既芙猓⑥D(zhuǎn)移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.1.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取濃度為127.00μg/ml的圣草酚-7-甲醚對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10ml，濃度為53.36μg/mL的異櫻花素對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10ml，依次用甲醇定容到10ml容量瓶中，搖勻。6個(gè)不同濃度的對(duì)照液分別進(jìn)樣2次測(cè)定，每次10μl。以Y為峰面積，X為對(duì)照品進(jìn)樣量，得圣草酚-7-甲醚回歸方程為Y=2517.54X+16207.66（R2=0.9993），線性范圍：0.1270～1.2700μg/ml；異櫻花素回歸方程為Y=3754067.83X +15469.71（R2 =0.9995），線性范圍0.0534～0.5336μg/ml。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 取76.20μg/ml圣草酚-7-甲醚、26.18μg/mL異櫻花素對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10μL，按照“2.1.1”項(xiàng)所述色譜條件測(cè)定，RSD分別為：0.47%、0.66%，表明精密度良好。

2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批差不嘎蒿種子粉末共6份，按照“2.1.3”項(xiàng)所述制成供試品溶液。測(cè)得圣草酚-7-甲醚、異櫻花素含量的RSD分別為0.84%、0.98%。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份差不噶蒿種子供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12、16、20、24、32、40、48h后進(jìn)行HPLC測(cè)定。結(jié)果圣草酚-7-甲醚、異櫻花素含量的RSD分別為0.65%、0.78%。表明供試品溶液在48h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.1.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知圣草酚-7-甲醚、異櫻花素含量的差不嘎蒿種子樣品0.25g，精密稱定，分別加入對(duì)照品溶液適量，按“2.1.3”項(xiàng)下方法操作，吸取10μL 進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果圣草酚-7-甲醚、異櫻花素的平均回收率分別為101.3%、98.9%，RSD 分別為1.05%、1.29%。

2.1.9 樣品測(cè)定 取不同產(chǎn)地差不嘎蒿藥材藥材，按“2.1.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行供試品溶液制備，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。結(jié)果見表2。

2.2 其他質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定

按照2010年版《中國藥典》（一部）中提供的方法，將差不嘎蒿粉碎后，分別測(cè)定其醇溶性浸出物含量、水分含量、雜質(zhì)含量、灰分含量及其酸敗度。結(jié)果見表2。

3 討論

從差不嘎蒿的各種成分含量數(shù)據(jù)可知，不同地區(qū)藥材質(zhì)量是有差異性的。HPLC含量檢測(cè)結(jié)果顯示，圣草酚-7-甲醚含量以S4、S5、S14樣品較高，S3樣品含量最低；異櫻花素同樣是S4樣品含量最高，其次為S5，再次是S14、S15，其中S19含量最低。以上結(jié)果表明，內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市的樣品含指標(biāo)性成分較高，質(zhì)量較好。醇溶性浸出物檢測(cè)結(jié)果顯示，S14、S16藥材樣品含量較高，內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市樣品含量緊隨其次。

由于其他項(xiàng)含量測(cè)定數(shù)據(jù)量過大，故需要通過數(shù)理統(tǒng)計(jì)的方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，從而科學(xué)的表征這些差異。借助統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0將有關(guān)差不嘎蒿質(zhì)量的各項(xiàng)數(shù)據(jù)統(tǒng)一進(jìn)行Zscores標(biāo)準(zhǔn)化處理，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化處理后的數(shù)據(jù)進(jìn)行分層聚類分析。根據(jù)數(shù)據(jù)特點(diǎn)，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行了Q型聚類分析，并繪制聚類樹狀圖，來評(píng)價(jià)不同地區(qū)差不嘎蒿質(zhì)量的相似度，見圖4。

從圖4可見，S10、S11、S6、S8、S7、S12和指標(biāo)性物質(zhì)含量最高的S4樣品聚為一類；樣品S1自成一類，其他地區(qū)樣品大致聚為一類。聚類結(jié)果顯示，該藥材質(zhì)量雖有差異，但不具有經(jīng)緯地帶性，考慮是各樣品生長環(huán)境導(dǎo)致植物體內(nèi)成分的代謝合成差異。

檢測(cè)結(jié)果顯示，該藥材含水量隨著儲(chǔ)藏年份的增加會(huì)逐年減少，在2.46%～7.85%之間，藥材表面有膠質(zhì)層包裹，與其他種子類藥材水分限度相差不多[11]；雜質(zhì)含量從4.98%～9.67%不等，整體雜質(zhì)含量偏高，其中 S4藥材雜質(zhì)含量最高；總灰分是藥材中各種無機(jī)成分總量的指標(biāo)，酸不溶性灰分大部分為沾染的泥沙。結(jié)果顯示，總灰分含量在5.90%～8.22%之間，酸不溶性灰分含量在0.15%～0.40%在之間，整體偏高，S4、S14、S16藥材樣品質(zhì)量較好。綜合統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，以安全性指標(biāo)評(píng)判，內(nèi)蒙古中部地區(qū)的樣品質(zhì)量較好。

差不嘎蒿酸敗度測(cè)定中，酸值為1.70～5.45之間，羰基值為1.999～8.146之間，過氧化值為0.041～0.156之間。與2010年版《中國藥典》一部收載的6種種子類藥材（郁李仁、柏子仁、桃仁、核桃仁、蓖麻子、榧子）酸敗度限度[11]以及國家動(dòng)植物油脂標(biāo)準(zhǔn)限度[12-13]相比，多數(shù)數(shù)值偏低，說明本藥材中所含游離脂肪酸、低分子醛類或酮類及過氧化物較少，在一定程度上反映該藥材不易酸敗。分析藥材不易酸敗的原因可能與差不嘎蒿藥材外壁包裹膠膜層有關(guān)。

以指標(biāo)性物質(zhì)和醇溶性浸出物含量為主，綜合各個(gè)安全性指標(biāo)對(duì)不同產(chǎn)地差不嘎蒿藥材質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示各有優(yōu)劣。但整體來說，內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市藥材品質(zhì)最好，陜西省榆林市藥材質(zhì)量相對(duì)較差。本研究以八個(gè)指標(biāo)首次對(duì)19批藥材樣本進(jìn)行了全面的質(zhì)量對(duì)比評(píng)價(jià)，方法準(zhǔn)確、穩(wěn)定、重復(fù)性好，通過產(chǎn)地和指標(biāo)性成分含量的相關(guān)試驗(yàn)分析，在臨床用藥方面提供一定的參考，同時(shí)為差不嘎蒿藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立、尋找優(yōu)質(zhì)產(chǎn)地實(shí)現(xiàn)GAP種植提供了依據(jù)。

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（收稿日期：2015.05.27）